Name: hyperinsulinemic-euglycemic clamp in the conscious rat
Uploaded: 2011-02-07T17:00:00
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Diese Studie wurde von der Canadian Institutes of Health Research and Genome Canada.JS unterstützt hat Gehaltszuschüssen Auszeichnungen von der Alberta Heritage Foundationfor Medical Research, Heart and Stroke Foundation von Canadaand der kanadischen Diabetes Association. Besonderer Dank geht an Dr. David Wasserman und Bingle Bracy für die Lehre dieses Verfahren, um die Shearer Labor.

A: Chirurgische Katheterisierung von arteriellen und venösen Blutkreislauf Teil 1: arterielle und venöse Katheter Vorbereitung <ol><li> Cut 15 cm von PE-50 (Innendurchmesser 58 mm (0,023 &quot;) x einen Außendurchmesser von 0,965 mm (0,038&quot;). Schneiden Sie einen 1mm Abschnitt Silastic Schlauch (0,76 mm (0,030 &quot;) Innendurchmesser x 1,65 mm (0,065 &quot;) Außendurchmesser) für den Einsatz als einstweilige Wulst. Die einstweilige Wulst verhindert, dass die Ratte aus Herausziehen d...

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	<li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+basal+and+insulin-stimulated+skeletal+muscle+glucose+uptake+in+the+high-fat-fed+rat.">Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+muscle+glucose+uptake+due+to+high+fat+feeding.">Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding.</a> Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo:+advantages,+limitations,+and+appropriate+usage.">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).</li><li>Cho, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+and+a+diabetes+mellitus-like+syndrome+in+mice+lacking+the+protein+kinase+Akt2+(PKB+beta).">Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta).</a> Science. 292, 1728-1731 (2001).</li><li>Dubois, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SHP-1+protein+tyrosine+phosphatase+negatively+modulates+glucose+homeostasis.">The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis.</a> Nat Med. 12, 549-556 (2006).</li><li>Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+to+glucose+tolerance+of+insulin-independent+vs.+insulin-dependent+mechanisms+in+mice.">Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).</li><li>Herbach, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant-negative+effects+of+a+novel+mutated+Ins2+allele+causes+early-onset+diabetes+and+severe+beta-cell+loss+in+Munich+Ins2C95S+mutant+mice.">Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice.</a> Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).</li><li>Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+insulin+resistance+in+mice+lacking+adiponectin/ACRP30.">Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30.</a> Nat Med. 8, 731-737 (2002).</li><li>Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+spontaneously+hypertensive+rats+with+rosiglitazone+and/or+enalapril+restores+balance+between+vasodilator+and+vasoconstrictor+actions+of+insulin+with+simultaneous+improvement+in+hypertension+and+insulin+resistance.">Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance.</a> Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).</li><li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse.">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li><li>Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation.">Lost in translation.</a> Diabetes. 58, 1947-1950 (2009).</li></ol>

Zunächst für die Untersuchung der Insulinsensitivität beim Menschen entwickelt wurde, hat die Klemme Verfahren nun auf andere Tierarten einschließlich Labor Ratten und Mäusen angepasst. Die Untersuchung von Tiermodellen der Insulinresistenz eine bedeutende Hilfe für das Verständnis der Pathophysiologie der Insulinsensitivität und damit verbundene Krankheiten sowie die Identifizierung therapeutischer Interventionen, die klinischen Wert 1,2 haben. Mehrere Methoden zur Insulinsensitivität bei Tieren zu ...

