Name: electrophysiological recordings from the giant fiber pathway of d. melanogaster
Uploaded: 2011-01-14T17:00:00
Duration: 12 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster at JoVE.com

وأيد هذا العمل من خلال منحة يلكوم ترست ليرة لبنانية

1. المعدات والمواد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هذه التجارب استخدام الإعداد الكهربية القياسية تتألف من منشط ، وحدة العزلة التحفيز ، ومكبرات microelectrode اثنين ، نظام الحصول على البيانات وجهاز كمبيوتر مع برنامج المجموعة. معدات إضافية تشمل قفص فاراداي ، وهو stereomicroscope على الوقوف الازدهار ، جدول عزل الاهتزاز ، ومصدر الضوء ، ومنبرا التسجيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتستخدم خمسة micromanipulators. micromanipulators اثنين تحتاج إلى ضوابط دقيقة لتحديد المواقع الأقطاب تسجيل ، في حين أن الثلاثة الآخرين micromanipulators تتطلب سوى ضوابط الإجمالي للموقف أقطاب التحفيز الكهربائي اثنين والأرض. يوضع القطب الكهربائي micromanipulator للتسجيل DLM في نهاية الذيل من إعداد (يسار مجرب) ويتم وضع micromanipulator للتسجيل الكهربائي بين الايراد والمجرب جانب إعداد (إلى اليسار قليلا من مجرب). توضع micromanipulators اللذين سيعقدان الأقطاب محاكاة على رأس إعداد (حق مجرب). يوضع القطب الكهربائي لmicromanipulator الأرض في الجانب البعيد من إعداد </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب microelectrodes تسجيل الزجاج مع المقاومة من 40-60 MΩ وتخزينها في صحن مسطح تدعمها الشمع. لتحفيز ، تستخدم قطبين التنغستن الكهربائي (هيدروكسيد الصوديوم) شحذ. يستخدم سلك التنجستن ، أو القطب الكهربائي third ملفقة كسبب. مستعدون لأقطاب الأرض ، وحفز وتعلق على micromanipulators قبل بدء الدورة التجريبية وليس من الضروري أن يستعاض عن مدة الدورة. </li></ol> 2. إعداد د. melanogaster <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حالما يتم تعيين المعدات الخاصة بك ، حان الوقت لتحضير الذباب. تخدير الذباب عن طريق التبريد عليها الجليد أو باستخدام ثاني أكسيد الكربون 2. إذا تم استخدام CO 2 ، ثم السماح الوقت الكافي (حوالي 20mins) عن الآثار المترتبة على الغاز ليزول قبل بداية التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط لنقل الذباب بلطف من أرجلهم إلى صحن يحتوي على منصة من الشمع لينة منحدر بزاوية 45 درجة تقريبا. تتم الأربع المقبلة خطوات تحت مجهر تشريح بعيدا عن (ولكن على مقربة من) معدات تسجيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> والخطوة التالية هي لتأمين الطيران في الشمع. الجانب المشرق يطير أسفل بطني ، وصعودا الأمامية التي تواجه فيها على منحدر. باستخدام زوج من ملقط غرامة ، وتمديد الساقين إلى الخارج ، في أزواج ، ودفعهم إلى الشمع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تآلف مع المكان من العضلات التي سيتم تسجيلها من : العضلة الظهرية طولية ، أو DLM ، والعضلات tergotrochanteral ، أو الايراد. مواقع المرفق تحت البشرة من DLMs تتطابق مع المنطقة الواقعة بين خط الوسط الصدري الظهري الأمامي وشعيرات (أو setae). وتقع مواقع المرفق الايراد ظهريا من شعيرات فوق الجناحية الخلفي والأمامي. التأكد من أن الأجنحة وعدم عرقلة الوصول إلى الألياف DLM أو الايراد ، الاستمرار على الأجنحة والخارج &quot;اللحمة&quot; لهم الشمع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط الزوج غرامة ، وسحب خرطوم بعناية في الخارج ، وضمان الحصول عليها عن طريق غمر عليه في الشمع. هذه هي الخطوة الحاسمة التي تتطلب بعض الممارسة منذ خرطوم لينة وغير منفصلة عن بقية بسهولة من الرأس. إذا حدث ذلك ، رفض الطيران والبدء من جديد. الفشل في تأمين الرأس بهذه الطريقة يؤدي إلى مشاكل عند إدراج الأقطاب من خلال تحفيز العينين. </li></ol> 3. وضع أقطاب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة ويرتكز على ذبابة على الشمع ، ونقل الطبق مع الذبابة المرفقة تحت stereomicroscope الموجود داخل قفص فاراداي. توجيه يطير جانبيا مع رئيس يطير إلى يمين المجرب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> والخطوة التالية هي لإدراج الأقطاب. يمكن إدراج الأرض وتحفيز كهربائي دون النظر من خلال المجهر. تسجيلات جيدة تعتمد على خوزقة دقيقة ، لذلك هو فكرة جيدة لممارسة التعامل مع