Name: microdissection of black widow spider silk-producing glands
Uploaded: 2011-01-11T23:59:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands at JoVE.com

Bu çalışma, Black Widow Spider ipek bir NSF RUI Hibe MCB-0950372 başlıklı Moleküler Karakterizasyonu tarafından desteklenmiştir.

1. Karın örümcek ve izolasyon anestezi <ol><li> Plastik (Şekil 1A) ile kaplı bir karton kutunun içine bir cam kavanoz örümcek aktarın. Biz genellikle woodpiles, garajlar ya da çalılar örümcekler toplamak ve laboratuvarda cam kavanoz içinde onlara ev. Örümcek plastik astarı yukarı tırmanmak değil, çünkü bir cam kavanoz ya da kahve örümcek anestezi amaçlı küçük bir şişenin içine aktarmak için etkili bir yöntem sağlar. Bu noktada örümcek işleme, iki çift lateks eldiven veya güvenl...

<ol>
	<li>Vollrath, F., Knight, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Int. J. Biol. Macromol. 24, 243-243 (1999).</li><li>Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J. Exp. Biol. 202, 3295-3295 (1999).</li><li>Gosline, J. M., DeMont, M. E., Denny, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Endeavour. 10, 31-31 (1986).</li><li>Hinman, M. B., Jones, J. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Trends Biotechnol. 18 (9), 374-374 (2000).</li><li>Lewis, R. V., Xu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 87, 7120-7120 (1990).</li><li>Colgin, M. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Protein Sci. 7 (3), 667-667 (1998).</li><li>Tian, M., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Appl. Phys. A-Mater. 82, 265-265 (2006).</li><li>Hu, X., Lawrence, B., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biochemistry. 44 (30), 10020-10020 (2005).</li><li>Vasanthavada, K., Hu, X., Falick, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Biol Chem. 282 (48), 35088-35088 (2007).</li><li>Hayashi, C. Y., Blackledge, T. A., Lewis, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mol. Biol. Evol.. 21 (10), 1950-1950 (2004).</li><li>Blasingame, E., Tuton-Blasingame, T., Larkin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Biol Chem. 284 (42), 29097-29097 (2009).</li></ol>

Kara dul örümceği ipek üreten bezlerin mikrodiseksiyon metodolojisi yüksek derecede saflaştırılmış ipek üreten bezlerin elde etmek için etkili bir araç sunmaktadır. Diseksiyonlarının yedi ayrı komple bir set ipek üreten bezlerin cobweavers gelen verimli 1,5 ila 3 saat içinde tamamlanabilir. Yüksek derecede saflaştırılmış ipek bezi örnekleri elde edilmesi araştırmacılar farklı bezlerinde seçici genlerin mRNA düzeyleri kütle spektrometresi, analiz kullanarak glandüler luminal içeriğini ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sodium chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EM Science</td>
<td>SX0420-1</td>
<td>0.1 M in water</td>
</tr>
<tr>
<td>Diethyl pyrocarbonate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D-5758 - 5 ml</td>
<td>0.1% v/v</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium citrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S1804 - 1 kg</td>
<td>0.015 M in water</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>Leica MZ16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Digital microscope camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>DFC320</td>
<td>Software - Leica Application Suite v2.8.1</td>
</tr>
<tr>
<td>Vannas scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>500260</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless steel forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>501764</td>
<td>Mini Dumont #M5S</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect pins</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Indigo Instruments</td>
<td>33414-2</td>
<td>Insect pins #2</td>
</tr>
<tr>
<td>Small or large dissection dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Living Systems Instrumentation</td>
<td>DD-50-S or DD-90-S</td>
<td>52 mm diameter x 18 mm H (Sylgard Depth ~6mm) or 93 mm x 22 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Drosophila culture vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carolina Biological Supply Company</td>
<td>FR-17-3076</td>
<td>Size is 31.75 mm diameter x 101.6 mm</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

