Name: transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector at JoVE.com

<p>著者らは、子供の病院、hNSPC文化を提供するためのオレンジカウンティ研究所で国立ヒト神経幹細胞資源の博士フィリップH.シュワルツ氏に感謝します。 </p>

<p> <strong>注：継代ヒト神経幹細胞の</strong>記事（への参照<a href="/index/Details.stp?ID=263">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263</a> ）と<strong>カウントヒト神経幹細胞の</strong>記事（ <a href="/index/Details.stp?ID=262">https://www.jove.com /インデックス/ Details.stp？ID = 262</a> hNSPCsを再懸濁し、カウントする方法を学ぶ）。 </p><p class="jove_step">準備</p><ol><li>トランスフェクションのための使用可能なセル（各DNAは数百万の細胞がトラン...

<ol>
	<li>Gresch, O., Engel, F. B., Nesic, D., Tran, T. T., England, H. M., Hickman, E. S., Krner, I., Gan, L., Chen, S., Castro-Obregon, S., Hammermann, R., Wolf, J., M ller-Hartmann, H., Nix, M., Siebenkotten, G., Kraus, G., Lun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+non-viral+method+for+gene+transfer+into+primary+cells.">New non-viral method for gene transfer into primary cells.</a> <em style='font-style: italic'>Methods</em>. <b>33</b>, 151-163 (2004).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passaging+Human+Neural+Stem+Cells.">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+Human+Neural+Stem+Cells.">Counting Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li></ol>

<p>このプロトコルは、hNSPCsため、比較的迅速かつ効率的なトランスフェクションの手順を説明します。この手順を使用して、我々は、〜35％の初期のトランスフェクション効率を得ている。選択剤が安定にトランスフェクトされた人口を生成するために使用されている場合は、この手順でトランスフェクトした細胞は、短期試験（過渡的にトランスフェクションした細胞）のためにまたは長期的な研究に使用?...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>The Nucleofector Device</td>
<td>Tool</td>
<td>Amaxa</td>
<td>AAD-1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse neural stem cell nucleofector kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Amaxa</td>
<td>VPG-1004</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector

<p class="jove_content">このような一般的に使用されるカチオン性脂質トランスフェクション試薬によるヒト神経幹/前駆細胞（hNSPCs）、などの主要な哺乳類の神経細胞のトランスフェクションは、しばしば貧しい細胞の生存率と低いトランスフェクション効率をもたらした。このような遺伝子銃やマイクロインジェクションのような目的の遺伝子を導入する他の機械的な方法は、、悪い細胞の生存およびトランスフェクトした細胞の数が少ないことも限られている。初代細胞への外来遺伝子を導入するウイルスコンストラクトを使用しての戦略は、ウイルスベクターおよび潜在的な安全上の懸念を作成するために必要な時間と労力の両方によって制限されてきました。ここでは特に神経幹細胞のトランスフェクションに最適化された電流パラメータとバッファのソリューションでAmaxaのNucleofector装置と技術を使用してhNSPCsをトランスフェクトするためのステップバイステップのプロトコルを説明します。このプロトコルを使用して、我々は、〜35％の初期のトランスフェクション効率を達成し、安定したトランスフェクション後70％〜を有している。プロトコルは、Nucleofectorデバイスとエレクトロポレーションに続いて適切なバッファにトランスフェクトされるDNAとhNSPCsの高い数を組み合わせることが伴います。</p>

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Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

<p class="jove_content">細胞内に目的の遺伝子を導入することは生体内でその機能を解明するための強力な方法です。このプロトコルは、AmaxaによるNucleofectorエレクトロポレーション装置を用いてヒト神経幹/前駆細胞（hNSPCs）の文化をトランスフェクションの効率的な方法を説明します。</p>

Amaxa Nucleofectorでヒト神経幹細胞をトランスフェクト

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Research

JoVE Journal

Biology

Counting Human Neural Stem Cells

ヒト神経幹細胞を数える

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

Passaging Human Neural Stem Cells

ヒト神経幹細胞を継代

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

免疫細胞：ヒト神経幹細胞

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

光イメージングによる非侵襲的検出のための蛍光色素で標識幹細胞

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

マウス表皮神経堤幹細胞（EPI - NCSC）文化

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

StemgentヒトTFのレンチセットでヒト線維芽細胞を再プログラムすることによって誘導多能性幹細胞の生成

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

ニワトリ胚へのヒト幹細胞の異種移植

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

Lentiviral-mediated Knockdown During <em>Ex Vivo</em> Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

レンチウイルスを介したノックダウン中<em>生体外で</emヒト造血幹細胞の>赤血球

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Transfecting and Nucleofecting Human Induced Pluripotent Stem Cells

ヒト人工多能性幹細胞をトランスフェクトしNucleofecting

Genetic modification is continuing to be an essential tool in studying stem cell biology and in setting forth potential clinical applications of human ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

GFPをレトロウイルスベクターを用いた誘導多能性幹細胞（性IPSC）にヒト体細胞を再プログラミングする

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...