Name: assaying surface expression of chemosensory receptors in heterologous cells
Uploaded: 2011-02-23T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assaying Surface Expression of Chemosensory Receptors in Heterologous Cells at JoVE.com

Bu yazının eleştirel okuma Matsunami laboratuvar üyelerine teşekkür ediyorum.

1. Prosedür: Bu prosedür, 3 gün toplam zaman içinde tamamlandı üç bölümden oluşmaktadır: hücrelerinin transferi, transfeksiyon ve immünhistokimya Hergün yürütülen bir adım. Ilk iki gün içinde transferi ve hücrelerin transfeksiyon laminer akış odasında steril şartlarda yapılmalıdır. 1. Gün: yüzey ifade testi için HEK293T hücre aktarın. <ol><li> Transferi orta (M10):% 10 (hacimce) steril durumda fetal sığır serumu ile takviye asga...

<ol>
	<li>Buck, L., Axel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+multigene+family+may+encode+odorant+receptors:+a+molecular+basis+for+odor+recognition.">A novel multigene family may encode odorant receptors: a molecular basis for odor recognition.</a> Cell. 65, 175-187 (1991).</li><li>Malnic, B., Hirono, J., Sato, T., Buck, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+receptor+codes+for+odors.">Combinatorial receptor codes for odors.</a> Cell. 96, 713-723 (1999).</li><li>Saito, H., Kubota, M., Roberts, R. W., Chi, Q., Matsunami, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RTP+family+members+induce+functional+expression+of+mammalian+odorant+receptors.">RTP family members induce functional expression of mammalian odorant receptors.</a> Cell. 119, 679-691 (2004).</li><li>Zhuang, H., Matsunami, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+cell-surface+expression+and+measuring+activation+of+mammalian+odorant+receptors+in+heterologous+cells.">Evaluating cell-surface expression and measuring activation of mammalian odorant receptors in heterologous cells.</a> Nat Protoc. 3, 1402-1413 (2008).</li></ol>

Her adım, belirgin ve ayırt edici bir yüzey boyama sağlamak için dikkatli bir şekilde yapılmalıdır. Tüm boyama işlemi soğuk (buz) yürütülen olmalıdır ve kapak fişleri hangi tepsiye serilir hücreleri hayatta kalmak sağlamak için kullanmadan önce soğutulması gerekir. Ayrıca fiksasyon yüzey boyama sürecinin sonunda yapılır. Bu fiksasyon birincil ve ikincil antikorlar hücre zarı permeabilize boyama önce iç boyası ile keskin bir kontrast. Hücreleri kurumasını önlemek için kapak fişleri...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Cover slip 22 X 22 mm (#1)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>72200-11</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>16000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipofectamine 2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11668-019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minimal essential medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M4655</td>
<td>With L glutamate, Earle&#x2019;s salt and bicarbonate</td>
</tr>
<tr>
<td>Mowiol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>475904</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMS</td>
<td>19208</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) 1X </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>14025</td>
<td>With calcium chloride and magnesium chloride</td>
</tr>
<tr>
<td>HEPES Buffer Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>21-040-CV</td>
<td>Without calcium and magnesium</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly D Lysine Hydrobromide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P7280</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Azide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EM Science</td>
<td>SX0299-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture dish 35 X 10 mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>353801</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25300</td>
<td>0.05%</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