micromanipulators. جلب الأقطاب على مقربة من مواقع الإدراج بمساعدة micromanipulators لتسهيل وضع اطارها الصحيح وتسجيلات لاحقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انخفاض القطب الأرض في نهاية الخلفي من البطن باستخدام عجلات التعديل على micromanipulator. وضع أقطاب كهربائية التنغستن شحذ تحفيز في الدماغ ، واستخدام micromanipulator لموقف طرف واحد من الأقطاب الكهربائية بحيث يلمس مجرد واحدة من عيون الذبابة. أن تفعل الشيء نفسه مع كل من الأقطاب الأخرى حتى يتم لمس للتو خارج من كل عين. ثم دفع الأقطاب ، بدوره ، من خلال كل عين حتى نصائح من الأقطاب الكهربائية تصل إلى المخ يقع في الجزء الخلفي من الكبسولة الرأس (حوالي 3mm - 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف توضع الأقطاب بشكل صحيح تنشيط نظام الألياف العملاق. لاختبار التي يتم وضعها بشكل صحيح تحفيز الأقطاب ، وتطبيق قصيرة (0.03 مللي ثانية) التحفيز من 30-60V عبر تحفيز كهربائي ، ونتطلع لحركة الأجنحة وتشنجات في العضلات الطيران / الساق &#39; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخطوة التالية هي العودة ملء microelectrodes الزجاج مع بوكل 3M هاملتون أو باستخدام حرارة سحبت حقنة بلاستيكية ، ووضعها في micromanipulators غرامة السيطرة. يمكن استخدامها بشكل صحيح لmicroelectrodes إدراج عدة جولات من التجارب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سيتم إدراج القطب التسجيل أولا في الألياف DLM. هناك نوعان من DLMs متماثل ثنائيا ؛ تتألف كل واحدة من ست ألياف العضلات الفردية. ويمكن القيام التسجيلات من أي من ألياف الستة ؛ ومع ذلك ، والأكثر شيوعا هي الألياف 45A DLM 45b ونظرا لسهولة عملها بشكل جيد من خلال الجانب الظهري للبشرة الصدر ، وحقيقة أن كل من ألياف معصب من قبل نفس motorneuron . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام micromanipulator على الجانب الأبعد من أنت ، اضافة الى وجود القطب تسجيل في DLM الألياف 45A أو (ب) المنحدر من منصة يسمح القطب DLM للدخول في إهاب الظهرية بزاوية ~ · 6-90 ، والذي يساعد الاختراق. استخدام البرنامج في وضع الذبذبات وإلقاء نظرة على شاشة الكمبيوتر أثناء إدخال أقطاب تسجيل في القفص الصدري. عندما دخلت الكهربائي في عضلة الأساس سوف تنخفض إلى الصفر تقريبا أو قيمة سالبة. اختبار مع التحفيز واحد لمعرفة ما إذا كان يمكنك مراقبة استجابة العضلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج القطب تسجيل أخرى في الايراد الأقرب لك. يتم إدراج هذا القطب أفقيا ، وأمامك ، ويرجع ذلك إلى الموقع من عضلة موقع المرفق. نلاحظ مرة أخرى على القيام بذلك في حين رصد واختبار واحد مع التحفيز مرة واحدة تتبع يشير القطب هو في العضلات. </li></ol> 4. التحفيز وتسجيل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنت الآن على استعداد لبدء حفز الدماغ والاستجابات التسجيل من الساق وعضلات الطيران. تطبيق قصيرة (0.03 مللي ثانية) التحفيز عبر الأقطاب تحفيز ابتداء من الساعة الخامسة وزيادة 30 الى 60 حتى الخامس لاحظت استجابة (أي شد العضلات ، وخلايا العضلات الاستقطاب كما لوحظ على شاشة الكمبيوتر). للفترة المتبقية من هذه التجربة ، تعيين الخامس 50-10 الجهد فوق عتبة الاستجابة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لقياس زمن الاستجابة ، وإعطاء ما لا يقل عن 5 المحفزات واحدة مع بقية فترة 5 ثانية بين كل التحفيز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد &quot;تواتر التالي&quot; من خلال تقديم محفزات للقطارات بمعدلات مختلفة. عادة تعطى 10 قطارا من 10 في مثيرات 100Hz (10ms بين كل التحفيز) ، 200Hz (5ms بين كل التحفيز) و 300Hz (3ms بين كل التحفيز). السماح لفترة راحة من 2 ثانية بين كل قطار من المحفزات. </li></ol> 5. النتائج : الاستجابة والإختفاء بعد تواتر في المسار الألياف العملاق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكمون هو الوقت استجابة بين تحفيز الدماغ والاستقطاب من العضلات. هذا الرقم يقارن الإختفاء استجابة لDLM والايراد لحافز واحد. الإختفاء بين 0.7 و 1.2 مللي للمسار GF - الايراد وبين 1.3 و 1.7 مللي للمسار GF - DLM تشير إلى إعداد صحي وسليم تقنيات التسجيل. يمكن أن تختلف مع الإختفاء ، راثى درجة الحرارة ، والخلفية الوراثية والعمر. الشكل 1 (A و B). الممثل تظهر اثار ردود المسجلة من TTMs وDLMs التالية حافز واحد ينطبق على الدماغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما هو موضح هنا ، والتسجيلات من الايراد ابداء المزيد من التباين من حيث السعة والشكل من المحتمل بعد المشبكي (PSP) مقارنة بتلك التي من ألياف DLM كبيرة ، وهذا التباين المتزايد يرجع إلى صغر حجم الألياف العضلية الايراد. هذا التغير ، ومع ذلك ، لا يؤثر على قيم استتار استجابة لمسار الألياف إلى الايراد العملاق. &#39;الكمون رد فعل&quot; الرقم 1 (C و D). وعلاوة على ذلك آثار من 4 الذباب الفردية عن الايراد على حد سواء وDLM. علما الايراد تقلب يتتبع المعرض في شكل PSP لكن استتار الاستجابة تتأثر. لDLM هناك أقل من التباين في الشكل PSP. <img src="/files/ftp_upload/2412/2412fig1.jpg" alt="الشكل 1 A - D" /> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقارنة بين &quot;تواتر التالية&quot; عند 100 هرتز ، 200 هرتز ، و300 هرتز من خلال حساب نسبة الاستجابات الناجحة (من أصل 10) على حد سواء ومسارات DLM الايراد في كل تردد التحفيز. عند 100 هرتز ، سواء الايراد وDLM اتبع 01:01 المحفزات. التحفيز على ترددات أعلى من 100 هرتز ، والاستجابات DLM بدء اظهار فشل لأن المشبك كيميائية وسيطة بين اثنين interneurons لا يملك وقتا كافيا لاسترداد بين المنبهات. ردود الايراد ، ومع ذلك ، لا تزال حتى 01:01 مع المحفزات وراء 300Hz. الشكل 2. آثار الممثل تبين &quot;بعد تردد&quot; التسجيلات. في 100Hz ، سواء TTMs DLMs والاستجابة لجميع المنبهات 10 (يسار). في 200Hz ، ردود DLM بدء فشل (النجمة). <img src="/files/ftp_upload/2412/2412fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> </li></ol>6. ممثل النتائج البرية نوع الاستجابات قصيرة الكمون (توضع الأقطاب الإلكترونية المبرمجة في العيون ، وتجاوز المستقبلات الحسية والتسبب في الدائرة GF مباشرة) تعتمد على التركيب الوراثي ، الخلفية الوراثية ، ودرجة الحرارة والعمر ، وتتراوح بين 0.7 و 1.2 مللي للمسار GF - الايراد و 1،3 مللي and1.7 عن المسار GF - DLM (Tanouye وايمان ، 1980 ؛ توماس وايمان ، 1984 ؛ إنجل و وو ، 1992 ؛ وألين Murphey ، 2007 ؛ فيلان وآخرون ، 2008 ؛. أوغسطين وآخرون ، غير منشورة). . هذا الكمون الايراد قصيرة جدا ويرجع ذلك إلى قوة المشبك الكهروكيميائية GF - TTMn من المسار الأحادي المشبك والكمون يعد DLM يحدث بسبب طبيعة disynaptic من المسار ، فضلا عن وجود مادة كيميائية المشبك (PSI - DLMn). المتوسطة والطويلة الكمون الردود (&gt; 3 مللي ثانية) نتيجة تفعيل afferents GF وتحقيق إما باستخدام التحفيز أقل كثافة أو تقديم البصرية (&quot;ضوء قبالة&quot;) إشارة. في 100Hz يجب على الايراد وDLM اتبع المحفزات 1:1. أعلاه سوف 100Hz ردود DLM بدء اظهار فشل مثل المشبك الكيميائي بين المبادرة وDLMns وليس لديها ما يكفي من الوقت لاسترداد بين المحفزات أقل من 10ms إربا. ردود الايراد ، ومع ذلك ، سيبقى مع المثيرات 01:01 حتى بعد 300Hz (Tanouye وايمان ، 1980 ؛ إنجل و وو ، 1992 ؛. آلن وآخرون ، 2007 ؛. مارتينيز وآخرون ، 2007). الطفرات في الجينات shakB ، ترميز فجوة ذبابة الفاكهة تقاطع قناة (&quot;innexin&quot;) ، زيادة كبيرة في زمن الاستجابة للمسار GF - الايراد (~ 1،5 مللي ثانية) في حين أن فرع GF - DLM لا يستجيب (ألين وMurphey ، 2007 ؛ فيلان وآخرون ، 2008). يمكن استعادة استجابة طافرة من خلال تحفيز العقد الصدرية مباشرة ، مما يدل على أن تأثير تأخر ليس بسبب تعطل انتقال العصبية والعضلية. ويضعف أيضا القدرة على متابعة وتيرة عالية التحفيز في هذه المسوخ مقارنة نوع البرية الذباب حيث مسارات GF - DLM وGF - الايراد وعادة ما تكون قادرة على متابعة 10 منبهات مع نسبة 1:1 ما يصل الى 100 هرتز و 300 هرتز ، على التوالي. ومن المهم أن نلاحظ أن هذه الترددات هي أعلى بكثير الترددات التحفيز الطبيعي للعضلات التي تلقاها التعاقد خلال الرحلة مستمرة (3-10 هرتز) (Hummon وكوستيلو ، 1989). معلمة أخرى تستخدم لوصف الاستقرار في النواتج GFS هو &quot;فترة الحرارية&quot; ، أو الحد الأدنى من الوقت بين توأمين البقول التحفيز التي تنتج ما زال ردين من العضلات. الوقت الحرارية تتراوح ما بين 1-4 مللي لTTMs و7-15 مللي لDLMs. لفترة طويلة نسبيا لصهر DLMs يرجع إلى عطوب نسبيا المشابك الكيميائية في مفترق PSI - DLMn (Tanouye وايمان ، 1980 ؛ Gorczyca وقاعة ، 1984 ؛ إنجل و وو ، 1992 ؛ بانيرجي وآخرون ، 2004 ؛. ألين وGodenschwege ، 2010).

