Name: transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector at JoVE.com

<p> Die Autoren bedanken sich bei Dr. Philip H. Schwartz des National Human Neural Stem Cell Ressourcen auf die Kinder s Hospital, Orange County Forschungsinstitut für die Bereitstellung hNSPC Kulturen anzuerkennen. </p>

<p> <strong>Hinweis:</strong> Beachten Sie die <strong>Passagierung Nervenstammzellen</strong> Artikel ( <a href="/index/Details.stp?ID=263">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263</a> ) und die <strong>Counting Nervenstammzellen</strong> Artikel ( <a href="/index/Details.stp?ID=262">https://www.jove.com / index / Details.stp? ID = 262</a> ) zu lernen, wie resuspendieren und zählen hNSPCs. </p><p class="jove_step"> Vorbereitung </p><ol><li> Stellen Sie sicher, dass es viele von Zellen für die Transfektion (mehrere Millionen Zellen pro D...

<ol>
	<li>Gresch, O., Engel, F. B., Nesic, D., Tran, T. T., England, H. M., Hickman, E. S., Krner, I., Gan, L., Chen, S., Castro-Obregon, S., Hammermann, R., Wolf, J., M ller-Hartmann, H., Nix, M., Siebenkotten, G., Kraus, G., Lun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+non-viral+method+for+gene+transfer+into+primary+cells.">New non-viral method for gene transfer into primary cells.</a> <em style='font-style: italic'>Methods</em>. <b>33</b>, 151-163 (2004).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passaging+Human+Neural+Stem+Cells.">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+Human+Neural+Stem+Cells.">Counting Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li></ol>

<p> Dieses Protokoll beschreibt eine relativ schnelle und effiziente Verfahren für die Transfektion hNSPCs. Mit diesem Verfahren haben wir zunächst Transfektionseffizienz von ~ 35% erhalten. Zellen, die durch dieses Verfahren transfizierten kann für kurzfristige Studien (transient transfizierten Zellen) oder für eine längerfristige Studien verwendet werden, wenn eine Auswahl Agent wird verwendet, um eine stabil transfizierte Bevölkerung zu generieren. Wir haben stabil transfizierten Zellen, in denen 70% der Zellen ~ drücken die exogene P...

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		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
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<tr>
<td>The Nucleofector Device</td>
<td>Tool</td>
<td>Amaxa</td>
<td>AAD-1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse neural stem cell nucleofector kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Amaxa</td>
<td>VPG-1004</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector

<p class="jove_content">Transfektion von primären Säugerzellen neuronalen Zellen, wie die menschliche neurale Stammzellen / Vorläuferzellen (hNSPCs), mit häufig verwendeten kationischen Lipid Transfektionsreagenzien oft in armen Lebensfähigkeit der Zellen und geringe Transfektionseffizienz geführt. Andere mechanische Verfahren zur Einführung eines Gens von Interesse, wie eine Gen-Kanone oder Mikroinjektion werden zudem durch eine schlechte Lebensfähigkeit der Zellen und niedrigen Zahlen von transfizierten Zellen begrenzt. Die Strategie der Verwendung von viralen Konstrukte eines exogenen Gens in primären Zellen einzuschleusen wurde sowohl von der Höhe der Zeit und Arbeit erforderlich, um virale Vektoren und mögliche Sicherheitsprobleme zu schaffen gezwungen worden. Wir beschreiben hier eine Schritt-für-Schritt-Protokoll für die Transfektion von hNSPCs mit amaxas Nucleofector Gerät und Technologie mit elektrischem Strom Parameter und Puffer-Lösungen speziell für die Transfektion von neuronalen Stammzellen optimiert. Unter Verwendung dieses Protokolls haben wir erste Transfektionseffizienz von ~ 35% erreicht und ~ 70% nach stabiler Transfektion. Das Protokoll beinhaltet die Kombination einer hohen Anzahl von hNSPCs mit der DNA in den entsprechenden Puffer durch Elektroporation mit dem Nucleofector Gerät gefolgt transfiziert werden.</p>

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Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

<p class="jove_content">Die Einführung eines Gens in eine Zelle ist eine leistungsfähige Methode für die Aufklärung ihrer Funktion in vivo. Dieses Protokoll beschreibt eine effiziente Methode zur Transfektion von einer Kultur des menschlichen neuronalen Stammzellen / Vorläuferzellen (hNSPCs) mit Hilfe der Elektroporation Nucleofector Apparat Amaxa gemacht.</p>

Transfektion humaner neuraler Stammzellen mit dem Amaxa Nucleofector

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Research

JoVE Journal

Biology

Counting Human Neural Stem Cells

Counting Nervenstammzellen

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

Forschung

Biologie

Passaging Human Neural Stem Cells

Passagierung humaner neuraler Stammzellen

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

Immunzytochemie: Human Neural Stem Cells

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Labeling Stammzellen mit fluoreszierenden Farbstoffen zur nicht-invasiven Detektion mit Optical Imaging

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

Maus Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Kulturen

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

Erzeugung von induzierten pluripotenten Stammzellen durch Reprogrammierung menschlichen Fibroblasten mit dem Stemgent Menschliche TF Lentivirus Set

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

Xenotransplantation von menschlichen Stammzellen in die Hühnerembryo

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

Lentiviral-mediated Knockdown During <em>Ex Vivo</em> Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentivirale-vermittelte Knockdown Während<em> Ex Vivo</em> Erythropoese von humanen hämatopoetischen Stammzellen

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Transfecting and Nucleofecting Human Induced Pluripotent Stem Cells

Transfektion und Nucleofecting menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen

Genetic modification is continuing to be an essential tool in studying stem cell biology and in setting forth potential clinical applications of human ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

Reprogrammierung menschlichen Körperzellen in induzierte pluripotente Stammzellen (IPSCs) mit retroviralen Vektoren mit GFP

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...