Name: isolation and expansion of the adult mouse neural stem cells using the neurosphere assay
Uploaded: 2010-11-20T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Detta arbete stöddes av medel från Overstreet Foundation.

<p class="jove_title"&gt; Del 1: Grundläggande inrättat innan du fortsätter till dissekering:</p&gt;<ol&gt;<li&gt; Lämplig volym av hela NSC mediet bereds genom att blanda NeuroCult NSC bassubstratets och NeuroCult NSC spridning Kosttillskott vid ett 9:1-förhållande, respektive. NSC medium kan också göras i laboratoriet bygger på NSC grogrund sammansättning publiceras i litteraturen<sup&gt; 1</sup&gt;. Om din lab inte har mycket erfarenhet med att göra medium, rekommenderar vi starkt att använda kommersiellt tillgängliga medel som ...

<ol>
	<li>Louis, S. A., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosphere+and+Neural+Colony-Forming+Cell+Assays.">Neurosphere and Neural Colony-Forming Cell Assays.</a> Protocols for Neural Cell Culture. 10, 1-28 (2010).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Sen, A., Kallos, M. S., Behie, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+tissue+dissociation+protocol+for+scaled-up+production+of+neural+stem+cells+in+suspension+bioreactors.">New tissue dissociation protocol for scaled-up production of neural stem cells in suspension bioreactors.</a> Tissue Eng. 10, 904-913 (2004).</li><li>Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+forebrain:+a+relatively+quiescent+subpopulation+of+subependymal+cells.">Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.</a> Neuron. 13, 1071-1082 (1994).</li><li>Golmohammadi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+frequency+and+distribution+of+stem+and+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+brain.">Comparative analysis of the frequency and distribution of stem and progenitor cells in the adult mouse brain.</a> Stem Cells. 26, 979-987 (2008).</li><li>Dontu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+propagation+and+transcriptional+profiling+of+human+mammary+stem/progenitor+cells.">In vitro propagation and transcriptional profiling of human mammary stem/progenitor cells.</a> Genes Dev. 17, 1253-1270 (2003).</li><li>Messina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+expansion+of+adult+cardiac+stem+cells+from+human+and+murine+heart.">Isolation and expansion of adult cardiac stem cells from human and murine heart.</a> Circ Res. 95, 911-921 (2004).</li><li>Ignatova, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cortical+glial+tumors+contain+neural+stem-like+cells+expressing+astroglial+and+neuronal+markers+in+vitro.">Human cortical glial tumors contain neural stem-like cells expressing astroglial and neuronal markers in vitro.</a> Glia. 39, 193-206 (2002).</li><li>Galli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+tumorigenic,+stem-like+neural+precursors+from+human+glioblastoma.">Isolation and characterization of tumorigenic, stem-like neural precursors from human glioblastoma.</a> Cancer Res. 64, 7011-7021 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship.">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li><li>Louis, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+Neural+Stem+and+Progenitor+Cells+in+the+Neural+Colony+Forming+Cell+Assay.">Enumeration of Neural Stem and Progenitor Cells in the Neural Colony Forming Cell Assay.</a> Stem Cells. , (2008).</li></ol>

Den neurosphere analys 2 har fått bred uppmärksamhet i forskarvärlden, inte bara för isoleringen och studiet av NSCs från CNS 4-5, men också för isolering av andra typer av förmodade stamceller från många vävnader, såsom bröst-6 och hjärta 7 och för identifiering av hjärnan, bröst-och tjocktarmscancer tumör stamceller 8-9 tyder på att denna kultur systemet kan tillämpas på ett antal somatiska och tumör föregångare populationer cell i hela kro...

* För att göra HEM, blanda 110L paket MEM and160ml 1M HEPES och föra volymen till 8,75 L med destillerat vatten. Ställ den slutliga PH till 7,4 och lagra den i 4 ° C.

isolation and expansion of the adult mouse neural stem cells using the neurosphere assay

Isolering och expansion av den förmodade neurala stamceller (NSCs) från den vuxna murina hjärnan beskrevs först av Reynolds och Weiss år 1992 anställa ett kemiskt definierat serumfritt kultur systemet kallas neurosphere analys (NSA). I denna analys, de flesta av differentierade celltyper dör inom ett par dagar av kultur, men en liten population av en lyhörd tillväxtfaktor föregångare celler genomgå aktiv spridning i närvaro av epidermal tillväxtfaktor (EGF) och / grundläggande fibroblastic tillväxtfaktor (bFGF). Dessa celler bildar kolonier av odifferentierade celler som kallas neurospheres, som i sin tur kan subkultiveras att utöka den pool av neurala stamceller. Dessutom kan celler fås att differentiera, genererar de tre stora celltyper i CNS, dvs nervceller, astrocyter och oligodendrocyter. Denna analys ger ett ovärderligt verktyg för att tillhandahålla ett konsekvent, förnybar odifferentierade CNS-prekursorer, som kan användas för in vitro-studier och även i terapeutiska syften. Denna video visar hur NSA metod för att generera och utöka NSCs från vuxna möss periventrikulär regionen, och tillhandahåller teknisk insikt för att man kan uppnå reproducerbara neurosphere kulturer. Förfarandet omfattar skörd hjärnan från vuxna möss, mikro-dissekering av periventrikulär regionen vävnad förberedelse och kultur i NSA. Den skördade vävnaden är först kemiskt upplösas med trypsin-EDTA och sedan mekaniskt dissocierade i NSC mediet för att nå en enda cell fjädring och slutligen klädd i NSA. Efter 7-10 dagar i kultur, den resulterande primära neurospheres är redo för subkultur att nå mängd celler som behövs för framtida experiment.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Denna video protokoll visar neurosphere analys metod för att generera och utöka neurala stamceller från vuxna möss periventrikulär regionen, och tillhandahåller teknisk insikt för att man kan uppnå reproducerbara neurosphere kulturer.

Isolering och utvidgning av den vuxna Mouse neurala stamceller Använda Neurosphere analys

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Etablera Embryonala Mus Neurala Kultur Stem Cell Använda Neurosphere analys

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

Isolering och utbyggnad av tumour glioblastoma multiforme celler med Neurosphere analys

Stem-like cells have been isolated in tumors such as breast, lung, colon, prostate and brain. A critical issue in all these tumors, especially in ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Den Neuroblast Analys: En analys för generering och anrikning av neuronala progenitorceller från Skilja Neural Stem Cell Progeny med hjälp av flödescytometri

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Utbyggnad av embryonala och vuxna neurala stamceller genom<em&gt; I Utero</em&gt; Elektroporering eller viral stereotaxisk injektion

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering och odling av neurallistceller från embryonala Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

Växande neurala stamceller från konventionella och icke-konventionella Regioner av vuxen Gnagare Brain

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

En mus, två kulturer: isolering och odling av vuxna neurala stamceller från de två neurogen zoner Individuell möss

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Cell Sortering av neurala stamceller och progenitorceller från vuxen mus subventrikulära zonen och Live-avbildning av sina cellcykeln Dynamics

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Isolering och kultur av vuxna neurala stamceller från mus Subcallosal Zone

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

A Neurosphere Assay to Evaluate Endogenous Neural Stem Cell Activation in a Mouse Model of Minimal Spinal Cord Injury

En Neurosphere analys att utvärdera endogena neurala stamceller Aktivering i en musmodell av Minimal ryggmärgsskada

Neural stem cells (NSCs) in the adult mammalian spinal cord are a relatively mitotically quiescent population of periventricular cells that can be studied ...