Name: hyperinsulinemic-euglycemic clamp in the conscious rat
Uploaded: 2011-02-07T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat at JoVE.com

Cette étude a été financée par les Instituts canadiens de recherche en santé et Génome Canada.JS détient bourses d&#39;aide salariale de la recherche médicale de l&#39;Alberta Heritage Foundationfor, Fondation des maladies du cœur du Canadaand l&#39;Association canadienne du diabète. Un merci spécial à M. David Wasserman et Bracy Bingle pour enseigner cette procédure pour le laboratoire Shearer.

A: cathétérisme chirurgicale de circulation artérielle et veineuse Partie 1: Préparation du cathéter artériel et veineux <ol><li> Coupez 15 cm de PE-50 (diamètre intérieur de 0,58 mm (0,023 &quot;) x diamètre extérieur de 0,965 mm (0,038&quot;). Coupez une section de tube en silastic 1mm (0,76 mm (0,030 &quot;) de diamètre interne x 1.65mm (0,065 &quot;) de diamètre extérieur) pour l&#39;utiliser comme retenue de billes. Les billes de retenue empêche le rat de se retirer le cath...

<ol>
	<li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+basal+and+insulin-stimulated+skeletal+muscle+glucose+uptake+in+the+high-fat-fed+rat.">Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+muscle+glucose+uptake+due+to+high+fat+feeding.">Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding.</a> Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo:+advantages,+limitations,+and+appropriate+usage.">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).</li><li>Cho, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+and+a+diabetes+mellitus-like+syndrome+in+mice+lacking+the+protein+kinase+Akt2+(PKB+beta).">Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta).</a> Science. 292, 1728-1731 (2001).</li><li>Dubois, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SHP-1+protein+tyrosine+phosphatase+negatively+modulates+glucose+homeostasis.">The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis.</a> Nat Med. 12, 549-556 (2006).</li><li>Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+to+glucose+tolerance+of+insulin-independent+vs.+insulin-dependent+mechanisms+in+mice.">Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).</li><li>Herbach, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant-negative+effects+of+a+novel+mutated+Ins2+allele+causes+early-onset+diabetes+and+severe+beta-cell+loss+in+Munich+Ins2C95S+mutant+mice.">Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice.</a> Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).</li><li>Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+insulin+resistance+in+mice+lacking+adiponectin/ACRP30.">Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30.</a> Nat Med. 8, 731-737 (2002).</li><li>Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+spontaneously+hypertensive+rats+with+rosiglitazone+and/or+enalapril+restores+balance+between+vasodilator+and+vasoconstrictor+actions+of+insulin+with+simultaneous+improvement+in+hypertension+and+insulin+resistance.">Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance.</a> Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).</li><li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse.">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li><li>Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation.">Lost in translation.</a> Diabetes. 58, 1947-1950 (2009).</li></ol>

Initialement développé pour enquêter sur sensibilité à l&#39;insuline chez l&#39;homme, la procédure de fixation a été adapté à d&#39;autres espèces, y compris des rats de laboratoire et les souris. Étude des modèles animaux d&#39;insulino-résistance fournit une aide significative dans la compréhension de la physiopathologie de la sensibilité à l&#39;insuline et des pathologies associées ainsi que l&#39;identification des interventions thérapeutiques qui ont une valeur clinique 1,2. Plusieu...

