Name: the culture of primary motor and sensory neurons in defined media on electrospun poly-l-lactide nanofiber scaffolds
Uploaded: 2011-02-15T16:00:00
Duration: 16 min 3 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds at JoVE.com

K08 EB003996 एनआईएच

<ol>
	<li>Corey, J. M., Gertz, C. C., Wang, B. S., Birrell, L. K., Johnson, S. L., Martin, D. C., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+of+electrospun+PLLA+nanofiber+scaffolds+compatible+with+serum-free+growth+of+primary+motor+and+sensory+neurons.">The design of electrospun PLLA nanofiber scaffolds compatible with serum-free growth of primary motor and sensory neurons.</a> Acta. Biomater. 4, 863-875 (2008).</li><li>Lin, D. Y., Johnson, M. A., Vohden, R. A., Chen, D., Martin, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tailored+nanofiber+morphologies+using+modulated+electrospinning+for+biomedical+applications.">Tailored nanofiber morphologies using modulated electrospinning for biomedical applications.</a> Mat. Res. Soc. Symp. Proc. 736, D3.8.1-D3.8.6 (2003).</li><li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing Nerve Cells. , (1998).</li><li>Kameda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+glial+progenitor+markers+p75NTR+and+S100+protein+in+the+developing+mouse+parathyroid+gland.">Expression of glial progenitor markers p75NTR and S100 protein in the developing mouse parathyroid gland.</a> Cell Tissue Res. 327, 15-23 (2007).</li><li>Corey, J. M., Lin, D. Y., Mycek, K. B., Chen, Q., Samuel, S., Feldman, E. L., Martin, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aligned+electrospun+nanofibers+specify+the+direction+of+dorsal+root+ganglia+neurite+growth.">Aligned electrospun nanofibers specify the direction of dorsal root ganglia neurite growth.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 83, 636-645 (2007).</li><li>Vincent, A. M., Mobley, B. C., Hiller, A., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGF-I+prevents+glutamate-induced+motor+neuron+programmed+cell+death.">IGF-I prevents glutamate-induced motor neuron programmed cell death.</a> Neurobiol. Dis. 16, 407-416 (2004).</li><li>Russell, J. W., Windebank, A. J., Schenone, A., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+growth+factor-I+prevents+apoptosis+in+neurons+after+nerve+growth+factor+withdrawal.">Insulin-like growth factor-I prevents apoptosis in neurons after nerve growth factor withdrawal.</a> J. Neurobiol. 36, 455-467 (1998).</li><li>Gertz, C. C., Leach, M. K., Birrel, L. K., Martin, D. C., Feldman, E. L., Corey, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+neuritogenesis+and+maturation+of+primary+spinal+motor+neurons+in+response+to+nanofibers.">Accelerated neuritogenesis and maturation of primary spinal motor neurons in response to nanofibers.</a> Dev. Neurobiol. 70, 589-603 (2010).</li><li>Tan, S. -. H., Kotaki, M., Ramakrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+parameter+study+for+ultra-fine+fiber+fabrication+via+electrospinning+process.">Systematic parameter study for ultra-fine fiber fabrication via electrospinning process.</a> Polymer. 46, 6128-6134 (2005).</li><li>Wang, H. B., Mullins, M. E., Cregg, J. M., Hurtado, A., Oudega, M., Trombley, M. T., Gilbert, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creation+of+highly+aligned+electrospun+poly-L-lactic+acid+fibers+for+nerve+regeneration+applications.">Creation of highly aligned electrospun poly-L-lactic acid fibers for nerve regeneration applications.</a> J. Neural Eng. 6, (2009).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

इस प्रोटोकॉल के कई महत्वपूर्ण कदम है. पहले electrospun फाइबर substrates के समुचित उत्पादन शामिल है. तरल मीडिया में PLLA फाइबर, PLGA फिल्म और PLGA खाई एक एकल इकाई के रूप में कांच के कवर पर्ची से अलग कर देगा. यदि PLGA छोड़ा जाता है, PLLA फाइबर एक फ्लैट शीट नहीं रहेगा - वे एक व्यर्थ उलझन में कर्ल जाएगा. इस प्रकार, PLGA फिल्म संस्कृति के दौरान फाइबर संरेखण को बनाए रखने के लिए एक उपयुक्त सब्सट्रेट के रूप में शामिल है. खाई दोनों कताई करने के लिए सुनिश्चित करें कि फाइबर सुरक्षित PLGA फिल्म तय कर रहे हैं और फिल्म के लिए संरचनात्मक कठोरता जोड़ने के बाद जोड़ा है. खाई भी एक उपयोगी संभाल के रूप में कार्य करता है जब substrates फिक्सिंग, धुंधला हो जाना और बढ़ते के दौरान छेड़छाड़ कर रहे हैं. Trituration दूसरा महत्वपूर्ण कदम है. बुलबुले के गठन से बचने के हर संभव प्रयास किया जाना चाहिए. इसके अतिरिक्त, हम बहुत अधिक पैदावार प्राप्त की है जब एक आग पॉलिश विंदुक इस कदम के लिए प्रयोग किया जाता है. पॉलिश आग, एक Bunsen बर्नर प्रकाश और विंदुक के लिए एक बल्ब देते हैं. पिपेट की नोक जल्दी से लौ के माध्यम से 2-3 बार दर्रे जबकि लगातार फैलाएंगे और बल्ब जारी विंदुक के माध्यम से हवा का प्रवाह पूरी तरह से बंद करने से टिप को रोकने में मदद मिलेगी. विंदुक टिप जांच करने के लिए सुनिश्चित छेद अभी भी खुला है और कि किनारों दिखाई देते हैं उपयोग करने से पहले थोड़ा गोल. Electrospinning एक बहुत बहुमुखी प्रक्रिया है, electrospinning मापदंडों morphologies की एक किस्म के साथ फाइबर का उत्पादन करने के लिए संशोधित किया जा सकता है. टैन एट अल (2005) PLLA electrospun फाइबर के व्यास को प्रभावित करने वाले मापदंडों के एक व्यवस्थित अध्ययन के विवरण. वैंग एट अल (2009) electrospun PLLA फाइबर के संरेखण को प्रभावित मापदंडों का एक विस्तृत अध्ययन प्रस्तुत करता है .