<ol>
	<li>Allen, M. J., Godenschwege, T., Zhang, B., Freeman, M. R., Wadde, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Drosophila+Giant+Fiber+System.">Electrophysiological Recordings from the Drosophila Giant Fiber System.</a> Drosophila Neurobiology: A Laboratory Manual. , (2010).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin Cell Dev Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Allen, M. J., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemical+component+of+the+mixed+GF-TTMn+synapse+in+Drosophila+melanogaster+uses+acetylcholine+as+its+neurotransmitter.">The chemical component of the mixed GF-TTMn synapse in Drosophila melanogaster uses acetylcholine as its neurotransmitter.</a> Eur J Neurosci. 26, 439-445 (2007).</li><li>Banerjee, S., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+flight+and+associated+neuronal+rhythmicity+in+inositol+1,4,5-trisphosphate+receptor+mutants+of+Drosophila.">Loss of flight and associated neuronal rhythmicity in inositol 1,4,5-trisphosphate receptor mutants of Drosophila.</a> J Neurosci. 24, 7869-7878 (2004).</li><li>Engel, J. E., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+of+membrane+excitability+mutations+affecting+potassium+and+sodium+currents+in+the+flight+and+giant+fiber+escape+systems+of+Drosophila.">Interactions of membrane excitability mutations affecting potassium and sodium currents in the flight and giant fiber escape systems of Drosophila.</a> J Comp Physiol A. 171, 93-104 (1992).</li><li>Gorczyca, M., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+cholinergic+synapse+in+the+giant+fiber+pathway+of+Drosophila+using+conditional+mutations+of+acetylcholine+synthesis.">Identification of a cholinergic synapse in the giant fiber pathway of Drosophila using conditional mutations of acetylcholine synthesis.</a> J Neurogenet. 1, 289-313 (1984).</li><li>Hummon, M. R., Costello, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Giant+fiber+activation+of+flight+muscles+in+Drosophila:+asynchrony+in+latency+of+wing+depressor+fibers.">Giant fiber activation of flight muscles in Drosophila: asynchrony in latency of wing depressor fibers.</a> J Neurobiol. 20, 593-602 (1989).</li><li>Jacobs, K., Todman, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptogenesis+in+the+giant-fibre+system+of+Drosophila:+interaction+of+the+giant+fibre+and+its+major+motorneuronal+target.">Synaptogenesis in the giant-fibre system of Drosophila: interaction of the giant fibre and its major motorneuronal target.</a> Development. 127, 5203-5212 (2000).</li><li>King, D. G., Wyman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+giant+fibre+pathway+in+Drosophila.+I.+Three+thoracic+components+of+the+pathway.">Anatomy of the giant fibre pathway in Drosophila. I. Three thoracic components of the pathway.</a> J Neurocytol. 9, 753-770 (1980).</li><li>Martinez, V. G., Javadi, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+climbing+behavior+and+neural+circuit+physiology+in+Drosophila.">Age-related changes in climbing behavior and neural circuit physiology in Drosophila.</a> Dev Neurobiol. 67, 778-791 (2007).</li><li>Miller, A., Demerec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+internal+anatomy+and+histology+of+the+imago+of+Drosophila+melanogaster.">The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster.</a> Biology of Drosophila. , 502-503 (1965).</li><li>Phelan, P., Goulding, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanism+of+rectification+at+identified+electrical+synapses+in+the+Drosophila+giant+fiber+system.">Molecular mechanism of rectification at identified electrical synapses in the Drosophila giant fiber system.</a> Curr Biol. 18, 1955-1960 (2008).</li><li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect,+Drosophila+melanogaster.">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect, Drosophila melanogaster.</a> J Comp Neurol. 88, 347-409 (1948).</li><li>Tanouye, M. A., Wyman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+outputs+of+giant+nerve+fiber+in+Drosophila.">Motor outputs of giant nerve fiber in Drosophila.</a> J Neurophysiol. 44, 405-421 (1980).</li><li>Thomas, J. B., Wyman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+altering+synaptic+connectivity+between+identified+neurons+in+Drosophila.">Mutations altering synaptic connectivity between identified neurons in Drosophila.</a> J Neurosci. 4, 530-538 (1984).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

