Name: ex vivo expansion of tumor-reactive t cells by means of bryostatin 1/ionomycin and the common gamma chain cytokines formulation
Uploaded: 2011-01-14T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation at JoVE.com

Эта работа была поддержана NIH R01 CA104757 Грант (MH Manjili). Мы выражаем искреннюю благодарность поддержке VCU Massey онкологический центр и Фонд Содружества по исследованию рака.

1. Выделение лимфоцитов 5 <ol><li> Изолировать опухоли дренаж лимфатических узлов или селезенки с опухолями FVBN202 трансгенных мышей и подготовить суспензии отдельных клеток в ледяной RPMI1640 с добавлением 10% FBS. B / I активации в 50-мл полипропиленовые трубы конической результаты в большей ...

<ol>
	<li>Goodell, V., Waisman, J., Salazar, L. G., de la Rosa, C., Link, J., Coveler, A. L., Childs, J. S., Fintak, P. A., Higgins, D. M., Disis, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Level+of+HER-2/neu+protein+expression+in+breast+cancer+may+affect+the+development+of+endogenous+HER-2/neu-specific+immunity.">Level of HER-2/neu protein expression in breast cancer may affect the development of endogenous HER-2/neu-specific immunity.</a> Mol Cancer Ther. 7, 449-454 (2008).</li><li>Disis, M. L., Knutson, K. L., Schiffman, K., Rinn, K., McNeel, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existent+immunity+to+the+HER-2/neu+oncogenic+protein+in+patients+with+HER-2/neu+overexpressing+breast+and+ovarian+cancer.">Pre-existent immunity to the HER-2/neu oncogenic protein in patients with HER-2/neu overexpressing breast and ovarian cancer.</a> Breast Cancer Res Treat. 62, 245-252 (2000).</li><li>Liu, S., Riley, J., Rosenberg, S., Parkhurst, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+common+gamma-chain+cytokines,+interleukin-2,+interleukin-7,+and+interleukin-15+for+the+in+vitro+generation+of+human+tumor-reactive+T+lymphocytes+for+adoptive+cell+transfer+therapy.">Comparison of common gamma-chain cytokines, interleukin-2, interleukin-7, and interleukin-15 for the in vitro generation of human tumor-reactive T lymphocytes for adoptive cell transfer therapy.</a> J. Immunother. 29, 284-293 (2006).</li><li>Bear, H. D., Roberts, J., Cornell, D., Tombes, M. B., Kyle, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+immunotherapy+of+cancer+with+pharmacologically+activated+lymph+node+lymphocytes:+a+pilot+clinical+trial.">Adoptive immunotherapy of cancer with pharmacologically activated lymph node lymphocytes: a pilot clinical trial.</a> Cancer Immunol Immunother. 5, 269-274 (2001).</li><li>Morales, J. K., Kmieciak, M., Graham, L., Feldmesser, M., Bear, H. D., Manjili, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+transfer+of+HER2/neu-specific+T+cells+expanded+with+alternating+gamma+chain+cytokines+mediate+tumor+regression+when+combined+with+the+depletion+of+myeloid-derived+suppressor+cells.">Adoptive transfer of HER2/neu-specific T cells expanded with alternating gamma chain cytokines mediate tumor regression when combined with the depletion of myeloid-derived suppressor cells.</a> Cancer Immunol Immunother. 58, 941-953 (2009).</li><li>Cha, E., Graham, L., Manjili, M. H., Bear, H. D., Guy, C. T., Webster, M. A., Schaller, M., Parsons, T. J., Cardiff, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+++IL-15+are+superior+to+IL-2+for+the+ex+vivo+expansion+of+4T1+mammary+carcinoma-specific+T+cells+with+greater+efficacy+against+tumors+in+vivo.">IL-7 + IL-15 are superior to IL-2 for the ex vivo expansion of 4T1 mammary carcinoma-specific T cells with greater efficacy against tumors in vivo.</a> Breast Cancer Res Treat. 89, 10578-10582 (2009).</li><li>Kmieciak, M., Morales, J. K., Morales, J., Bolesta, E., Grimes, M., Manjili, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Danger+signals+and+nonself+entity+of+tumor+antigen+are+both+required+for+eliciting+effective+immune+responses+against+HER-2/neu+positive+mammary+carcinoma:+implications+for+vaccine+design.">Danger signals and nonself entity of tumor antigen are both required for eliciting effective immune responses against HER-2/neu positive mammary carcinoma: implications for vaccine design.</a> Cancer Immunol Immunother. 57, 1391-1398 (2008).</li><li>Stern, J. B., Smith, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-2+induction+of+T-cell+G1+progression+and+c-myb+expression.">Interleukin-2 induction of T-cell G1 progression and c-myb expression.</a> Science. 233, 203-206 (1986).</li><li>Kittipatarin, C., Khaled, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ex+vivo+expansion+of+memory+CD8+T+cells+from+lymph+nodes+or+spleen+through+in+vitro+culture+with+interleukin-7.">ex vivo expansion of memory CD8 T cells from lymph nodes or spleen through in vitro culture with interleukin-7.</a> J Immunol Methods. 344, 45-57 (2009).</li><li>Kokaji, A. I., Hockley, D. L., Kane, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-15+transpresentation+augments+CD8++T+cell+activation+and+is+required+for+optimal+recall+responses+by+central+memory+CD8++T+cells.">IL-15 transpresentation augments CD8+ T cell activation and is required for optimal recall responses by central memory CD8+ T cells.</a> J Immunol. 180, 4391-4401 (2008).</li><li>Le, H. K., Graham, L., Miller, C. H., Kmieciak, M., Manjili, M. H., Bear, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incubation+of+antigen-sensitized+T+lymphocytes+activated+with+bryostatin+1+++ionomycin+in+IL-7+++IL-15+increases+yield+of+cells+capable+of+inducing+regression+of+melanoma+metastases+compared+to+culture+in+IL-2.">Incubation of antigen-sensitized T lymphocytes activated with bryostatin 1 + ionomycin in IL-7 + IL-15 increases yield of cells capable of inducing regression of melanoma metastases compared to culture in IL-2.</a> Cancer Immunol Immunother. 58, 1565-1576 (2009).</li></ol>