assaying surface expression of chemosensory receptors in heterologous cells

Kokuları koku alma duygusunu canlı dünya tarafından kabul edilmektedir. Farelerde koku, uçucu odorant molekülleri bağlamak için öne ve G proteini Gαolf ile kaplin bir hücre içi sinyal ekstraselüler sinyal dönüştürme yaklaşık 1200 G Protein Coupled reseptörleri (GPCRs) 1 bir repertuar ile meydana gelir . Koku reseptörleri bağlayıcı, çeşitli reseptörler bir odorant bağlamak ve bir reseptör derece 2 değişen çeşitli koku bağlamak Kombinatoryal kural takip etmek düşünülmektedir. Biyokimyasal, sinyalizasyon ve ligand bağlanma çalışmaları uygun heterolog hücreleri kullanarak en GPCRs için yürütülen edilmiştir. Ancak, transfeksiyon yüzeye ihracat başarısız beri odorant reseptörlerinin çalışma için heterolog hücrelerinin uzun bir süre engellediği. Saito et al aile şaperonlar co birlikte 3 transfekte heterolog hücrelerinin yüzeyinde, trafik odorant reseptörleri şaperonlar olarak koku duyusal nöronlar ve hareket gelişmiş ifade Protein taşınması tek zarından geçişine Reseptör (RTP) göstermiştir. Reseptör hücre hattı sağlam yüzey ekspresyonu gösterir heterolog hücreleri kullanarak reseptörleri için biyokimyasal testleri yürütmek için bir ilk belirlemeniz gerekir. Bu canlı hücre floresan ekstrasellüler özel ekstrasellüler etki alanı veya bir etiket etiket boyama takip şaperon RTP1S reseptörleri eksprese tarafından test edilebilir. Burada odorant reseptörleri HEK293T hücrelerinin yüzeyinde rahatlıkla tespit etmek için kullanılan olabilir canlı hücre boyama yürütmek için bir protokol göstermektedir. Buna ek olarak, aynı zamanda, diğer kimyasal-duyusal reseptörleri veya GPCRs yüzey ekspresyonu tahlil için kullanılır.

Watch this Scientific Journal Video about Assaying Surface Expression of Chemosensory Receptors in Heterologous Cells at JoVE.com

Assaying Surface Expression of Chemosensory Receptors in Heterologous Cells

Burada odorant reseptörleri HEK293T hücrelerinin yüzeyinde rahatlıkla tespit etmek için kullanılan olabilir canlı hücre boyama yürütmek için bir protokol göstermektedir. Buna ek olarak, aynı zamanda, diğer kimyasal-duyusal reseptörleri veya GPCRs yüzey ekspresyonu tahlil için kullanılır.

Heterolog Hücreler kimyasal-duyusal reseptörleri Yüzey İfade Assaying

The vivid world of odors is recognized by the sense of olfaction. Olfaction in mice is mediated by a repertoire of about 1200 G Protein Coupled Receptors ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

Sirkadiyen Rhythms Eğitim ve Parametreler Uyku Lokomotor Aktivitesi Assaying Drosophila</em

Most life forms exhibit daily rhythms in cellular, physiological and behavioral phenomena that are driven by endogenous circadian (&equiv;24 hr) ...

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Lokomotor, Öğrenme ve Hafıza Açıkları. Drosophila Nörodejenerasyon, modeller

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

Omurilik Elektrofizyoloji II: Ekstrasellüler Emiş Elektrot İmalatı

Development of neural circuitries and locomotion can be studied using neonatal rodent spinal cord central pattern generator (CPG) behavior. We demonstrate ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolating Nasal Olfactory Stem Cells from Rodents or Humans

Kemirgenler ve İnsanlar Burun Koku Kök Hücreler Yalıtımlı

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external ...

Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay

Comet Assay kullanma Hipokampal Nöronlar DNA Hasarı assaying

A number of drugs target the DNA repair pathways and induce cell kill by creating DNA damage. Thus, processes to directly measure DNA damage have been ...

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

Yengeç Parmak Propriyoseptör ve Gerilim reseptörleri: Öğrenci Laboratuvarı Egzersizler

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Nöronal Ateşleme Oranlarının Manipülasyon tarafından Astrositik reseptörleri Plastisite Inducing

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Determining Cell-surface Expression and Endocytic Rate of Proteins in Primary Astrocyte Cultures Using Biotinylation

Primer Astrosit Kültürlerinde Proteinlerin Hücre-Yüzey İfadesi ve Endosit Oranının Biyotinleme Yöntemiyle Belirlenmesi

Cell-surface proteins mediate a wide array of functions. In many cases, their activity is regulated by endocytic processes that modulate their levels at ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Primer Nöral Kök ve Progenitor Hücrelerinin Hücre Yüzey Belirteçlerinin Sialoglycan'ın Metabolik Etiketlemesi ile Belirlenmesi

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...