واحدة من أهم الأشياء التي يتعين على المرء أن الاهتمام عندما تحاول الحصول على التسجيلات ذات الجودة العالية هو التوجه السليم والصحي للإعداد. من الناحية المثالية ، ينبغي أن يكون لا يزال حيا يطير في نهاية الدورة تسجيل واستجابة لمحفزات كهربائية. للتسجيل في معظم أقطاب بكفاءة اختراق الهيكل الخارجي الصدري ، ينبغي لصقها على ذبابة على السطح في مثل هذه الطريقة لتشكيل زاوية قائمة مع الأقطاب ، وإذا لزم الأمر ، ويمكن تسهيل إدخال أقطاب كهربائية عن طريق إزالة جزء من إهاب الصدري الظهري مع التنغستن مشرط العضلات مما يعرض رحلة DLM (هذه الخطوة توفر ميزة إضافية لجعل من الصعب على نصائح من الأقطاب الكهربائية لكسر الزجاج). أيضا ، لا بد من اتخاذ الحيطة لتجنب دفع أقطاب من خلال DLMs يقع subcuticularly وTTMs. ينبغي أن يكون رئيس الطيران المضمون جيدا للسماح لتحفيز كهربائي لإدراجها بشكل صحيح في الدماغ ومنعها من أن انسحبت خلال جلسة تسجيل. نظرا لحجمها وشكلها موصوفة وصفا جيدا ، وGFS يمثل واحدا من المسارات العصبية التي يمكن الوصول إليها في ذبابة الفاكهة. نفاذية المشابك الكهربائية للمشاريع الصغيرة الأصباغ الجزيئية الوزن التتبع يسمح التصور من جانب الخلايا العصبية كهربائيا ، وعدة خطوط GAL4 المتاحة تجعل من الممكن التعامل مع مستويات التعبير الجيني في مجموعة فرعية من خلايا أو مجموعات خلايا (جاكوبس وآخرون ، 2000 ؛. ألين وآخرون ، 2006) وبالإضافة إلى المزايا المذكورة أعلاه ، وكلاهما وارد ومكونات الصدري من خصائص العرض الدوائر مثل الانتعاش ، والتعود عفوية وإزالة التعود ، مما يجعل من ذبابة الفاكهة GFS نظام نموذجي لدراسة ملاءمة اللدونة العصبية (إنجل وقال وو ، 1996).

