Name: microdissection of black widow spider silk-producing glands
Uploaded: 2011-01-11T23:59:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door een NSF RUI Grant MCB-0950372 recht moleculaire karakterisering van Black Widow Spider Silks.

1. Verlamming van de spin en het isolement van de buik <ol><li> Overdracht van de spin van een glazen pot in een kartonnen doos bekleed met kunststof (Figuur 1A). We meestal verzamelen spinnen uit houtstapels, garages of struiken en het huis ze in het lab in glazen potten. Omdat de spin niet kan beklimmen de kunststof bekleding, biedt een efficiënte methode om de spin transfer van een glazen pot of koffie kan in een kleiner flesje voor verlamming doeleinden. Terwijl de behandeling van de spin op dit punt, moet je het...

<ol>
	<li>Vollrath, F., Knight, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Int. J. Biol. Macromol. 24, 243-243 (1999).</li><li>Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J. Exp. Biol. 202, 3295-3295 (1999).</li><li>Gosline, J. M., DeMont, M. E., Denny, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Endeavour. 10, 31-31 (1986).</li><li>Hinman, M. B., Jones, J. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Trends Biotechnol. 18 (9), 374-374 (2000).</li><li>Lewis, R. V., Xu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 87, 7120-7120 (1990).</li><li>Colgin, M. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Protein Sci. 7 (3), 667-667 (1998).</li><li>Tian, M., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Appl. Phys. A-Mater. 82, 265-265 (2006).</li><li>Hu, X., Lawrence, B., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biochemistry. 44 (30), 10020-10020 (2005).</li><li>Vasanthavada, K., Hu, X., Falick, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Biol Chem. 282 (48), 35088-35088 (2007).</li><li>Hayashi, C. Y., Blackledge, T. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mol. Biol. Evol.. 21 (10), 1950-1950 (2004).</li><li>Blasingame, E., Tuton-Blasingame, T., Larkin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Biol Chem. 284 (42), 29097-29097 (2009).</li></ol>

Onze methodologie voor de microdissectie van de zijde-producerende klieren van de zwarte weduwe spin biedt een effectief middel om zeer zuivere zijde-producerende klieren te verkrijgen. Dissecties kan worden voltooid in 1,5 tot 3 uur, waardoor een complete set van de zeven verschillende zijde-producerende klieren van cobweavers. Het verkrijgen van zeer zuivere zijde-klier samples maakt onderzoekers de mogelijkheid om een ​​breed scala van biochemische studies, waaronder de identificatie van nieuwe zijde of chaperonn...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sodium chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EM Science</td>
<td>SX0420-1</td>
<td>0.1 M in water</td>
</tr>
<tr>
<td>Diethyl pyrocarbonate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D-5758 - 5 ml</td>
<td>0.1% v/v</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium citrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S1804 - 1 kg</td>
<td>0.015 M in water</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>Leica MZ16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Digital microscope camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>DFC320</td>
<td>Software - Leica Application Suite v2.8.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Vannas scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>500260</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless steel forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>501764</td>
<td>Mini Dumont #M5S</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect pins</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Indigo Instruments</td>
<td>33414-2</td>
<td>Insect pins #2</td>
</tr>
<tr>
<td>Small or large dissection dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Living Systems Instrumentation</td>
<td>DD-50-S or DD-90-S</td>
<td>52 mm diameter x 18 mm H (Sylgard Depth ~6mm) or 93 mm x 22 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Drosophila culture vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carolina Biological Supply Company</td>
<td>FR-17-3076</td>
<td>Size is 31.75 mm diameter x 101.6 mm</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

