Name: assaying surface expression of chemosensory receptors in heterologous cells
Uploaded: 2011-02-23T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assaying Surface Expression of Chemosensory Receptors in Heterologous Cells at JoVE.com

Мы благодарим членов Мацунами лабораторию для критического чтения этой рукописи.

1. Порядок действий: Процедура состоит из трех частей завершила более общее время 3-х дней: передача клеток, трансфекции и иммуноцитохимия, один шаг осуществляется в день. Передача и трансфекции клеток в течение первых двух дней должна проводиться в стерильных условиях в к...

<ol>
	<li>Buck, L., Axel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+multigene+family+may+encode+odorant+receptors:+a+molecular+basis+for+odor+recognition.">A novel multigene family may encode odorant receptors: a molecular basis for odor recognition.</a> Cell. 65, 175-187 (1991).</li><li>Malnic, B., Hirono, J., Sato, T., Buck, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+receptor+codes+for+odors.">Combinatorial receptor codes for odors.</a> Cell. 96, 713-723 (1999).</li><li>Saito, H., Kubota, M., Roberts, R. W., Chi, Q., Matsunami, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RTP+family+members+induce+functional+expression+of+mammalian+odorant+receptors.">RTP family members induce functional expression of mammalian odorant receptors.</a> Cell. 119, 679-691 (2004).</li><li>Zhuang, H., Matsunami, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+cell-surface+expression+and+measuring+activation+of+mammalian+odorant+receptors+in+heterologous+cells.">Evaluating cell-surface expression and measuring activation of mammalian odorant receptors in heterologous cells.</a> Nat Protoc. 3, 1402-1413 (2008).</li></ol>

Каждый шаг должен быть проведена тщательно, чтобы гарантировать известных и отличительные поверхности окрашивания. Весь процесс окрашивания должны выполняться в холодную (на льду), и подносом, на котором крышка скользит проложены должен быть охлажден до использования, чтобы обеспечи?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Cover slip 22 X 22 mm (#1)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>72200-11</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>16000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipofectamine 2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11668-019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minimal essential medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M4655</td>
<td>With L glutamate, Earle&#x2019;s salt and bicarbonate</td>
</tr>
<tr>
<td>Mowiol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>475904</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMS</td>
<td>19208</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) 1X </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>14025</td>
<td>With calcium chloride and magnesium chloride</td>
</tr>
<tr>
<td>HEPES Buffer Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>21-040-CV</td>
<td>Without calcium and magnesium</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly D Lysine Hydrobromide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P7280</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Azide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EM Science</td>
<td>SX0299-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture dish 35 X 10 mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>353801</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25300</td>
<td>0.05%</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

assaying surface expression of chemosensory receptors in heterologous cells

Яркий мир запахов признается чувство обоняния. Обоняние у мышей опосредованы репертуаре около 1200 G белком рецепторы (GPCR) 1, которые постулируются для связывания летучих молекул одоранта и преобразования внеклеточного сигнала в внутриклеточного сигнала связи с G белком Gαolf. Связывание одорантов на рецепторы, как полагают, следовать комбинаторной правило, то есть тот, одоранта может связывать несколько рецепторов и одного рецептора может связывать несколько отдушки и в разной степени 2. Биохимические, сигнализации и связывание лигандов исследований было удобно проводить для большинства GPCRs использовании гетерологичной клеток. Однако использование гетерологичной клеток для изучения рецепторов одоранта, была исключена в течение длительного времени, так как на трансфекции им не удалось экспортировать на поверхность. Сайто и др. показали, одного рецептора мембраны проходят Транспортировка белка (RTP) семья сопровождающих шоу повышенной экспрессии в обонятельной сенсорных нейронов и выступают в качестве сопровождающих для движения одоранта рецепторами на поверхности клетки в гетерологичных, когда совместно трансфицированных вместе 3. Для проведения биохимических анализов для рецепторов использовании гетерологичной клетки, нужно сначала определить, если рецептор показывает надежную выражение поверхности клеточной линии. Это может быть проанализированы по гиперэкспрессией рецепторов с сопровождающим RTP1S последующим окрашиванием живой клетки к флуоресцентно этикетке внеклеточного домена или тег в внеклеточный домен исключительно. Здесь показано, протокол проводить окрашивание живой элемент, который может быть использован для обнаружения одоранта рецепторами на поверхности клетки HEK293T удобно. Кроме того, она также может быть использована для анализа на поверхности экспрессию других хемосенсорных рецепторов или GPCRs.

Watch this Scientific Journal Video about Assaying Surface Expression of Chemosensory Receptors in Heterologous Cells at JoVE.com

Assaying Surface Expression of Chemosensory Receptors in Heterologous Cells

Здесь показано, протокол проводить окрашивание живой элемент, который может быть использован для обнаружения одоранта рецепторами на поверхности клетки HEK293T удобно. Кроме того, она также может быть использована для анализа на поверхности экспрессию других хемосенсорных рецепторов или GPCRs.

Опробование поверхностного Выражение хемосенсорных рецепторов в клетках Гетерологическая

The vivid world of odors is recognized by the sense of olfaction. Olfaction in mice is mediated by a repertoire of about 1200 G Protein Coupled Receptors ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

Опробование двигательную активность по изучению циркадные ритмы сна и параметров в Drosophila</em

Most life forms exhibit daily rhythms in cellular, physiological and behavioral phenomena that are driven by endogenous circadian (&equiv;24 hr) ...

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Опорно-двигательного опробование, обучение и память Дефицит Drosophila Модели нейродегенерации

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

Спинной мозг электрофизиологии II: внеклеточной изготовление электродов Всасывающая

Development of neural circuitries and locomotion can be studied using neonatal rodent spinal cord central pattern generator (CPG) behavior. We demonstrate ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-ячейки изображения сенсорных клеток-предшественников органов в интактных Drosophila Куколки

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolating Nasal Olfactory Stem Cells from Rodents or Humans

Изоляция Носовые Обонятельные стволовых клеток от грызунов и человека

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external ...

Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay

Пробирного повреждений ДНК в нейронах гиппокампа с помощью комет

A number of drugs target the DNA repair pathways and induce cell kill by creating DNA damage. Thus, processes to directly measure DNA damage have been ...

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

Проприоцепция и Натяжные Рецепторы в Краб конечностей: Студент лабораторных занятий

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Склонение пластичности астроцитов рецепторов манипуляциями нейронных уровней расхода топлива

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Determining Cell-surface Expression and Endocytic Rate of Proteins in Primary Astrocyte Cultures Using Biotinylation

Определение экспрессии клеточной поверхности и эндоцитарной скорости белков в культурах первичных астроцитов с использованием биотинилирования

Cell-surface proteins mediate a wide array of functions. In many cases, their activity is regulated by endocytic processes that modulate their levels at ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Определение клеточных поверхностных маркеров первичных нейронных стволовых и клеток-прародителей путем метаболической маркировки сиалогликан

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...