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> NAME </td><td> شركة </td><td> اتفاقية مناهضة التعذيب. # </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> S48 ساحة نبض محفز </td><td> العشب آلات </td><td></td><td> http://www.grasstechnologies.com/ </td></tr><tr><td> وحدة التحفيز </td><td> العشب آلات </td><td></td><td> http://www.grasstechnologies.com/ </td></tr><tr><td> SIU5 عزل المحولات اللاسلكية وحدة </td><td> العشب آلات </td><td></td><td> http://www.grasstechnologies.com/ </td></tr><tr><td> 5A ثنائي القناة مكبر للصوت داخل الخلايا Microelectrode </td><td> الحصول على صكوك </td><td></td><td> http://www.gettinginstruments.com/ </td></tr><tr><td> Digidata نظام الحصول على البيانات 1440A </td><td> الأجهزة الجزيئية </td><td></td><td> http://www.moleculardevices.com/ </td></tr><tr><td> التناظرية الرقمية Digidata 1320 وAxoscope البرمجيات 9.0 </td><td> الأجهزة الجزيئية </td><td></td><td> http://www.moleculardevices.com/ </td></tr><tr><td> منصة تسجيل مع دليل micromanipulators </td><td> Narishige ، سوتر الوظائف. العالمي الوظائف دقيقة. </td><td></td><td> http://narishige-group.com/ http://www.sutter.com/index.html http://www.wpi-europe.com/en/ </td></tr><tr><td> مصدر الضوء </td><td> Fostec </td><td></td><td> http://www.nuhsbaum.com/FOSTEC.htm </td></tr><tr><td> M5 البرية stereomicroscope </td><td> Heerbrugg البرية </td><td></td><td> http://www.wild-heerbrugg.com/ </td></tr><tr><td> الاهتزاز العزلة الجدول </td><td> TMC </td><td></td><td> http://www.techmfg.com/ </td></tr><tr><td> البورسليكات أنابيب لmicroelectrodes </td><td> سوتر الصك </td><td></td><td> http://www.sutter.com/index.html </td></tr><tr><td> P - 95 Micropipette مجتذب </td><td> سوتر الصك </td><td></td><td> http://www.sutter.com/index.html </td></tr><tr><td> Microfil قياس 34 و 67 ملم (حشو مسرى) </td><td> العالم آلات دقيقة </td><td> MF34G - 5 </td><td> http://www.wpi-europe.com/en/ </td></tr><tr><td> أدوات Microdissection (ملقط ،...) </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td></td><td> www.finescience.com </td></tr><tr><td> تشريح (ستيريو) المجهر </td><td> لايكا </td><td></td><td> http://www.leica-microsystems.com/ </td></tr><tr><td> قفص فاراداي </td><td> مجهولة الصانع </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> الأخرى : المحاقن البلاستيكية وأسلاك التنجستين الأرض وهيدروكسيد الصوديوم ، شحذ أقطاب التنغستن ، بوكل ، ومنصة الشمع ، وجهاز كمبيوتر مع جهاز...