<table border="1"><tbody><tr valign="top"><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr valign="top"><td> Intramedic Polyethylene Tubing (PE-50) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14 bis 170-12B </td><td> Innendurchmesser von 58 mm (0,023 &quot;) x Außendurchmesser von 0,965 mm (0,038&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Dow Corning Silastic Laboratory Tubing </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11 bis 189-15C </td><td> Innendurchmesser von 0,76 mm (0,030 &quot;) x Außendurchmesser von 1,65 mm (0,065&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Tygon S-50-HL Medizinische Schläuche </td><td> Harvard Apparatus </td><td> PY2 72-1251 </td><td> Innendurchmesser von 3,2 mm (0,125 &quot;) x Außendurchmesser von 4,7 mm (0,1875&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Loctite Super Glue </td><td> Grand &amp; Toy </td><td> 32237 </td><td> Gel Kontrolle </td></tr><tr valign="top"><td> Sterile OP-Klinge </td><td> VWR </td><td> BD371610 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Curved Micro Präparierklemmen </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-20 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Gerade Micro Präparierklemmen </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-15 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Curved Hemostat </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1135 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Gerade Hemostat </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1130 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Hemostat Tipp Guards </td><td> Robbins Instruments, Inc. </td><td> 15.09-2-004 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Gerade Chirurgie Scissors </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-402 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> VENOJECT Multi-Sample Luer Adapter </td><td> Terumo Medical Products </td><td> 810127A </td><td> 21 Gauge, 1 Zoll </td></tr><tr valign="top"><td> Sterile Katheter Introducer </td><td> Becton Dickinson </td><td> 406999 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 14-Gauge-Nadel-Blunt </td><td> Becton Dickinson </td><td> 511310 </td><td> 14 gauge, 2 in. </td></tr><tr valign="top"><td> Steriles chirurgisches Nahtmaterial </td><td> Johnson &amp; Johnson Medical Products </td><td> 1679H </td><td> Silk, Größe 3-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Non-steriles chirurgisches Nahtmaterial </td><td> Angiotech Pharmaceuticals, Inc. </td><td> SP116 </td><td> Silk, Größe 4-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Wattestäbchen </td><td> VWR </td><td> 10806-005 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 4ply Gazekompressen </td><td> VWR </td><td> CA43845-062 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Small Animal Cordless Clippers </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 729063 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Isofluran </td><td> Halocarbon Products Corp </td><td> IPN-45 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Betäubungsmittel Warenkorb </td><td> Benson Medical Industries, Inc. </td><td></td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 70% Ethanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> HC-1000 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Betadine antiseptischen Lösung </td><td> West-Drug Distribution Centre Ltd </td><td> 105267 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Modell 11 Plus Spritzenpumpe </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 702208 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Edelstahlrohre Kupplungen </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4434 </td><td> 23 Gauge, 0,3 in. </td></tr><tr valign="top"><td> Edelstahlrohre Plugs </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4436 </td><td> 23 Gauge, 0,5 Zoll </td></tr><tr valign="top"><td> Stainless Steel Blunt Needles </td><td> Instech Laboratories, Inc. </td><td> LS22 </td><td> 22 Gauge </td></tr><tr valign="top"><td> 60 Grad Y-Connectors </td><td> Kleinteile </td><td> STCY-22 bis 05 </td><td> 22 Gauge </td></tr><tr valign="top"><td> CritSpin Micro-Hämatokrit-Zentrifuge </td><td> Iris Sample Processing </td><td> CS12 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Mini-Zentrifuge </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-090-100 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Micro Zentrifugenröhrchen </td><td> VWR </td><td> 53550-778 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 50ml Polypropylenzentrifugenröhrchen </td><td> VWR</td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 1ml Plastic Rutsch Tip Spritzen </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 3ml Plastic Luerlok Tip Spritzen </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309585 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Heparin als Antikoagulans Injection </td><td> West-Drug Distribution Centre Ltd </td><td> 102824 </td><td> Hersteller: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 IE </td></tr><tr valign="top"><td> EDTA-Lösung </td><td> Promega Corp </td><td> V4231 </td><td> 0,5 M, pH 8,0 </td></tr><tr valign="top"><td> Saline </td><td> West-Drug Distribution Centre Ltd </td><td> ABB7983154 </td><td> Hersteller: Hospira 0,9% Natriumchlorid </td></tr><tr valign="top"><td> 50% Dextrose </td><td> Vetoquinol </td><td> 8DEX012D </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Humulin-R </td><td> Eli Lilly </td><td> HALLO-210 </td><td> 100U/ml </td></tr><tr valign="top"><td> 1ml Insulinspritzen </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309311 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Hämato-Seal-Versiegelung </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-678 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Mikrohämatokrit Kapillarröhrchen </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-362-574 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra Teststreifen </td><td> LifeScan, Inc. </td><td> AW 085-314H </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra Blutzuckermessgerät </td><td> LifeScan, Inc. </td><td> AW 085-314B </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Sodium Pentobarbitol </td><td> Ceva Sante Animale </td><td> 1715 138 </td><td> Conc. 54.7mg/ml </td></tr><tr valign="top"><td> Red Laboratory Labeling Band </td><td> VWR </td><td> 89097-932 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Blau Laboratory Labeling Band </td><td> VWR </td><td> 89097-936 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Waagen </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01-913-88 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Wirbel </td><td> VWR </td><td> 58815-234 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Timer </td><td> VWR </td><td> 62344-641 </td><td></td></tr></tbody></table>

