Name: transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector at JoVE.com

<p> 저자는 어린이의 병원, hNSPC 문화를 제공하는 오렌지 카운티 연구소 국립 인간 신경 줄기 세포 자원의 박사 필립 H. 슈워츠을 인정하고 싶습니다. </p>

<p> <strong>참고 : Passaging 인간 신경 줄기 세포 문서</strong> (참조 <a href="/index/Details.stp?ID=263">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263</a> ) 및 <strong>계산 인간 신경 줄기 세포 문서</strong> ( <a href="/index/Details.stp?ID=262">https://www.jove.com / 색인 / Details.stp? ID = 262</a> hNSPCs을 resuspend하고 계산하는 방법을 알아보려면). </p><p class="jove_step"> 준비 </p><ol><li> transfection에 사용할 세포의 많은 (각 DNA를 수백만 세포 transfected 수)가있다는 것을...

<ol>
	<li>Gresch, O., Engel, F. B., Nesic, D., Tran, T. T., England, H. M., Hickman, E. S., Krner, I., Gan, L., Chen, S., Castro-Obregon, S., Hammermann, R., Wolf, J., M ller-Hartmann, H., Nix, M., Siebenkotten, G., Kraus, G., Lun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+non-viral+method+for+gene+transfer+into+primary+cells.">New non-viral method for gene transfer into primary cells.</a> <em style='font-style: italic'>Methods</em>. <b>33</b>, 151-163 (2004).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passaging+Human+Neural+Stem+Cells.">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+Human+Neural+Stem+Cells.">Counting Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li></ol>

<p> 이 프로토콜은 hNSPCs에 대해 상대적으로 신속하고 효율적인 transfection 절차를 설명합니다. 이 절차를 사용하여, 우리는 ~ 35 %의 초기 transfection 효율을 획득했습니다. 선택 에이전트가 안정 transfected 인구를 생성하는 데 사용되는 경우에는이 절차에 의해 transfected 세포 단기 연구 (transiently transfected 세포) 또는 장기적인 연구에 사용될 수 있습니다. 우리는 외인성 단백질을 표현하는 세포의 70 %를 ~하는 안정 transfected...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>The Nucleofector Device</td>
<td>Tool</td>
<td>Amaxa</td>
<td>AAD-1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse neural stem cell nucleofector kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Amaxa</td>
<td>VPG-1004</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector

<p class="jove_content">이러한 일반적으로 사용되는 양이온 지질 transfection의 시약과 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)로 기본 포유류의 신경 세포의 Transfection은 종종 가난한 세포 생존 능력과 낮은 transfection 효율 결과입니다. 이러한 유전자 총을 또는 microinjection 같은 관심의 유전자를, 도입의 다른 기계적 방식은 또한 가난한 세포 생존과 transfected 세포의 낮은 숫자로 제한됩니다. 기본 세포로 외인성 유전자를 도입 바이러스 구조를 사용하는 전략은 바이러스 벡터 및 잠재적인 안전 문제를 만드는 데 필요한 시간의 금액과 노동 모두에 의해 제약되었습니다. 우리는 여기서 특별히 신경 줄기 세포를 transfecting에 최적화된 전류 매개 변수 및 버퍼 솔루션으로 Amaxa의 Nucleofector 장치와 기술을 사용하여 hNSPCs을 transfecting위한 단계별 절차를 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 ~ 35 %의 초기 transfection 효율을 달성하고 안정적​​인 transfection 후 70 % ~했습니다. 프로토콜은 장치와 함께 Nucleofector electroporation 다음 해당 버퍼에 transfected하는 DNA와 hNSPCs 높은 숫자를 결합 알아볼 수 있습니다.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector at JoVE.com

Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

<p class="jove_content">셀에 관심 유전자를 소개하면 생체내 년에 기능을 elucidating위한 강력한 방법입니다. 이 프로토콜은 Amaxa 만든 Nucleofector electroporation 장치를 사용하여 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)의 문화를 transfecting의 효율적인 방법을 설명합니다.</p>

Amaxa Nucleofector과 인간 신경 줄기 세포를 Transfecting

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Research

JoVE Journal

Biology

Counting Human Neural Stem Cells

인간 신경 줄기 세포를 계산

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

연구

생물학

Passaging Human Neural Stem Cells

인간 신경 줄기 세포를 Passaging

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

Immunocytochemistry : 인간 신경 줄기 세포

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

광학 이미징과 비침습 감지를위한 형광 염료와 함께 줄기 세포를 라벨링

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

마우스 표피 신경 크레스트 줄기 세포 (에피 NCSC) 문화

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

Stemgent 인간 TF의 Lentivirus와 인간의 섬유아 세포를 프로그래밍하여 유도 Pluripotent 줄기 세포의 생성 세트

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

치킨의 배아에 인간 줄기 세포의 Xenotransplantation

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

Lentiviral-mediated Knockdown During <em>Ex Vivo</em> Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral - 중재 최저 동안<em> 예 VIVO</em인간 조혈 줄기 세포의> 적혈구 조혈

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Transfecting and Nucleofecting Human Induced Pluripotent Stem Cells

인간 유도 만능의 줄기 세포를 Transfecting 및 Nucleofecting

Genetic modification is continuing to be an essential tool in studying stem cell biology and in setting forth potential clinical applications of human ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

GFP와 Retroviral 벡터를 사용하여 유도 Pluripotent 줄기 세포 (iPSCs)로 인간 체세포를 프로그래밍

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...