electrophysiological recordings from the giant fiber pathway of d. melanogaster

عندما فاجأ الكبار D. melanogaster تتفاعل من خلال القفز في الهواء وتطير بعيدا. في العديد من أنواع اللافقاريات ، بما في ذلك د. وتوسطت melanogaster ، و &quot;الهروب&quot; (أو &quot;فزع&quot;) استجابة أثناء مرحلة الكبار بحلول الدائرة المتعددة العناصر العصبية يسمى نظام الألياف العملاق (GFS). حجم نسبية كبيرة من الخلايا العصبية ، مورفولوجيا المتميزة والربط بسيطة تجعل GFS نظام نموذجا جذابا لدراسة الدوائر العصبية. ويتكون السبيل من اثنين من GFS interneurons العملاق متناظرة ثنائية (GF) والالياف التي تنحدر من محاور عصبية في الدماغ على طول خط الوسط في العقدة الصدرية الضام عبر عنق الرحم. في neuromere mesothoracic (T2) من العقد البطنية على شكل GFS الكهربائية والكيميائية مع المشابك 1) تغصن وسطي كبير من motorneuron المماثل (TTMn) الذي يحرك العضلات tergotrochanteral (الايراد) ، والباسطة الرئيسي للفخذ mesothoracic / الساق ، و 2) في المقابل عصبون التشابك محيطيا (PSI) والذي بدوره في أشكال كيميائية (الكوليني) المشابك مع motorneurons (DLMns) من العضلات الطولية الظهرية (DLMs) ، وأدوات خفض الجناح. مسار الخلايا العصبية (ق) إلى عضلات dorsovental (DVMs) ، والمصاعد الجناح ، لم يتم بعد التوصل إليه (من المعروف أن DLMs والعضلات كما DVMs معا رحلة غير مباشرة -- لا يعلق مباشرة إلى الأجنحة ، ولكن نقل بالأحرى الأجنحة بشكل غير مباشر عن طريق بشرة القريبة تشوه الصدري) (الملك وايمان ، 1980 ؛. آلن وآخرون ، 2006). تفعيل دي متشابك من DLMs (عبر PSI) يؤدي إلى تأخير صغيرة ولكنها مهمة في توقيت تقلص هذه العضلات النسبية لتفعيل الأحادي المشبك من الايراد (~ 0،5 مللي ثانية) السماح للتمديد TTMs أولا عظم الفخذ ودفع يطير بعيدا عن الارض. في وقت واحد تمتد TTMs تفعيل DLMs الذي بدوره متبادل تمتد تفعيل DVMs طوال مدة الرحلة. ويمكن تنشيط المسار GF إما بشكل غير مباشر عن طريق تطبيق (على سبيل المثال &quot;نفخة الهواء&quot; أو &quot;أضواء حالا&quot;) التحفيز الحسي ، أو مباشرة من قبل حافزا فوق عتبة الكهربائية للدماغ (الموصوفة هنا). في كلتا الحالتين ، على إمكانية اتخاذ إجراءات تصل إلى TTMs وDLMs فقط عبر GFS ، PSIS ، والعصبونات الحركية الايراد / DLM ، وعلى الرغم من أن TTMns DLMns ديك الأخرى ، ومجهولة الهوية حتى الآن ، والمدخلات الحسية. قياس &quot;ردا الكمون&quot; (الوقت بين التحفيز والاستقطاب العضلات) و &quot;التالية لتنشيط وتيرة عالية&quot; (عدد الاستجابات الناجحة لعدد معين من المنبهات عالية التردد) يوفر وسيلة لبتكاثر كمي وتقييم الوضع الوظيفي من المكونات GFS ، بما في ذلك نقاط الاشتباك العصبي المركزي (GF - TTMn ، GF - PSI ، PSI - DLMn) والكيماوية (glutamatergic) الاعصاب تقاطعات (TTMn - الايراد وDLMn DLM). وقد تم استخدامها لتحديد الجينات المسؤولة عن تشكيل المشبك المركزية لتقييم وظيفة الجهاز العصبي المركزي.