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PLLA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boehringer Ingelheim</td>
<td>Resomer L210</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PLGA 85:15</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>43471</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L15</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>11415</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>A2289 
</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Apo-transferrin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Akron </td>
<td>AK8227</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>AC 23009-0010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Galactose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>G0625</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Progesterone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P7556</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Putrescine </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P5780</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Selenium </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>S9133</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&beta;-estradiol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>E 1132 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hydrocortisone </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>H0396</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Catalase </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>C40 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Superoxide dismutase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>S4636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neurobasal</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>21103-049</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PSN</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>15640 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene </td>
<td>1680149</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene </td>
<td>1689149</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>26140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Optiprep</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Accurate </td>
<td>2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PLL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>P4832 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibronectin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>F 4759 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>B27</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>17504-044</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A7906</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-TuJ1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>556321</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-neurofilament</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>AB1987</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-S100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S2532</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-NGFR p75</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>N3908</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Normal goat serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G6767</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T9284</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium azide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S8032</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Carbon tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ted Pella</td>
<td>13073-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Prolong Gold +DAPI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P36931</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

the culture of primary motor and sensory neurons in defined media on electrospun poly-l-lactide nanofiber scaffolds

Electrospinning नैनो पैमाने पर फाइबर सूक्ष्म उत्पादन के लिए एक तकनीक है. फाइबर अत्यधिक पूरी तरह यादृच्छिक गठबंधन से संरेखण की डिग्री बदलती के साथ electrospun किया जा सकता है है. इसके अलावा, फाइबर पाली एल लैक्टिक एसिड (PLLA) जैसे biodegradable polymers सहित सामग्री की एक किस्म से काता जा सकता है. इन विशेषताओं electrospun ऊतक इंजीनियरिंग में मचान आवेदनों की एक किस्म के लिए उपयुक्त फाइबर बनाने के लिए. हमारे तंत्रिका पुनर्जनन के लिए गठबंधन electrospun फाइबर के उपयोग पर ध्यान केंद्रित है. हम पहले से पता चला है कि गठबंधन electrospun PLLA फाइबर इन विट्रो में दोनों को प्राथमिक संवेदी और मोटर न्यूरॉन्स के परिणाम प्रत्यक्ष. हम मानते हैं कि एक प्राथमिक सेल संस्कृति प्रणाली का उपयोग आवश्यक है जब मॉडल असली निकटता के रूप में संभव के रूप में vivo में पाया न्यूरॉन्स biomaterials मूल्यांकन. यहाँ, हम हमारी प्रयोगशाला में प्रयोग किया जाता करने के लिए रेशेदार scaffolds और संस्कृति पृष्ठीय रूट ganglia explants, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से electrospun scaffolds पर dissociated संवेदी और मोटर न्यूरॉन्स, electrospin तकनीक का वर्णन. हालांकि, electrospinning और / या संस्कृति यहाँ प्रस्तुत तकनीक आसानी से अन्य अनुप्रयोगों में प्रयोग के लिए अनुकूलित कर रहे हैं.

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The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

गठबंधन electrospun फाइबर इन विट्रो में न्यूरॉन्स के विकास को प्रत्यक्ष और तंत्रिका पुनर्जनन scaffolds के एक संभावित घटक हैं. हम electrospun फाइबर substrates और सीरम मुक्त प्राथमिक चूहे E15 (DRG) संवेदी और मोटर न्यूरॉन्स की संस्कृति की तैयारी के लिए एक प्रक्रिया का वर्णन. Immunocytochemistry द्वारा न्यूरॉन्स के विज़ुअलाइज़ेशन भी शामिल है.

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