microdissection of black widow spider silk-producing glands

Moderne spinnen draaien high-performance zijde vezels met een breed scala aan biologische functies, met inbegrip van voortbeweging, prooi te vangen en de bescherming van de ontwikkeling van nakomelingen 1,2. Spinnen deze taken uitvoeren door het draaien van een aantal verschillende soorten vezels die diverse mechanische eigenschappen hebben. Een dergelijke specialisatie van vezeltypen heeft plaatsgevonden door de evolutie van de verschillende zijde-producerende klieren, die fungeren als kleine biofactories. Deze biofactories fabriceren en op te slaan grote hoeveelheden van de zijde eiwitten voor vezelproductie. Door middel van een complexe reeks van biochemische gebeurtenissen, worden deze zijde eiwitten omgezet van een vloeistof in een vaste stof bij de extrusie. Mechanische studies hebben aangetoond dat de spin zijde zijn sterker dan hoogwaardig staal 3. Analyses van de relatie tussen de structuur en functie van spin zijden draden te begrijpen is gebleken dat spindraad bestaat grotendeels uit eiwitten of fibroins, dat blok herhaalt hebben binnen hun eiwitsequenties 4. Gemeenschappelijke moleculaire handtekeningen die bijdragen aan de ongelooflijke treksterkte en uitbreidbaarheid van spider zijde worden ontrafeld door de analyses van vertaalde zijde cDNA&#39;s. Gezien de buitengewone eigenschappen van het materiaal van de spin zijde, zijn onderzoekslaboratoria over de hele wereld racen te begrijpen en de draaiende proces na te bootsen om synthetische zijde vezels voor commerciële, militaire en industriële toepassingen. Een van de belangrijkste uitdagingen voor spinning kunstmatige spindraad in het onderzoek lab gaat om een ​​volledig inzicht in de biochemische processen die optreden tijdens de extrusie van de vezels van de zijde-producerende klieren. Hier presenteren we een methode voor de isolatie van de zeven verschillende zijde-producerende klieren van de cobweaving zwarte weduwe spin, die de grote en kleine ampullate klieren bevat [produceert dragline en steigers zijde] 5,6, tubuliform [synthetiseert ei geval zijde] 7 , 8, flagelliform [onbekende functie in cob-wevers], aggregaat [maakt lijm zijde], aciniform [synthetiseert prooi inpakken en ei bij discussies] 9 en peervormig [produceert attachment schijf zijde] 10. Deze aanpak is gebaseerd op verlamming van de spin met koolzuurgas, na afscheiding van het kopborststuk van de buik, en microdissectie van de buik aan de zijde-producerende klieren te verkrijgen. Na de scheiding van de verschillende zijde-producerende klieren, kunnen deze weefsels worden gebruikt om verschillende macromoleculen voor verschillende biochemische analyses, met inbegrip van kwantitatieve real-time PCR, Noord-en West-blotting, massaspectrometrie (MS of MS / MS) analyses te identificeren op te halen nieuwe zijde eiwitsequenties, zoek naar eiwitten die deelnemen aan de zijde montage pad, of gebruik de intacte weefsel voor celkweek of histologische experimenten.

Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands at JoVE.com

Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands

Hier beschrijven we een efficiënte strategie om de zijde-producerende klieren te verwijderen uit de buik van de vrouwelijke zwarte weduwe spinnen. Deze procedure maakt het mogelijk een snelle isolatie van de zeven verschillende zijde-producerende klieren in een sterk gezuiverd, mode, een belangrijk proces voor de onderzoekers bestuderen spinnenzijde productie en assemblage vezels.

Microdissectie van Black Widow Spider Silk-producerende klieren

Modern spiders spin high-performance silk fibers with a broad range of biological functions, including locomotion, prey capture and protection of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Ontleding van Midgut en speekselklieren van de Ae. aegypti Muggen

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Laser capture microdissectie van weefsel van zoogdieren

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Microdissectie van de zebravis embryonale oogweefsels

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Isolation of Viable Multicellular Glands from Tissue of the Carnivorous Plant, Nepenthes

Isolation of Viable Multicellular Glands from Tissue of the Carnivorous Plant, Nepenthes

Many plants possess specialized structures that are involved in the production and secretion of specific low molecular weight compounds and proteins. ...

Reconstruction of 3-Dimensional Histology Volume and its Application to Study Mouse Mammary Glands

Reconstructie van 3-dimensionale Histologie Volume en de toepassing ervan te studeren Mouse borstklieren

Histology volume reconstruction facilitates the study of 3D shape and volume change of an organ at the level of macrostructures made up of cells. It can ...

Cryosectioning Method for Microdissection of Murine Colonic Mucosa

Cryosectioning Methode voor Microdissection van Murine colonslijmvlies

The colonic mucosal tissue provides a vital barrier to luminal antigens. This barrier is composed of a monolayer of simple columnar epithelial cells. The ...

Rodent Working Heart Model for the Study of Myocardial Performance and Oxygen Consumption

Knaagdier Werken Heart Model voor de Studie van hartspierprestatie en Oxygen Consumption

Isolated working heart models have been used to understand the effects of loading conditions, heart rate and medications on myocardial performance in ways ...

Isolation of Intact, Whole Mouse Mammary Glands for Analysis of Extracellular Matrix Expression and Gland Morphology

Isolatie van Intact, hele muis borstklieren p.a. van extracellulaire Matrix expressie en klier morfologie

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal ...

Investigating Teliospore Germination Using Microrespiration Analysis and Microdissection

Onderzoek naar Teliospore kieming met behulp van Microrespiration analyse en Microdissection

Smut fungi are the etiological agents of several devastating agricultural diseases. They are characterized by the production of teliospores, which are ...

Isolation of Myoepithelial Cells from Adult Murine Lacrimal and Submandibular Glands

Isolatie van Myo cellen van volwassen muizen traan en submandibulaire klieren

The lacrimal gland (LG) is an exocrine tubuloacinar gland that secretes an aqueous layer of tear film. The LG epithelial tree is comprised of acinar, ...