Name: hyperinsulinemic-euglycemic clamp in the conscious rat
Uploaded: 2011-02-07T17:00:00
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Questo studio è stato sostenuto dal Canadian Institutes of Health Research e Genome Canada.JS detiene premi stipendio il sostegno della ricerca sul patrimonio Alberta Foundationfor medica, Heart and Stroke Foundation del Canadaand Diabetes Association canadese. Un ringraziamento speciale a David Wasserman e Bracy Bingle per insegnare questa procedura per il laboratorio di Shearer.

R: cateterizzazione chirurgica di circolazione venosa e arteriosa Parte 1: catetere arterioso e venoso Preparazione <ol><li> Tagliare 15 cm di PE-50 (diametro interno di 0,58 millimetri (0,023 &quot;) x un diametro esterno di 0,965 millimetri (0,038&quot;). Tagliare una sezione di tubo silastic 1 millimetro (0,76 mm (0.030 &quot;) di diametro interno x 1,65 millimetri (0,065 &quot;) di diametro esterno) per l&#39;utilizzo come contenimento tallone. Il contenimento tallone impedisce al ratto d...

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	<li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+basal+and+insulin-stimulated+skeletal+muscle+glucose+uptake+in+the+high-fat-fed+rat.">Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+to+muscle+glucose+uptake+due+to+high+fat+feeding.">Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding.</a> Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).</li><li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo:+advantages,+limitations,+and+appropriate+usage.">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).</li><li>Cho, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+and+a+diabetes+mellitus-like+syndrome+in+mice+lacking+the+protein+kinase+Akt2+(PKB+beta).">Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta).</a> Science. 292, 1728-1731 (2001).</li><li>Dubois, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SHP-1+protein+tyrosine+phosphatase+negatively+modulates+glucose+homeostasis.">The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis.</a> Nat Med. 12, 549-556 (2006).</li><li>Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+to+glucose+tolerance+of+insulin-independent+vs.+insulin-dependent+mechanisms+in+mice.">Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).</li><li>Herbach, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant-negative+effects+of+a+novel+mutated+Ins2+allele+causes+early-onset+diabetes+and+severe+beta-cell+loss+in+Munich+Ins2C95S+mutant+mice.">Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice.</a> Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).</li><li>Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+insulin+resistance+in+mice+lacking+adiponectin/ACRP30.">Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30.</a> Nat Med. 8, 731-737 (2002).</li><li>Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+spontaneously+hypertensive+rats+with+rosiglitazone+and/or+enalapril+restores+balance+between+vasodilator+and+vasoconstrictor+actions+of+insulin+with+simultaneous+improvement+in+hypertension+and+insulin+resistance.">Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance.</a> Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).</li><li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse.">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li><li>Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation.">Lost in translation.</a> Diabetes. 58, 1947-1950 (2009).</li></ol>

Inizialmente sviluppato per l&#39;indagine della sensibilità all&#39;insulina negli esseri umani, la procedura di clamp è stato adattato ad altre specie tra cui ratti e topi di laboratorio. Modelli animali di accertamento della resistenza all&#39;insulina fornisce un aiuto importante nella comprensione della fisiopatologia della sensibilità all&#39;insulina e le patologie associate, nonché l&#39;individuazione di interventi terapeutici che possiedono 1,2 clinico valore. Diversi metodi per valutare la sens...