Watch this Scientific Journal Video about Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster at JoVE.com

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

نظام الألياف العملاق هو الدائرة العصبية بسيطة من البالغين<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em&gt; الخلايا العصبية التي تحتوي على أكبر في الطيران. نحن تصف البروتوكول لرصد انتقال متشابك من خلال هذا المسار من خلال تسجيل امكانات آخر متشابك في الطولية الظهرية (DLM) والعضلات tergotrochanteral (الايراد) بعد التحفيز المباشر للinterneurons الألياف العملاق.

تسجيلات الكهربية من الألياف المسار عملاق د. melanogaster</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

كله من جبل إعداد الكبار ذبابة الفاكهة الحبل الاعصاب الاماميه للحقن صبغ الألياف العملاق

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

تقرن Nanoinjection والفحص الكهربية للكشف عن النشاط الحيوي للمركبات باستخدام ذبابة الفاكهة السوداء البطن نظام الألياف العملاق

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

تسجيلات الكهربية المزدوجة للSynaptically-استجابات Astroglial والخلايا العصبية في الحصين شرائح الحاد

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

في وقت واحد قبل وبعد متشابك تسجيل الكهربية من<em&gt; القيطم</em&gt; العصبي العضلي المشارك الثقافات

Much information about the coupling of  presynaptic ionic currents with the release of neurotransmitter has been obtained  from invertebrate preparations, ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

تسجيل الكهربية في الدماغ سليمة من اسماك الزرد الكبار

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Design and Fabrication of Ultralight Weight, Adjustable Multi-electrode Probes for Electrophysiological Recordings in Mice

تصميم وتصنيع وخفيفة الوزن، قابل للتعديل تحقيقات متعددة القطب للتسجيلات الكهربية في الفئران

The number of physiological investigations in the mouse, mus musculus, has experienced a recent surge, paralleling the growth in methods of genetic ...

A Visual Guide to Sorting Electrophysiological Recordings Using 'SpikeSorter'

دليل مرئي لفرز تسجيلات الكهربية عن طريق &quot;SpikeSorter&quot;

Few stand-alone software applications are available for sorting spikes from recordings made with multi-electrode arrays. Ideally, an application should be ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings for Electrophysiological Determination of Ion Selectivity in Channelrhodopsins

كامل خلية التصحيح المشبك تسجيلات لتحديد الكهربية من أيون الانتقائية في تشانلرودوبسينز

Over the past decade, channelrhodopsins became indispensable in neuroscientific research where they are used as tools to non-invasively manipulate ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

الزرد<em&gt; في الموقع</em&gt; الحبل الشوكي التحضير للتسجيلات الكهربية من العمود الفقري الحسية والحركية العصبية

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...