Селективный расширение опухоли-реактивный Т-клеток с эффекторной противоопухолевой функция может быть достигнуто за счет предлагаемого протокола использованием B / I активации и экс расширения естественных условиях с гамма цепи цитокинов IL-2, ИЛ-7 и ИЛ-15. Хотя ИЛ-2 Т фактор рост...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bryostatin 1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>B7431-10ug</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ionomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>407950</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse IL-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PeproTech</td>
<td>217-17</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse IL-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PeproTech</td>
<td>210-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Human IL-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PeproTech</td>
<td>200-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11875</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gemini</td>
<td>100-106</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>30-002-CI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L- glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25030081</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&beta;- mercaptoethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M7522</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>anti-CD16/32 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biolegend</td>
<td>101302</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Pharmingen</td>
<td>556547</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-CD4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biolegend</td>
<td>100406</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PE-CD8</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biolegend</td>
<td>100708</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>anti-c-Erb2/c&#x2013;Neu</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>OP16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PE- anti mouse IgG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biolegend</td>
<td>405307</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>formaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Polysciences</td>
<td>04018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemocytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hycor</td>
<td>87144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Light microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>V200073</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse IFN-&gamma; ELISA set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Pharmingen</td>
<td>555138</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell culture flasks</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Greiner</td>
<td>658175</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

ex vivo expansion of tumor-reactive t cells by means of bryostatin 1/ionomycin and the common gamma chain cytokines formulation

