Name: microdissection of black widow spider silk-producing glands
Uploaded: 2011-01-11T23:59:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands at JoVE.com

Detta arbete stöddes av en NSF RUI Grant rätt MCB-0950372 Molekylär karakterisering av Black Silks Widow Spider.

1. Anesthetizing spindeln och isolering av buken <ol><li> Överför spindel från en glasburk i en kartong bäddad med plast (Figur 1A). Vi samlar vanligen spindlar från vedstaplarna, garage eller buskar och hus dem i labbet i glasburkar. Eftersom spindeln inte kan klättra upp plasten foder, ger det en effektiv metod att överföra spindel från en glasburk eller kaffe kan till en mindre flaska för anesthetizing ändamål. Vid hantering av spindeln i detta läge bör du vara klädd två par latexhandskar eller hand...

<ol>
	<li>Vollrath, F., Knight, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Int. J. Biol. Macromol. 24, 243-243 (1999).</li><li>Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J. Exp. Biol. 202, 3295-3295 (1999).</li><li>Gosline, J. M., DeMont, M. E., Denny, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Endeavour. 10, 31-31 (1986).</li><li>Hinman, M. B., Jones, J. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Trends Biotechnol. 18 (9), 374-374 (2000).</li><li>Lewis, R. V., Xu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 87, 7120-7120 (1990).</li><li>Colgin, M. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Protein Sci. 7 (3), 667-667 (1998).</li><li>Tian, M., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Appl. Phys. A-Mater. 82, 265-265 (2006).</li><li>Hu, X., Lawrence, B., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biochemistry. 44 (30), 10020-10020 (2005).</li><li>Vasanthavada, K., Hu, X., Falick, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Biol Chem. 282 (48), 35088-35088 (2007).</li><li>Hayashi, C. Y., Blackledge, T. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mol. Biol. Evol.. 21 (10), 1950-1950 (2004).</li><li>Blasingame, E., Tuton-Blasingame, T., Larkin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Biol Chem. 284 (42), 29097-29097 (2009).</li></ol>

Vår metod för microdissection av siden-producerande körtlar från svarta änkan spindel erbjuder ett effektivt sätt att få mycket rent silke-producerande körtlar. Dissektioner kan fyllas i 1,5 till 3 timmar, vilket ger en komplett uppsättning av de sju olika siden-producerande körtlar från cobweavers. Att få mycket rent silke-körtel prov innebär utredarna förmågan att utföra ett brett spektrum av biokemiska studier, inklusive identifiering av nya siden eller proteiner förkläde lagras i glandulära lumin...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sodium chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EM Science</td>
<td>SX0420-1</td>
<td>0.1 M in water</td>
</tr>
<tr>
<td>Diethyl pyrocarbonate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D-5758 - 5 ml</td>
<td>0.1% v/v</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium citrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S1804 - 1 kg</td>
<td>0.015 M in water</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>Leica MZ16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Digital microscope camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>DFC320</td>
<td>Software - Leica Application Suite v2.8.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Vannas scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>500260</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless steel forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>501764</td>
<td>Mini Dumont #M5S</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect pins</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Indigo Instruments</td>
<td>33414-2</td>
<td>Insect pins #2</td>
</tr>
<tr>
<td>Small or large dissection dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Living Systems Instrumentation</td>
<td>DD-50-S or DD-90-S</td>
<td>52 mm diameter x 18 mm H (Sylgard Depth ~6mm) or 93 mm x 22 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Drosophila culture vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carolina Biological Supply Company</td>
<td>FR-17-3076</td>
<td>Size is 31.75 mm diameter x 101.6 mm</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

