Name: assaying surface expression of chemosensory receptors in heterologous cells
Uploaded: 2011-02-23T17:30:00
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हम इस पांडुलिपि की महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए Matsunami प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद.

1. प्रक्रिया: प्रक्रिया तीन 3 दिनों के कुल समय पर पूरा भागों के शामिल हैं: कोशिकाओं के हस्तांतरण, अभिकर्मक और immunocytochemistry, एक कदम प्रति दिन बाहर किए गए. और पहले दो दिनों में कक्षों की अभिकर्मक स्थानां...

<ol>
	<li>Buck, L., Axel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+multigene+family+may+encode+odorant+receptors:+a+molecular+basis+for+odor+recognition.">A novel multigene family may encode odorant receptors: a molecular basis for odor recognition.</a> Cell. 65, 175-187 (1991).</li><li>Malnic, B., Hirono, J., Sato, T., Buck, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+receptor+codes+for+odors.">Combinatorial receptor codes for odors.</a> Cell. 96, 713-723 (1999).</li><li>Saito, H., Kubota, M., Roberts, R. W., Chi, Q., Matsunami, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RTP+family+members+induce+functional+expression+of+mammalian+odorant+receptors.">RTP family members induce functional expression of mammalian odorant receptors.</a> Cell. 119, 679-691 (2004).</li><li>Zhuang, H., Matsunami, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+cell-surface+expression+and+measuring+activation+of+mammalian+odorant+receptors+in+heterologous+cells.">Evaluating cell-surface expression and measuring activation of mammalian odorant receptors in heterologous cells.</a> Nat Protoc. 3, 1402-1413 (2008).</li></ol>

हर कदम से बाहर किया जाना चाहिए ध्यान से प्रमुख और विशिष्ट सतह धुंधला हो जाना सुनिश्चित है. पूरे धुंधला प्रक्रिया ठंड में बाहर किया जाना चाहिए (बर्फ पर), और ट्रे कवर फिसल जाता है जिस पर रखी हैं पहले ठंडा कि...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Cover slip 22 X 22 mm (#1)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>72200-11</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>16000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipofectamine 2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11668-019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minimal essential medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M4655</td>
<td>With L glutamate, Earle&#x2019;s salt and bicarbonate</td>
</tr>
<tr>
<td>Mowiol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>475904</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMS</td>
<td>19208</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) 1X </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>14025</td>
<td>With calcium chloride and magnesium chloride</td>
</tr>
<tr>
<td>HEPES Buffer Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>21-040-CV</td>
<td>Without calcium and magnesium</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly D Lysine Hydrobromide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P7280</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Azide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EM Science</td>
<td>SX0299-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture dish 35 X 10 mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>353801</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25300</td>
<td>0.05%</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