<table border="1"><tbody><tr valign="top"><td> Nom du réactif </td><td> Société </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr valign="top"><td> Tuyaux en polyéthylène Intramedic (PE-50) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14 à 170-12B </td><td> Diamètre intérieur de 0,58 mm (0,023 &quot;) x diamètre extérieur de 0,965 mm (0,038&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Dow Corning Silastic tube de laboratoire </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11 à 189-15C </td><td> Diamètre intérieur de 0,76 mm (0,030 &quot;) de diamètre x 1.65mm extérieur de (0,065&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Tygon S-50-HL tubes médicaux </td><td> Harvard Apparatus </td><td> PY2 72-1251 </td><td> Diamètre intérieur de 3,2 mm (0,125 &quot;) de diamètre x 4,7 mm d&#39;Outer (0,1875&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Loctite Super Glue </td><td> Grand &amp; Toy </td><td> 32237 </td><td> Gel de contrôle </td></tr><tr valign="top"><td> Stérile lame chirurgicale </td><td> VWR </td><td> BD371610 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Courbé Micro pince à disséquer </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-20 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Droit Micro pince à disséquer </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-15 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Hémostatique courbée </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1135 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Hémostatique droite </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1130 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Gardes Astuce hémostatique </td><td> Robbins Instruments, Inc </td><td> 15.09-2-004 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Ciseaux de chirurgie droites </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-402 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> VENOJECT multi-échantillon Luer Adapter </td><td> Terumo Medical Products </td><td> 810127A </td><td> Calibre 21, 1 po </td></tr><tr valign="top"><td> Introducteur de cathéter stérile </td><td> Becton Dickinson </td><td> 406999 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 14 aiguille de calibre Blunt </td><td> Becton Dickinson </td><td> 511310 </td><td> Calibre 14, 2 po </td></tr><tr valign="top"><td> Stérile suture chirurgicale </td><td> Johnson &amp; Johnson Medical Products </td><td> 1679H </td><td> Soie, taille 3-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Non stériles suture chirurgicale </td><td> Angiotech Pharmaceuticals, Inc </td><td> SP116 </td><td> Soie, taille 4-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Cotons-tiges </td><td> VWR </td><td> 10806-005 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tampons de gaze 4ply </td><td> VWR </td><td> CA43845-062 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Clippers petits animaux sans fil </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 729063 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> L&#39;isoflurane </td><td> Halocarbon Products Corp </td><td> IPN-45 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Anesthésique panier </td><td> Benson Medical Industries, Inc </td><td></td><td></td></tr><tr valign="top"><td> L&#39;éthanol à 70% </td><td> Fisher Scientific </td><td> HC-1000 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Solution antiseptique Betadine </td><td> Ouest Drug Distribution Centre Ltd </td><td> 105267 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Modèle 11 Plus pompe seringue </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 702208 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Coupleurs tube acier inoxydable </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4434 </td><td> Calibre 23, 0,3 po </td></tr><tr valign="top"><td> Tubes en acier inoxydable Bouchons </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4436 </td><td> Calibre 23, 0,5 po </td></tr><tr valign="top"><td> Acier inoxydable Aiguilles Blunt </td><td> Instech Laboratories, Inc </td><td> LS22 </td><td> Calibre 22 </td></tr><tr valign="top"><td> 60 Degré Y Connecteurs </td><td> Petites pièces </td><td> STCY-22-05 </td><td> Calibre 22 </td></tr><tr valign="top"><td> CritSpin micro-hématocrite Centrifugeuse </td><td> Iris Sample Processing </td><td> CS12 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Centrifugeuse Mini </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-090-100 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tubes à centrifuger Micro </td><td> VWR </td><td> 53550-778 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tubes à centrifuger 50ml polypropylène </td><td> VWR</td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 1ml Seringues en plastique Astuce Slip </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 3ml plastique Seringues Astuce Luerlok </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309585 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Injection anticoagulant de l&#39;héparine </td><td> Ouest Drug Distribution Centre Ltd </td><td> 102824 </td><td> Fabricant: LEO Pharma Inc Conc. 1000 UI </td></tr><tr valign="top"><td> Solution d&#39;EDTA </td><td> Promega Corp </td><td> V4231 </td><td> 0,5 M, pH 8,0 </td></tr><tr valign="top"><td> Saline </td><td> Ouest Drug Distribution Centre Ltd </td><td> ABB7983154 </td><td> Fabricant: Chlorure de sodium à 0,9% de Hospira </td></tr><tr valign="top"><td> Dextrose à 50% </td><td> Vétoquinol </td><td> 8DEX012D </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Humulin-R </td><td> Eli Lilly </td><td> HI-210 </td><td> 100U/ml </td></tr><tr valign="top"><td> Seringues à insuline 1ml </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309311 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Hémato-Seal scellant </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-678 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * microhématocrite Tubes capillaires </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-362-574 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra bandelettes de test </td><td> LifeScan, Inc </td><td> AW 085-314H </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra compteur de la glycémie </td><td> LifeScan, Inc </td><td> AW 085-314B </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Sodium pentobarbital </td><td> Ceva Santé Animale </td><td> 1715 138 </td><td> Conc. 54.7mg/ml </td></tr><tr valign="top"><td> Red Tape Étiquetage de laboratoire </td><td> VWR </td><td> 89097-932 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Blue Tape Étiquetage de laboratoire </td><td> VWR </td><td> 89097-936 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Peser échelle </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01-913-88 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Vortex </td><td> VWR </td><td> 58815-234 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Minuterie </td><td> VWR </td><td> 62344-641 </td><td></td></tr></tbody></table>