microdissection of black widow spider silk-producing glands

Moderna spindlar spin högpresterande siden fibrer med ett brett utbud av biologiska funktioner, inklusive förflyttning, rov fånga och skydd för att utveckla avkomma 1,2. Spindlar utföra dessa uppgifter genom att snurra flera olika fibertyper som har olika mekaniska egenskaper. En sådan specialisering av fibertyper har skett genom utvecklingen av olika siden-körtlar, som fungerar som små biofactories. Dessa biofactories tillverka och lagra stora mängder silkesproteiner för fiberproduktion. Genom en komplex serie av biokemiska händelser, dessa silkesproteiner omvandlas från en vätska i ett fast material vid extrudering. Mekaniska studier har visat att spindeln silke är starkare än höghållfast stål 3. Analyser för att förstå förhållandet mellan struktur och funktion spindeltråd trådar har visat att spindeltråd stor del består av proteiner, eller fibroins, som blockerar upprepar inom sina proteinsekvenser 4. Vanliga molekylära signaturer som bidrar till den otroliga draghållfasthet och töjbarhet av spindel siden är repas genom analyser av översatta siden cDNAs. Med tanke på de extraordinära materialegenskaper av spindel silke, finns forskningslaboratorier över hela världen racing att förstå och efterlikna spinnprocess att producera syntetiskt silke fibrer för kommersiella, militära och industriella applikationer. En av de största utmaningarna för spinning konstgjord spindeltråd i forskningen labbet innebär en fullständig förståelse av de biokemiska processer som sker under extrudering av fibrer från silke-producerande körtlar. Här presenterar vi en metod för isolering av de sju olika siden-producerande körtlar från cobweaving svarta änkan spindel, vilket inkluderar större och mindre ampullate körtlar [tillverkar Kran och byggnadsställningar siden] 5,6, tubuliform [syntetiserar ägg fall silke] 7 , 8, flagelliform [okänd funktion i cob-väverskor], sammanlagt [gör lim siden] aciniform [syntetiserar bytesdjur inslagning och ägg trådar fall] 9 och päronformade [producerar bifogad skiva siden] 10. Detta synsätt bygger på anesthetizing spindeln med koldioxid, efter avskiljandet av cephalothorax från buken och microdissection av buken för att få silke-producerande körtlar. Efter separation av de olika siden-producerande körtlar, kan dessa vävnader användas för att hämta olika makromolekyler för olika biokemiska analyser, inklusive kvantitativa realtids-PCR, norra-och västra blotting, masspektrometri (MS eller MS / MS) analyser för att identifiera New Silk protein-sekvenser, söka efter proteiner som deltar i siden montering väg, eller använd intakt vävnad för cellodling eller histologiska experiment.

Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands at JoVE.com

Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands

Här beskriver vi en effektiv strategi för att ta bort siden-producerande körtlar från buken av kvinnliga svarta änkan. Detta förfarande möjliggör en snabb isolering av de sju olika siden-körtlar i en mycket renat mode, en viktig process för utredarna att studera spindeltråd produktion och fiber montering.

Microdissection av Black Widow Spider Silk-körtlar

Modern spiders spin high-performance silk fibers with a broad range of biological functions, including locomotion, prey capture and protection of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Dissekering av midgut och spottkörtlar från AE. aegypti Myggor

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Laser Capture Microdissection av däggdjur

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Microdissection av Zebrafish Embryonala Eye vävnader

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Isolation of Viable Multicellular Glands from Tissue of the Carnivorous Plant, Nepenthes

Isolation of Viable Multicellular Glands from Tissue of the Carnivorous Plant, Nepenthes

Isolering av livskraftig flercelliga körtlar från Tissue av köttätande växt, Nepenthes</i

Many plants possess specialized structures that are involved in the production and secretion of specific low molecular weight compounds and proteins. ...

Reconstruction of 3-Dimensional Histology Volume and its Application to Study Mouse Mammary Glands

Rekonstruktion av 3-dimensionell histologi volym och dess tillämpning att studera Mouse bröstkörtlar

Histology volume reconstruction facilitates the study of 3D shape and volume change of an organ at the level of macrostructures made up of cells. It can ...

Cryosectioning Method for Microdissection of Murine Colonic Mucosa

Cryosectioning Förfarande för Microdissection av murin kolonslemhinna

The colonic mucosal tissue provides a vital barrier to luminal antigens. This barrier is composed of a monolayer of simple columnar epithelial cells. The ...

Rodent Working Heart Model for the Study of Myocardial Performance and Oxygen Consumption

Gnagare Working Heart modell för studier av Myocardial prestanda och syreförbrukning

Isolated working heart models have been used to understand the effects of loading conditions, heart rate and medications on myocardial performance in ways ...

Isolation of Intact, Whole Mouse Mammary Glands for Analysis of Extracellular Matrix Expression and Gland Morphology

Isolering av intakt, hela musen mjölkkörtlar för analys av extracellulärmatrix uttryck och körtel morfologi

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal ...

Investigating Teliospore Germination Using Microrespiration Analysis and Microdissection

Undersöka Teliospore grobarhet med Microrespiration analys och lokalt

Smut fungi are the etiological agents of several devastating agricultural diseases. They are characterized by the production of teliospores, which are ...

Isolation of Myoepithelial Cells from Adult Murine Lacrimal and Submandibular Glands

Isolering av Myoepithelial celler från Adult murine lacrimal och submandibular körtlar

The lacrimal gland (LG) is an exocrine tubuloacinar gland that secretes an aqueous layer of tear film. The LG epithelial tree is comprised of acinar, ...