assaying surface expression of chemosensory receptors in heterologous cells

odors में से ज्वलंत दुनिया olfaction की भावना के द्वारा मान्यता प्राप्त है. चूहों में olfaction के एक प्रदर्शनों की सूची के बारे में 1200 जी प्रोटीन युग्मित (GPCRs) रिसेप्टर्स 1 कि अस्थिर odorant अणुओं बाँध माने हैं और intracellular सिग्नल में जी प्रोटीन Gαolf के साथ युग्मन द्वारा कोशिकी संकेत में परिवर्तित द्वारा मध्यस्थता है. Odorants के रिसेप्टर्स के लिए बाध्य करने के लिए एक मिश्रित नियम है, कि, एक odorant कई ​​रिसेप्टर्स बाँध सकता है और एक रिसेप्टर कई odorants 2 डिग्री बदलती करने के लिए बाध्य कर सकते हैं का पालन करने के लिए सोचा है. सुविधा बायोकेमिकल संकेतन, और ligand बाध्यकारी अध्ययन किया गया है सबसे GPCRs के लिए बाहर ले heterologous कोशिकाओं का उपयोग कर. हालांकि odorant रिसेप्टर्स के अध्ययन के लिए heterologous कोशिकाओं का उपयोग, एक लंबे समय के लिए रोका गया था के बाद से अभिकर्मक पर वे सतह के लिए निर्यात करने में विफल रहा है. Saito एट अल एक झिल्ली से गुजारें प्रोटीन रिसेप्टर (RTP) परिवहन परिवार संरक्षिकाओं घ्राण न्यूरॉन्स संवेदी heterologous कोशिकाओं में सतह, जब सह एक साथ 3 ट्रांसफ़ेक्ट यातायात odorant रिसेप्टर्स संरक्षिकाओं के रूप में कार्य में बढ़ाया अभिव्यक्ति का प्रदर्शन किया है. Heterologous कोशिकाओं का उपयोग रिसेप्टर्स के लिए जैव रासायनिक assays बाहर ले करने के लिए, एक पहले अगर रिसेप्टर सेल लाइन में मजबूत सतह अभिव्यक्ति से पता चलता है यह निर्धारित करना चाहिए. यह निगरानी RTP1S रहते fluorescently कोशिकी डोमेन या बाह्य डोमेन में विशेष रूप से एक टैग लेबल धुंधला सेल द्वारा पीछा के साथ रिसेप्टर्स overexpressing assayed द्वारा किया जा सकता है है. यहाँ हम एक प्रोटोकॉल का प्रदर्शन करने के लिए बाहर रहते सेल धुंधला हो जाना है कि HEK293T कोशिकाओं की सतह पर odorant रिसेप्टर्स सुविधा का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ले. इसके अलावा, यह भी अन्य chemosensory रिसेप्टर्स या GPCRs की सतह अभिव्यक्ति के लिए परख के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

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Assaying Surface Expression of Chemosensory Receptors in Heterologous Cells

यहाँ हम एक प्रोटोकॉल का प्रदर्शन करने के लिए बाहर रहते सेल धुंधला हो जाना है कि HEK293T कोशिकाओं की सतह पर odorant रिसेप्टर्स सुविधा का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ले. इसके अलावा, यह भी अन्य chemosensory रिसेप्टर्स या GPCRs की सतह अभिव्यक्ति के लिए परख के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

Heterologous कक्ष में Chemosensory रिसेप्टर्स की सतह अभिव्यक्ति परख

The vivid world of odors is recognized by the sense of olfaction. Olfaction in mice is mediated by a repertoire of about 1200 G Protein Coupled Receptors ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

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लोकोमोटर गतिविधि परख के लिए अध्ययन circadian rhythms और पैरामीटर्स नींद ड्रोसोफिला</em

Most life forms exhibit daily rhythms in cellular, physiological and behavioral phenomena that are driven by endogenous circadian (&equiv;24 hr) ...

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में परख लोकोमोटर, सीखना, और स्मृति घाटे ड्रोसोफिला Neurodegeneration के मॉडल

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Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

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संवेदी अंग अग्रदूत साबित कोशिकाओं के बरकरार में लाइव सेल इमेजिंग ड्रोसोफिला Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolating Nasal Olfactory Stem Cells from Rodents or Humans

नाक कृन्तकों या मनुष्य से घ्राण स्टेम सेल को अलग

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Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay

Hippocampal न्यूरॉन्स में डीएनए की क्षति परख धूमकेतु परख का उपयोग

A number of drugs target the DNA repair pathways and induce cell kill by creating DNA damage. Thus, processes to directly measure DNA damage have been ...

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

केकड़े अंगों में Proprioception और तनाव रिसेप्टर्स: छात्र प्रयोगशाला अभ्यास

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Neuronal फायरिंग दरों के हेरफेर से astrocytic रिसेप्टर्स की Plasticity उत्प्रेरण

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Determining Cell-surface Expression and Endocytic Rate of Proteins in Primary Astrocyte Cultures Using Biotinylation

बायोटिनिलेशन का उपयोग करते हुए प्राइमरी एस्ट्रोसाइट संस्कृतियों में प्रोटीन की कोशिका-सतह अभिव्यक्ति और एन्डोसाइटिक दर निर्धारित करना

Cell-surface proteins mediate a wide array of functions. In many cases, their activity is regulated by endocytic processes that modulate their levels at ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Sialoglycan के मेटाबोलिक लेबलिंग द्वारा प्राथमिक तंत्रिका स्टेम और संतति कोशिकाओं के सेल सतह मार्करों की पहचान

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...