Name: ex vivo expansion of tumor-reactive t cells by means of bryostatin 1/ionomycin and the common gamma chain cytokines formulation
Uploaded: 2011-01-14T17:00:00
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यह काम एनआईएच R01 CA104757 अनुदान (महाराष्ट्र Manjili) द्वारा समर्थित किया गया. हम कृतज्ञता VCU Massey कैंसर केंद्र के समर्थन और कैंसर अनुसंधान के लिए राष्ट्रमंडल फाउंडेशन को स्वीकार करते हैं.

1. 5 लिम्फोसाइटों के अलगाव <ol><li> पृथक draining ट्यूमर लिम्फ नोड्स या ट्यूमर असर FVBN202 ट्रांसजेनिक चूहों से spleens और RPMI1640 बर्फ ठंड में एकल कक्ष निलंबन तैयार 10% FBS के साथ पूरक. Polystyrene ट्यूब की तुलना में अधिक से अधिक टी सेल...

<ol>
	<li>Goodell, V., Waisman, J., Salazar, L. G., de la Rosa, C., Link, J., Coveler, A. L., Childs, J. S., Fintak, P. A., Higgins, D. M., Disis, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Level+of+HER-2/neu+protein+expression+in+breast+cancer+may+affect+the+development+of+endogenous+HER-2/neu-specific+immunity.">Level of HER-2/neu protein expression in breast cancer may affect the development of endogenous HER-2/neu-specific immunity.</a> Mol Cancer Ther. 7, 449-454 (2008).</li><li>Disis, M. L., Knutson, K. L., Schiffman, K., Rinn, K., McNeel, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existent+immunity+to+the+HER-2/neu+oncogenic+protein+in+patients+with+HER-2/neu+overexpressing+breast+and+ovarian+cancer.">Pre-existent immunity to the HER-2/neu oncogenic protein in patients with HER-2/neu overexpressing breast and ovarian cancer.</a> Breast Cancer Res Treat. 62, 245-252 (2000).</li><li>Liu, S., Riley, J., Rosenberg, S., Parkhurst, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+common+gamma-chain+cytokines,+interleukin-2,+interleukin-7,+and+interleukin-15+for+the+in+vitro+generation+of+human+tumor-reactive+T+lymphocytes+for+adoptive+cell+transfer+therapy.">Comparison of common gamma-chain cytokines, interleukin-2, interleukin-7, and interleukin-15 for the in vitro generation of human tumor-reactive T lymphocytes for adoptive cell transfer therapy.</a> J. Immunother. 29, 284-293 (2006).</li><li>Bear, H. D., Roberts, J., Cornell, D., Tombes, M. B., Kyle, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+immunotherapy+of+cancer+with+pharmacologically+activated+lymph+node+lymphocytes:+a+pilot+clinical+trial.">Adoptive immunotherapy of cancer with pharmacologically activated lymph node lymphocytes: a pilot clinical trial.</a> Cancer Immunol Immunother. 5, 269-274 (2001).</li><li>Morales, J. K., Kmieciak, M., Graham, L., Feldmesser, M., Bear, H. D., Manjili, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+transfer+of+HER2/neu-specific+T+cells+expanded+with+alternating+gamma+chain+cytokines+mediate+tumor+regression+when+combined+with+the+depletion+of+myeloid-derived+suppressor+cells.">Adoptive transfer of HER2/neu-specific T cells expanded with alternating gamma chain cytokines mediate tumor regression when combined with the depletion of myeloid-derived suppressor cells.</a> Cancer Immunol Immunother. 58, 941-953 (2009).</li><li>Cha, E., Graham, L., Manjili, M. H., Bear, H. D., Guy, C. T., Webster, M. A., Schaller, M., Parsons, T. J., Cardiff, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+++IL-15+are+superior+to+IL-2+for+the+ex+vivo+expansion+of+4T1+mammary+carcinoma-specific+T+cells+with+greater+efficacy+against+tumors+in+vivo.">IL-7 + IL-15 are superior to IL-2 for the ex vivo expansion of 4T1 mammary carcinoma-specific T cells with greater efficacy against tumors in vivo.</a> Breast Cancer Res Treat. 89, 10578-10582 (2009).</li><li>Kmieciak, M., Morales, J. K., Morales, J., Bolesta, E., Grimes, M., Manjili, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Danger+signals+and+nonself+entity+of+tumor+antigen+are+both+required+for+eliciting+effective+immune+responses+against+HER-2/neu+positive+mammary+carcinoma:+implications+for+vaccine+design.">Danger signals and nonself entity of tumor antigen are both required for eliciting effective immune responses against HER-2/neu positive mammary carcinoma: implications for vaccine design.</a> Cancer Immunol Immunother. 57, 1391-1398 (2008).</li><li>Stern, J. B., Smith, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-2+induction+of+T-cell+G1+progression+and+c-myb+expression.">Interleukin-2 induction of T-cell G1 progression and c-myb expression.</a> Science. 233, 203-206 (1986).</li><li>Kittipatarin, C., Khaled, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ex+vivo+expansion+of+memory+CD8+T+cells+from+lymph+nodes+or+spleen+through+in+vitro+culture+with+interleukin-7.">ex vivo expansion of memory CD8 T cells from lymph nodes or spleen through in vitro culture with interleukin-7.</a> J Immunol Methods. 344, 45-57 (2009).</li><li>Kokaji, A. I., Hockley, D. L., Kane, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-15+transpresentation+augments+CD8++T+cell+activation+and+is+required+for+optimal+recall+responses+by+central+memory+CD8++T+cells.">IL-15 transpresentation augments CD8+ T cell activation and is required for optimal recall responses by central memory CD8+ T cells.</a> J Immunol. 180, 4391-4401 (2008).</li><li>Le, H. K., Graham, L., Miller, C. H., Kmieciak, M., Manjili, M. H., Bear, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incubation+of+antigen-sensitized+T+lymphocytes+activated+with+bryostatin+1+++ionomycin+in+IL-7+++IL-15+increases+yield+of+cells+capable+of+inducing+regression+of+melanoma+metastases+compared+to+culture+in+IL-2.">Incubation of antigen-sensitized T lymphocytes activated with bryostatin 1 + ionomycin in IL-7 + IL-15 increases yield of cells capable of inducing regression of melanoma metastases compared to culture in IL-2.</a> Cancer Immunol Immunother. 58, 1565-1576 (2009).</li></ol>

ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की विरोधी ट्यूमर effector समारोह के साथ चयनात्मक विस्तार प्रस्तावित प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए बी के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है / मैं सक्रियण और गामा श्रृंखला आईएल -2...

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bryostatin 1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>B7431-10ug</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ionomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>407950</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse IL-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PeproTech</td>
<td>217-17</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse IL-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PeproTech</td>
<td>210-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Human IL-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PeproTech</td>
<td>200-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11875</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gemini</td>
<td>100-106</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>30-002-CI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L- glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25030081</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&beta;- mercaptoethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M7522</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>anti-CD16/32 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biolegend</td>
<td>101302</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Pharmingen</td>
<td>556547</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-CD4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biolegend</td>
<td>100406</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PE-CD8</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biolegend</td>
<td>100708</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>anti-c-Erb2/c&#x2013;Neu</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>OP16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PE- anti mouse IgG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biolegend</td>
<td>405307</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>formaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Polysciences</td>
<td>04018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemocytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hycor</td>
<td>87144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Light microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>V200073</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse IFN-&gamma; ELISA set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Pharmingen</td>
<td>555138</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell culture flasks</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Greiner</td>
<td>658175</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

ex vivo expansion of tumor-reactive t cells by means of bryostatin 1/ionomycin and the common gamma chain cytokines formulation

यह बताया गया है कि स्तन कैंसर के रोगियों, उनके ट्यूमर 1,2 के खिलाफ पहले से मौजूद प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है. हालांकि, इस तरह के प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए या स्तन कैंसर के विकास पुनरावृत्ति के खिलाफ पूरी सुरक्षा प्रदान करने में विफल. ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की आवृत्ति को बढ़ाने के द्वारा इस समस्या पर काबू पाने के लिए, दत्तक immunotherapy के नियोजित किया गया है. प्रोटोकॉल की एक किस्म ट्यूमर विशेष टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए इस्तेमाल किया गया है. इन प्रोटोकॉल, तथापि, प्रतिजन विशेष टी कोशिकाओं की सक्रियता के लिए ट्यूमर प्रतिजनों पूर्व vivo का उपयोग करने के लिए प्रतिबंधित कर रहे हैं. अभी हाल ही में, आईएल -2, आईएल -7, आईएल 15, और आईएल-21 के रूप में आम गामा श्रृंखला साइटोकिन्स विरोधी ट्यूमर प्रतिरक्षा 3 प्रतिक्रियाओं की वृद्धि के लिए किया गया है अकेले या संयोजन में उपयोग किया. हालांकि, यह स्पष्ट नहीं है सूत्रीकरण ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए सबसे अच्छा क्या काम करेगा. यहाँ हम चयनात्मक सक्रियण और FVBN202 HER-2/neu स्तन कैंसर के दत्तक टी सेल थेरेपी में उपयोग के लिए सकारात्मक स्तन कार्सिनोमा के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल से ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं. bryostatin-1/ionomycin (बी / मैं) और आईएल -2 के साथ 16 घंटे के लिए ट्यूमर प्रतिजनों के अभाव में टी कोशिकाओं की सक्रियता प्रोटोकॉल शामिल हैं. बी / मैं सक्रियण intracellular संकेतों mimics कि प्रोटीन kinase सी गतिविधि और intracellular कैल्शियम में वृद्धि, क्रमशः 4 टी सेल सक्रियण में परिणाम . इस प्रोटोकॉल विशेष रूप से ट्यूमर विशेष टी कोशिकाओं को सक्रिय है, जबकि अप्रासंगिक टी कोशिकाओं की मौत हो गई. बी / मैं सक्रिय टी कोशिकाओं आईएल-7 और आईएल -15 के साथ 24 घंटे के लिए सुसंस्कृत हैं और फिर आईएल-2 के साथ स्पंदित है. 24 घंटे के बाद, टी कोशिकाओं को धोया हैं, विभाजन, और के साथ सुसंस्कृत आईएल -7 + अतिरिक्त 4 दिनों के लिए आईएल-15. पूर्व vivo विस्तार टी कोशिकाओं के ट्यूमर विशिष्टता और विरोधी ट्यूमर प्रभावकारिता निर्धारित किया जाता है.