microdissection of black widow spider silk-producing glands

Modern örümcekler, biyolojik fonksiyonları, hareket, avlarını yakalamak ve gelişmekte olan yavrular 1,2 korunması da dahil olmak üzere geniş bir yelpazede yüksek performanslı ipek lifleri dönerler. Örümcekler farklı mekanik özelliklere sahip birkaç farklı fiber türleri iplik bu görevleri yerine getirmek. Bu tür uzmanlık elyaf türleri küçük biofactories olarak işlev farklı ipek üreten bezleri, evrimle meydana gelmiştir. Bu biofactories üretimi ve elyaf üretimi için ipek proteinleri büyük miktarlarda saklamak. Biyokimyasal olayların karmaşık bir dizi sayesinde, bu ipek proteinleri ekstrüzyon üzerine sağlam bir malzeme bir sıvı haline dönüştürülür. Mekanik çalışmalar örümcek ipek yüksek gerilimli çelik 3 daha güçlü olduğunu göstermiştir. Analizler örümcek ipek ipler yapı ve fonksiyon arasındaki ilişkiyi anlamak için, örümcek ipeği, büyük ölçüde onların protein dizileri içinde 4 blok tekrarlar proteinler, ya da fibroins ibaret olduğunu ortaya koymuştur. Inanılmaz bir örümcek ipek çekme dayanımı ve genişletilebilirlik katkıda Ortak moleküler imzalar tercüme ipek cDNAs analizleri ile sökülmüş edilmektedir. Örümcek ipekler olağanüstü malzeme özellikleri göz önüne alındığında, dünya çapında araştırma laboratuarları, ticari, askeri ve endüstriyel uygulamalar için sentetik ipek lifleri iplik üretmek için süreci anlamak ve taklit etmek için yarış halindeler. Araştırma laboratuvarı yapay örümcek ipeği iplik temel güçlüklerden biri, ipek üreten bezlerin lifleri ekstrüzyon esnasında meydana gelen biyokimyasal süreçlerin tam bir anlayış içerir. Burada yedi farklı ipek üreten bezlerin büyük ve küçük ampullate bezleri içeren cobweaving kara dul örümceğinin, 5,6, tubuliform [sentezler yumurta durumda ipek] [paletli vinç ve iskele ipek üreten] 7 izolasyonu için bir yöntem mevcut , 8, flagelliform [koçanı-dokumacılar bilinmeyen işlev] [tutkal ipek, toplam yapar] aciniform [sentezler av sarma ve yumurta durumda konuları] 9 ve piriform 10 [Ek disk ipek üretir]. Bu yaklaşım, karbondioksit gazı, karın cephalothoraksın sonraki ayırma ve ipek üreten bezlerin elde etmek için karın, mikrodiseksiyon örümcek anestezi dayanmaktadır. Farklı ipek üreten bezlerin ayrılmasını takiben, bu dokularda belirlemek için kantitatif gerçek zamanlı PCR, kuzey-ve batı blot, kütle spektrometresi (MS veya MS / MS) analizleri de dahil olmak üzere farklı biyokimyasal analizler için farklı makromoleküllerin almak için kullanılabilir yeni ipek protein dizileri, ipek montaj yolu katılırlar, ya da sağlam doku, hücre kültürü veya histolojik deneyler için kullanmak proteinleri araştırın.

Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands at JoVE.com

Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands

Burada kadın kara dul örümcekleri karın ipek üreten bezlerin kaldırmak için etkili bir strateji açıklanmaktadır. Bu prosedür, yedi ayrı ipek üreten, son derece saf bir moda, örümcek ipeği üretimi ve lif montaj inceleyen araştırmacılar için önemli bir süreci bezlerinin hızlı bir izolasyon sağlar.

Black Widow Spider İpek üreten Bezler, Mikrodisseksiyon

Modern spiders spin high-performance silk fibers with a broad range of biological functions, including locomotion, prey capture and protection of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Ae midgut ve Tükürük Bezlerinin Diseksiyon. aegypti Sivrisinekler

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Memeli Doku Lazer Yakalama Mikrodisseksiyon

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Zebra balığı Embriyonik Göz Dokular, Mikrodisseksiyon

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Isolation of Viable Multicellular Glands from Tissue of the Carnivorous Plant, Nepenthes

Isolation of Viable Multicellular Glands from Tissue of the Carnivorous Plant, Nepenthes

Many plants possess specialized structures that are involved in the production and secretion of specific low molecular weight compounds and proteins. ...

Reconstruction of 3-Dimensional Histology Volume and its Application to Study Mouse Mammary Glands

3-Boyutlu Histoloji hacmi ve Fare meme bezlerinin Eğitim için onun Uygulama İmar

Histology volume reconstruction facilitates the study of 3D shape and volume change of an organ at the level of macrostructures made up of cells. It can ...

Cryosectioning Method for Microdissection of Murine Colonic Mucosa

Fare Kolon Mukozanın Mikrodisseksiyon için Cryosectioning Yöntemi

The colonic mucosal tissue provides a vital barrier to luminal antigens. This barrier is composed of a monolayer of simple columnar epithelial cells. The ...

Rodent Working Heart Model for the Study of Myocardial Performance and Oxygen Consumption

Miyokard Performans ve Oksijen Tüketimi İnceleme Kemirgen Çalışma Kalp Modeli

Isolated working heart models have been used to understand the effects of loading conditions, heart rate and medications on myocardial performance in ways ...

Isolation of Intact, Whole Mouse Mammary Glands for Analysis of Extracellular Matrix Expression and Gland Morphology

Sağlam, Bütün fare meme dokuları yalıtım hücre dışı matriks ifade ve bezi Morfoloji analizi için

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal ...

Investigating Teliospore Germination Using Microrespiration Analysis and Microdissection

Microrespiration analizi ve mikrodiseksiyon kullanarak soruşturma Teliospore çimlenme

Smut fungi are the etiological agents of several devastating agricultural diseases. They are characterized by the production of teliospores, which are ...

Isolation of Myoepithelial Cells from Adult Murine Lacrimal and Submandibular Glands

Yetişkin Murine lacrimal ve submandibular bezlerden Myoepitelyal hücrelerin izolasyonu

The lacrimal gland (LG) is an exocrine tubuloacinar gland that secretes an aqueous layer of tear film. The LG epithelial tree is comprised of acinar, ...