Name: transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector at JoVE.com

<p> Författarna vill tacka för Dr Philip H. Schwartz av den nationella människorättskommissionen Neural Stem Cell Resurs på Barnens s Hospital, Orange County Forskningscentralen för att ge hNSPC kulturer. </p>

<p> <strong>Obs:</strong> Se <strong>Passaging mänskliga neurala stamceller</strong> artikeln ( <a href="/index/Details.stp?ID=263">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263</a> ) och <strong>Counting mänskliga neurala celler Stem</strong> artikeln ( <a href="/index/Details.stp?ID=262">https://www.jove.com / index / Details.stp? ID = 262</a> ) att lära sig att resuspendera och räkna hNSPCs. </p><p class="jove_step"> Förberedelser </p><ol><li> Se till att det finns gott om celler som är tillgängliga för transfektion (flera miljoner c...

<ol>
	<li>Gresch, O., Engel, F. B., Nesic, D., Tran, T. T., England, H. M., Hickman, E. S., Krner, I., Gan, L., Chen, S., Castro-Obregon, S., Hammermann, R., Wolf, J., M ller-Hartmann, H., Nix, M., Siebenkotten, G., Kraus, G., Lun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+non-viral+method+for+gene+transfer+into+primary+cells.">New non-viral method for gene transfer into primary cells.</a> <em style='font-style: italic'>Methods</em>. <b>33</b>, 151-163 (2004).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passaging+Human+Neural+Stem+Cells.">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+Human+Neural+Stem+Cells.">Counting Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li></ol>

<p> Detta protokoll beskriver en relativt snabb och effektiv transfektion förfarande för hNSPCs. Med hjälp av denna procedur har vi fått första transfektion effektivitet på ~ 35%. Celler transfekterade genom detta förfarande kan användas för korttidsstudier (övergående transfekterade celler) eller för långsiktiga studier om ett urval medel används för att generera ett stabilt transfekterade befolkning. Vi har genererat stabilt transfekterade celler där ~ 70% av cellerna uttrycker exogent protein. I övergående transfekterade hN...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>The Nucleofector Device</td>
<td>Tool</td>
<td>Amaxa</td>
<td>AAD-1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse neural stem cell nucleofector kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Amaxa</td>
<td>VPG-1004</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

transfecting human neural stem cells with the amaxa nucleofector

<p class="jove_content">Transfektion av primär däggdjur neurala celler, såsom mänskliga neurala stamceller / föregångare celler (hNSPCs), med vanliga katjoniska reagenser lipid transfektion har ofta resulterat i dålig cellviabiliteten och låg transfektion effektivitet. Andra mekaniska metoder för att införa en gen, till exempel en gen pistol eller mikroinjektion, begränsas också av dålig cellviabiliteten och lågt antal transfekterade cellerna. Strategin att använda virala konstruktioner att införa en exogen genen i galvaniska element har begränsade av både tid och arbete som krävs för att skapa virala vektorer och potentiella säkerhetsproblem. Vi beskriver här en steg-för-steg-protokoll för transfecting hNSPCs använda Amaxa är Nucleofector enhet och teknik med elektrisk ström parametrar och lösningar buffert speciellt optimerad för transfecting neurala stamceller. Användning av detta protokoll, har vi uppnått första transfektion effektivitet på ~ 35% och ~ 70% efter en stabil transfektion. Protokollet innebär att kombinera ett stort antal hNSPCs med DNA ska transfekterade i lämplig buffert följt av elektroporation med Nucleofector enheten.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector at JoVE.com

Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

<p class="jove_content">Införandet av en gen av intresse i en cell är en kraftfull metod för att belysa dess funktion in vivo. Detta protokoll beskriver en effektiv metod för transfecting en kultur för mänskliga neurala stamceller / föregångare celler (hNSPCs) med hjälp av Nucleofector elektroporation apparaten från Amaxa.</p>

Transfecting mänskliga neurala stamceller med Amaxa Nucleofector

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Research

JoVE Journal

Biology

Counting Human Neural Stem Cells

Räkna mänskliga neurala stamceller

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

Passaging Human Neural Stem Cells

Passaging mänskliga neurala stamceller

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

Immuncytokemi: Mänskliga neurala stamceller

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Märkning stamceller med fluorescerande färger för icke-invasiv Detection med optisk avbildning

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

Mus Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) kulturer

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

Generering av inducerade pluripotenta stamceller genom att programmera humana med Stemgent mänskliga TF lentivirus Set

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

Xenotransplantation av mänskliga stamceller i Chicken Embryo

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

Lentiviral-mediated Knockdown During <em>Ex Vivo</em> Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-medierad Knockdown Under<em> Ex vivo</em> Erytropoes av mänskliga hematopoetiska stamceller

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Transfecting and Nucleofecting Human Induced Pluripotent Stem Cells

Transfektering och Nucleofecting Human inducerade pluripotenta stamceller

Genetic modification is continuing to be an essential tool in studying stem cell biology and in setting forth potential clinical applications of human ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

Omprogrammering Mänskliga somatiska celler in i inducerade pluripotenta stamceller (iPSCs) Använda retroviral vektor med GFP

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...