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Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

के लिए एक कुशल प्रोटोकॉल<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; ट्यूमर draining लिम्फ नोड्स या अन्य ट्यूमर असर मेजबान के माध्यमिक lymphoid ऊतकों से ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की विस्तार वर्णित है. इस प्रोटोकॉल चुनिंदा ट्यूमर स्तन कैंसर के दत्तक immunotherapy में उपयोग के लिए विशेष टी कोशिकाओं फैलता है.

पूर्व ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की Bryostatin 1/Ionomycin का मतलब द्वारा vivo विस्तार और आम गामा चेन साइटोकिन्स निरूपण

It was reported that breast cancer patients have pre-existing immune responses against their tumors1,2. However, such immune responses fail to provide ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

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एचएलए पुलिस महानिरीक्षक के आधार पर कुशल के लिए कृत्रिम प्रतिजन कोशिकाओं पूर्व vivo मानव सीटीएल का विस्तार

CTL with optimal effector function play critical roles in mediating protection against various intracellular infections and cancer. However, individuals ...

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Widefield और confocal सूक्ष्मदर्शी के साथ murine लसीका नोड स्लाइसें में टी कोशिकाओं की पूर्व vivo इमेजिंग

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

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मानव परिधीय रक्त का विस्तार γδ टी Zoledronate का उपयोग कक्ष

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Artificial Antigen Presenting Cell (aAPC) Mediated Activation and Expansion of Natural Killer T Cells

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कृत्रिम एंटीजन सेल (aAPC) मध्यस्थता सक्रियकरण और प्राकृतिक हत्यारा टी कोशिकाओं के विस्तार पेश

Natural killer T (NKT) cells are a unique subset of T cells that display markers characteristic of both natural killer (NK) cells and T cells1. Unlike ...

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

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के पृथक्करण<em&gt; प्लाज्मोडियम फाल्सीपेरम</em&gt; चुंबकीय साधन के द्वारा देर से मंच संक्रमित एरिथ्रोसाइट्स

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

एचआईवी -1 संक्रमित सीडी 4 की सहज सेंसिंग का आकलन<sup&gt; +</sup&gt; एक का उपयोग Plasmacytoid वृक्ष के समान कोशिकाओं द्वारा टी कोशिकाओं<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; प्रणाली सह संस्कृति।

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

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एक<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; तीव्र मस्तिष्क स्लाइस में एक Oligodendrocyte का निर्देशन टी-सेल हमले के मॉडल

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

टी कोशिकाओं वृक्ष के समान कोशिकाओं से Transinfection द्वारा बैक्टीरिया पर कब्जा

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

Isolation and Ex Vivo Culture of V&#948;1+CD4+&#947;&#948; T Cells, an Extrathymic &#945;&#946;T-cell Progenitor

Isolation and Ex Vivo Culture of VÃƒÅ½Ã‚Â´1+CD4+ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells, an Extrathymic ÃƒÅ½Ã‚Â±ÃƒÅ½Ã‚Â²T-cell Progenitor

अलगाव और<em&gt; पूर्व Vivo</emVδ1 की&gt; संस्कृति<sup&gt; +</sup&gt; सीडी 4<sup&gt; +</sup&gt; Γδ टी कोशिकाओं, एक Extrathymic αβT सेल पूर्वज

The thymus, the primary organ for the generation of &#945;&#946; T cells and backbone of the adaptive immune system in vertebrates, has long been ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

मानव endocervical गामा डेल्टा टी कोशिकाओं के अलगाव और प्रवाह cytometric विश्लेषण

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...