hyperinsulinemic-euglycemic clamp in the conscious rat

Typ-2-Diabetes (T2D) steigt rasant in der Prävalenz. Gekennzeichnet durch entweder unzureichend Insulin-Produktion oder die Unfähigkeit, Insulin produziert, T2D zu erhöhten Blutzuckerwerten zu nutzen. Die &quot;Gold-Standard&quot; bei der Beurteilung der Insulin-Sensitivität ist ein hyperinsulinämische-euglykämische Clamp-oder Insulin zu klemmen. In diesem Verfahren wird Insulin mit einer konstanten Rate was zu einem Abfall des Blutzuckerspiegels infundiert. Zur Aufrechterhaltung des Blutzuckers auf einem konstanten Niveau, ist exogen Glucose (D50) in den venösen Blutkreislauf infundiert. Die Menge an Glukose infundiert, um die Homöostase aufrechtzuerhalten ist bezeichnend für die Insulinsensitivität. Hier zeigen wir die grundlegenden Clamp Verfahren in der chronisch katheterisiert, hemmungslos, bewusste Ratte. Dieses Modell ermöglicht es Blut mit minimalem Stress für das Tier abgeholt werden. Nach der Einleitung der Narkose, ist ein Mittellinienschnitt gemacht und die linke A. carotis communis und rechte Jugularvene sind katheterisiert. Eingefügte Katheter sind mit heparinisierten Kochsalzlösung gespült, dann exteriorisierten und gesichert. Tiere sind erlaubt, für 4-5 Tage vor der Experimente zu erholen, mit einer Gewichtszunahme täglich überwacht. Nur jene Tiere, die ihr Gewicht wieder vor der Operation Ebenen sind für Experimente verwendet. Am Tag des Experiments werden Ratten gefastet und an Pumpen mit Insulin und D50. Baseline Glukose aus dem arteriellen Linie beurteilt und eine Benchmark während des ganzen Experiments (Normoglykämie). Im Anschluss daran wird Insulin mit einer konstanten Rate in den venösen Blutkreislauf infundiert. Zur Anpassung an den Rückgang der Blutzuckerspiegel ist D50 infundiert. Wenn die Rate der D50 Infusion ist größer als die Geschwindigkeit der Aufnahme wird ein Anstieg der Glukose auftreten. Auch wenn die Rate nicht ausreichen, um ganze Körper Glukoseaufnahme Spiel ist, wird ein Tropfen auftreten. Titration von Glukose wird fortgesetzt, bis stabile Blutzuckerwerte erreicht werden. Blutzuckerspiegel und Glukose-Infusion Preise in diesem Zeitraum stabil erfasst und gemeldet. Ergebnisse liefern einen Index der ganze Körper Insulin-Empfindlichkeit. Die Technik kann verfeinert werden, um spezifische experimentelle Anforderungen gerecht zu werden. Es wird ferner durch die Verwendung radioaktiver Tracer, dass gewebespezifische Insulin-stimulierte Glukoseaufnahme sowie ganzen Körper Glukose Umsatz bestimmen kann, verbessert.

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Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

Die hyperinsulinämische-euglykämische Clamp ist der &quot;Goldstandard&quot; für die Beurteilung der Wirkung von Insulin. Insulin ist mit einer konstanten Rate anregende Glukoseaufnahme infundiert. Die Höhe der exogenen Glucose infundiert, um diese Tropfenzähler ist ein Hinweis auf die Insulinsensitivität. Hier ist das Verfahren auf einer bewussten, hemmungslos Ratte durchgeführt.

Hyperinsulinämische-euglykämische Clamp in der Conscious Rat

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps in Conscious, Unrestrained Mice

Hyperinsulinämische-euglykämische Schellen in dem Bewusstsein, Unrestrained Mäuse

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold ...

Forschung

Medizin

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

Angiogenese im ischämischen Rat Lung

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

Slow-Release-Drug Delivery durch Elvax 40W, um die Ratte Retina: Implikationen für die Behandlung von chronischen Erkrankungen

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

Katheterisierung der Halsschlagader und Vena jugularis zur hämodynamischen Maßnahmen im Conscious Rattenmodell durchführen, Infusionen und Blutentnahme

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

Transkutane Beurteilung der Nierenfunktion in Conscious Nagetiere

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Die Dimethylnitrosamin Induced Liver Fibrosis Modell in der Ratte

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Methode der direkten segmentale Intra-Leber-Lieferung Mit einer Rattenleber Hilar Clamp Modell

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re Arterialized Ratte teilweise Leber Transplantation mit einem in Vivo Schiff-orientierte 70 % Hepatektomie

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Assessment of Respiratory Function in Conscious Mice by Double-chamber Plethysmography

Beurteilung der Atemfunktion in bewusste Mäuse durch Doppel-Kammer-Plethysmographie

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Wiederholte Blutentnahme aus der Vena subclavia einer bewussten Ratte

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...