Как сообщалось, больных раком молочной железы у уже существующих иммунного ответа против 1,2 опухолей. Однако такие иммунные реакции не обеспечивают полную защиту от развития или рецидива рака молочной железы. Чтобы преодолеть эту проблему путем увеличения частоты опухолевых-реактивных Т-клеток, усыновителей иммунотерапии был принят на работу. Различные протоколы были использованы для расширения опухолеспецифические Т-клеток. Эти протоколы, однако, ограничивается использование опухоли естественных бывший антигенов для активации антиген-специфических Т-клеток. Совсем недавно, общая гамма цепи цитокинов, таких как IL-2, ИЛ-7, Ил-15 и Ил-21 были использованы отдельно или в комбинации для повышения противоопухолевого иммунного ответа 3. Тем не менее, не ясно, что формулировка будет работать лучше всего на расширение опухоли реактивных Т-клеток. Здесь мы приводим протокол для селективной активации и расширению опухоли реактивных Т-клеток от FVBN202 трансгенной мышиной модели HER-2/neu положительным раком молочной железы для использования в приемных Т-клеточной терапии рака молочной железы. Протокол включает в себя активацию Т-клеток с bryostatin-1/ionomycin (B / I) и ИЛ-2 при отсутствии опухолевых антигенов в течение 16 часов. B / I имитирует активации внутриклеточных сигналов, которые приводят к активации Т-клеток за счет увеличения протеинкиназы С активности и внутриклеточного кальция, соответственно, 4. Этот протокол специально активирует опухоль-специфический Т-клеток, убивая не имеет значения Т-клеток. B / I активированных Т-клетки культивировали с IL-7 и ИЛ-15 в течение 24 часов, а затем импульсным ИЛ-2. После 24 часов, Т-клетки промывают, раскол, и культивируют с IL-7 + ИЛ-15 для 4 дополнительных дней. Опухоль-специфичность и противоопухолевой эффективности исключая виво расширил Т-клеток определяется.

Watch this Scientific Journal Video about Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation at JoVE.com

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

Эффективный протокол для<em&gt; Исключая виво</em&gt; Расширение опухоли реактивных Т-клеток из опухоли дренаж лимфатических узлов или других вторичных лимфоидных тканей с опухолями хостов описано. Этот протокол расширяет выборочно опухолеспецифические Т-клеток для использования в приемных иммунотерапии рака молочной железы.

Экс естественных Расширение опухоли-реактивных Т-клеток посредством систем бриостатин 1/Ionomycin и общие гамма Сеть Цитокины Разработка

It was reported that breast cancer patients have pre-existing immune responses against their tumors1,2. However, such immune responses fail to provide ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-Ig основе искусственного антиген представляющих клеток для эффективного Исключая виво Расширение прав CTL

CTL with optimal effector function play critical roles in mediating protection against various intracellular infections and cancer. However, individuals ...

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Экс естественных изображений Т-клеток у мышей фрагменты лимфатических узлов с Широкоугольные и конфокальной Микроскопы

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Expansion of Human Peripheral Blood  &#947;&#948; T Cells using Zoledronate

Расширение периферической крови человека γδ T клеток с использованием Zoledronate

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Artificial Antigen Presenting Cell (aAPC) Mediated Activation and Expansion of Natural Killer T Cells

Artificial Antigen Presenting Cell aAPC Mediated Activation and Expansion of Natural Killer T Cells

Искусственные антигенпрезентирующей клетки (AAPC) Активация опосредованной и расширение естественных клеток-T убийца

Natural killer T (NKT) cells are a unique subset of T cells that display markers characteristic of both natural killer (NK) cells and T cells1. Unlike ...

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Разделение<em&gt; Plasmodium тропической</em&gt; Поздняя стадия-инфицированных эритроцитов магнитных средств

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Оценка Врожденная зондирование инфицированных ВИЧ-1 CD4<sup&gt; +</sup&gt; Т-клеток плазмоцитов дендритных клеток с помощью<em&gt; Экс естественных</em&gt; Совместное культивирование системы.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

<em&gt; Экс естественных</em&gt; Модель олигодендроцит-направленного Т-клеток Атака в острых мозга Ломтики

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

Т-клеток Захват бактерий Transinfection от дендритных клеток

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

Isolation and Ex Vivo Culture of V&#948;1+CD4+&#947;&#948; T Cells, an Extrathymic &#945;&#946;T-cell Progenitor

Isolation and Ex Vivo Culture of V&#948;1+CD4+&#947;&#948; T Cells, an Extrathymic &#945;&#946;T-cell Progenitor

Выделение и<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Культура Vδ1<sup&gt; +</sup&gt; CD4<sup&gt; +</sup&gt; γδ Т-клеток, А.Н. Extrathymic αβT-клеток-предшественников

The thymus, the primary organ for the generation of &#945;&#946; T cells and backbone of the adaptive immune system in vertebrates, has long been ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

Выделение и Flow Cytometric Анализ человеческого Endocervical Гамма-Дельта Т-клеток

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...