hyperinsulinemic-euglycemic clamp in the conscious rat

Diabète de type 2 (DT2) est l&#39;augmentation rapide de la prévalence. Caractérisés par une production d&#39;insuline insuffisante ou l&#39;impossibilité d&#39;utiliser l&#39;insuline produite, les résultats DT2 chez des niveaux élevés de glucose dans le sang. Le «étalon-or» dans l&#39;évaluation de sensibilité à l&#39;insuline est une pince hyperinsulinémique euglycémique ou pince-insuline. Dans cette procédure, l&#39;insuline est perfusée à un taux constant résultant en une baisse de la glycémie. Afin de maintenir la glycémie à un niveau constant, le glucose exogène (D50) est injecté dans la circulation veineuse. La quantité de glucose perfusée pour maintenir une homéostasie est révélateur de sensibilité à l&#39;insuline. Ici, nous montrons la procédure de serrage de base dans la chronique cathétérisés, débridée, le rat conscient. Ce modèle permet au sang d&#39;être recueillies avec un minimum de stress pour l&#39;animal. Après l&#39;induction de l&#39;anesthésie, une incision médiane est faite et les artère carotide commune gauche et droite veine jugulaire sont cathétérisés. Cathéters insérés sont rincés avec du sérum physiologique hépariné, puis extériorisé et sécurisé. Les animaux sont autorisés à récupérer pendant 4-5 jours avant les expériences, avec un gain de poids contrôlée quotidiennement. Seuls les animaux qui regagner du poids à la pré-chirurgie niveaux sont utilisés pour des expériences. Le jour de l&#39;expérience, les rats sont mis à jeun et connectés à des pompes contenant de l&#39;insuline et D50. Glycémie de base est évaluée à partir de la ligne artérielle et a utilisé un indice de référence tout au long de l&#39;expérience (euglycémie). Suite à cela, l&#39;insuline est perfusée à un taux constant dans la circulation veineuse. Pour correspondre à la baisse de la glycémie, D50 est perfusé. Si le taux de perfusion D50 est supérieur au taux d&#39;absorption, une augmentation de la glycémie va se produire. De même, si le taux est insuffisant pour correspondre à l&#39;ensemble du corps l&#39;absorption du glucose, une baisse se produira. Titrage de glucose se poursuit jusqu&#39;au lectures de glucose stables sont atteints. Les niveaux de glucose et des taux de perfusion de glucose au cours de cette période de stabilité sont enregistrés et signalés. Les résultats fournissent un indice de sensibilité d&#39;insuline du corps tout entier. La technique peut être affiné pour répondre aux exigences spécifiques d&#39;expérimentation. Il est en outre renforcée par l&#39;utilisation de traceurs radioactifs qui peuvent déterminer stimulée par l&#39;insuline des tissus spécifiques captation du glucose ainsi que l&#39;ensemble du glucose du corps.

Watch this Scientific Journal Video about Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat at JoVE.com

Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

La pince hyperinsulinémique-euglycémique est le «gold standard» pour l&#39;évaluation de l&#39;action d&#39;insuline. L&#39;insuline est perfusée à un taux constant stimulant l&#39;absorption du glucose. La quantité de glucose exogène infusé pour contrer cette baisse est révélatrice de sensibilité à l&#39;insuline. Voici la procédure est effectuée sur une conscience, rat effrénée.

Hyperinsulinémique euglycémique-Clamp chez le rat conscient

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps in Conscious, Unrestrained Mice

Hyperinsulinémique euglycémique-pinces dans Conscient, Souris illimités

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold ...

Recherche

Médecine

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

L&#39;angiogenèse dans le poumon de rat ischémique

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

À libération lente Drug Delivery par Elvax 40W pour le Retina Rat: Implications pour le traitement des maladies chroniques

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

Cathétérisme de l&#39;artère carotide et Veine jugulaire faire pour effectuer des mesures hémodynamiques, Infusions et prélèvement sanguin dans un modèle de rat Conscients

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

Évaluation transcutanée de la fonction rénale dans Rongeurs Conscious

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Le diméthylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Modèle chez le rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Méthode de Direct segmentaire livraison intra-hépatique L&#39;utilisation d&#39;un modèle hilaire de foie de rat Clamp

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-artérialisé Transplantation de foie partielle de Rat in vivo axée sur le navire 70 % hépatectomie

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Assessment of Respiratory Function in Conscious Mice by Double-chamber Plethysmography

Évaluation de la fonction respiratoire chez des souris conscientes par pléthysmographie Double-chambre

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Prélèvement sanguin répétitif dans la veine sous-clavière d’un rat conscient

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...