Name: transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector at JoVE.com

<p> Les auteurs tiennent à remercier le Dr Philip H. Schwartz, de la National des Ressources Humaines des cellules souches neurales à l&#39;Hôpital des enfants s, Orange County Institut de recherche pour fournir des cultures hNSPC. </p>

<p> <strong>Note: Se</strong> référer à l&#39;article de <strong>repiquage neuronaux humains Cellules souches</strong> ( <a href="/index/Details.stp?ID=263">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263</a> ) et le <strong>comptage de l&#39;homme souches neurales</strong> l&#39;article <strong>Cells</strong> ( <a href="/index/Details.stp?ID=262">https://www.jove.com / index / Details.stp? ID = 262</a> ) pour apprendre à resuspendre et compter hNSPCs. </p><p class="jove_step"> Préparation </p><ol><li> Assurez-vous qu&#39;il ya beaucoup de c...

<ol>
	<li>Gresch, O., Engel, F. B., Nesic, D., Tran, T. T., England, H. M., Hickman, E. S., Krner, I., Gan, L., Chen, S., Castro-Obregon, S., Hammermann, R., Wolf, J., M ller-Hartmann, H., Nix, M., Siebenkotten, G., Kraus, G., Lun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+non-viral+method+for+gene+transfer+into+primary+cells.">New non-viral method for gene transfer into primary cells.</a> <em style='font-style: italic'>Methods</em>. <b>33</b>, 151-163 (2004).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passaging+Human+Neural+Stem+Cells.">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+Human+Neural+Stem+Cells.">Counting Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li></ol>

<p> Ce protocole décrit une méthode de transfection relativement rapide et efficace pour hNSPCs. En utilisant cette procédure, nous avons obtenu des efficacités de transfection initiale de ~ 35%. Les cellules transfectées par cette procédure peut être utilisée pour études à court terme (les cellules transfectées de façon transitoire) ou pour des études à long terme si un agent de sélection est utilisée pour générer une population transfectées de façon stable. Nous avons généré des cellules transfectées de façon stable d...

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		<div>
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		<tr>
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		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>The Nucleofector Device</td>
<td>Tool</td>
<td>Amaxa</td>
<td>AAD-1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse neural stem cell nucleofector kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Amaxa</td>
<td>VPG-1004</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector

<p class="jove_content">La transfection de cellules neurales primaires de mammifères, tels que souches neurales humaines / cellules précurseurs (hNSPCs), avec couramment utilisés cationiques réactifs de transfection des lipides a souvent abouti à la viabilité des cellules pauvres et à faible efficacité de la transfection. D&#39;autres méthodes mécaniques de l&#39;introduction d&#39;un gène d&#39;intérêt, comme un canon à gènes ou de micro-injection, sont également limitées par la viabilité des cellules pauvre et le faible nombre de cellules transfectées. La stratégie consistant à utiliser des vecteurs viraux pour introduire un gène exogène dans les cellules primaires a été freinée par deux la quantité de temps et le travail requis pour créer des vecteurs viraux et de problèmes de sécurité potentiels. Nous décrivons ici un protocole étape par étape pour la transfection en utilisant un dispositif hNSPCs Nucleofector Amaxa et technologie avec les paramètres électriques actuels et solutions tampon spécialement optimisé pour la transfection des cellules souches neurales. En utilisant ce protocole, nous avons atteint des efficacités de transfection initiale de ~ 35% et ~ 70% après transfection stable. Le protocole implique la combinaison d&#39;un nombre élevé de hNSPCs avec l&#39;ADN à transfecter dans le tampon approprié suivie par électroporation avec l&#39;appareil Nucleofector.</p>

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Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

<p class="jove_content">L&#39;introduction d&#39;un gène d&#39;intérêt dans une cellule est une méthode puissante pour élucider sa fonction in vivo. Ce protocole décrit une méthode efficace de transfection d&#39;une culture de souches neurales humaines / cellules précurseurs (hNSPCs) en utilisant l&#39;appareil d&#39;électroporation Nucleofector faite par Amaxa.</p>

Transfection des cellules souches humaines à l&#39;Nucleofector Amaxa

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Research

JoVE Journal

Biology

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Comptage des cellules souches humaines

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Recherche

Biologie

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