<table border="1"><tbody><tr valign="top"><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr valign="top"><td> Tubi in polietilene Intramedic (PE-50) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-170-12B </td><td> Diametro interno di 0,58 millimetri (0,023 &quot;) x diametro esterno di 0,965 millimetri (0,038&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Dow Corning Silastic Laboratorio Tubi </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11-189-15C </td><td> Diametro interno di 0,76 millimetri (0.030 &quot;) x diametro esterno di 1,65 millimetri (0.065&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Tygon S-50-HL Medical Tubing </td><td> Harvard Apparatus </td><td> PY2 72-1251 </td><td> Diametro interno di 3,2 mm (0.125 &quot;) x diametro esterno di 4,7 millimetri (0,1875&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Loctite Super Glue </td><td> Grand &amp; Toy </td><td> 32237 </td><td> Gel di controllo </td></tr><tr valign="top"><td> Sterile lama chirurgica </td><td> VWR </td><td> BD371610 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Curve Pinza Micro Dissezione </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-20 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Dissettore dritto Micro </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-15 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Emostatica curve </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1135 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Emostatica retta </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1130 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Emostatica Suggerimento Guardie </td><td> Robbins Instruments, Inc. </td><td> 15.09-2-004 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Forbici Chirurgia dritto </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-402 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> VENOJECT Multi-Sample adattatore Luer </td><td> Terumo Medical Products </td><td> 810127A </td><td> 21 gauge, 1 pollici </td></tr><tr valign="top"><td> Catetere introduttore sterile </td><td> Becton Dickinson </td><td> 406999 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 14-gauge Blunt </td><td> Becton Dickinson </td><td> 511310 </td><td> Calibro 14, 2 in </td></tr><tr valign="top"><td> Sterile sutura chirurgica </td><td> Johnson &amp; Johnson Medical Products </td><td> 1679H </td><td> Seta, dimensioni 3-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Non sterili sutura chirurgica </td><td> Angiotech Pharmaceuticals, Inc. </td><td> SP116 </td><td> Seta, dimensioni 4-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Tamponi di cotone </td><td> VWR </td><td> 10806-005 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Garze 4ply </td><td> VWR </td><td> CA43845-062 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Clippers animali piccola batteria </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 729063 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Isoflurano </td><td> Halocarbon Products Corp. </td><td> IPN-45 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Anestetico carrello </td><td> Benson Medical Industries, Inc. </td><td></td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 70% di etanolo </td><td> Fisher Scientific </td><td> HC-1000 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Betadine soluzione antisettica </td><td> Occidentale Drug Distribution Centre Ltd. </td><td> 105267 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Modello 11 Plus pompa a siringa </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 702208 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tubi in acciaio inossidabile Accoppiatori </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4434 </td><td> 23 gauge, 0,3 pollici </td></tr><tr valign="top"><td> Tubi acciaio inossidabile Spine </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4436 </td><td> 23 gauge, 0,5 pollici </td></tr><tr valign="top"><td> Acciaio Blunt Needles </td><td> Instech Laboratories, Inc. </td><td> LS22 </td><td> 22 gauge </td></tr><tr valign="top"><td> 60 gradi Y-Connettori </td><td> Parti piccole </td><td> STCY-22-05 </td><td> 22 gauge </td></tr><tr valign="top"><td> CritSpin Micro-ematocrito Centrifuga </td><td> Iris Sample Processing </td><td> CS12 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Centrifuga Mini </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-090-100 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tubi Centrifuga Micro </td><td> VWR </td><td> 53550-778 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Centrifuga in polipropilene da 50 ml tubi </td><td> VWR</td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 1 ml di plastica di slittamento Suggerimento Siringhe </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 3ml di plastica Luerlok Suggerimento Siringhe </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309585 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Anticoagulante iniezione di eparina </td><td> Occidentale Drug Distribution Centre Ltd. </td><td> 102824 </td><td> Produttore: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 UI </td></tr><tr valign="top"><td> Soluzione EDTA </td><td> Promega Corp. </td><td> V4231 </td><td> 0,5 M, pH 8,0 </td></tr><tr valign="top"><td> Salino </td><td> Occidentale Drug Distribution Centre Ltd. </td><td> ABB7983154 </td><td> Produttore: cloruro di sodio Hospira 0,9% </td></tr><tr valign="top"><td> 50% di destrosio </td><td> Vétoquinol </td><td> 8DEX012D </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Humulin-R </td><td> Eli Lilly </td><td> HI-210 </td><td> 100U/ml </td></tr><tr valign="top"><td> Siringhe da insulina da 1 ml </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309311 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * emato-Seal Sigillante </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-678 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * microematocrito tubi capillari </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-362-574 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Strisce reattive One Touch Ultra </td><td> LifeScan, Inc. </td><td> AW 085-314H </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra Sangue glucometro </td><td> LifeScan, Inc. </td><td> AW 085-314 ter </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Sodio Pentobarbitol </td><td> Ceva Sante Animale </td><td> 1715 138 </td><td> Conc. 54.7mg/ml </td></tr><tr valign="top"><td> Laboratorio Etichettatura nastro rosso </td><td> VWR </td><td> 89097-932 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Laboratorio nastro blu Etichettatura </td><td> VWR </td><td> 89097-936 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Pesare Scala </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01-913-88 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Vortice </td><td> VWR </td><td> 58815-234 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Timer </td><td> VWR </td><td> 62344-641 </td><td></td></tr></tbody></table>

hyperinsulinemic-euglycemic clamp in the conscious rat

Diabete di tipo 2 (T2D) è in rapido aumento della prevalenza. Caratterizzata da produzione di insulina sia inadeguata o l&#39;impossibilità di utilizzare l&#39;insulina prodotta, i risultati T2D a elevati livelli di glucosio nel sangue. Il &quot;gold-standard&quot; nel valutare la sensibilità all&#39;insulina è un iperinsulinemico-euglicemico morsetto o clamp insulina. In questa procedura, l&#39;insulina è infusa a velocità costante con una conseguente diminuzione del glucosio nel sangue. Per mantenere la glicemia ad un livello costante, glucosio esogeno (D50) viene infusa nella circolazione venosa. La quantità di glucosio infusa per mantenere l&#39;omeostasi è indice di sensibilità all&#39;insulina. Qui vi mostriamo la procedura di base morsetto in cronicamente cateterizzati, sfrenato, ratto cosciente. Questo modello consente al sangue di essere raccolte con lo sforzo minimo per l&#39;animale. Dopo l&#39;induzione dell&#39;anestesia, un&#39;incisione mediana è fatto e l&#39;arteria carotide comune sinistra e destra della vena giugulare sono cateterizzati. Cateteri inseriti sono lavata con soluzione salina eparinizzato, poi esteriorizzato e protetto. Gli animali sono ammessi a recuperare per 4-5 giorni prima di esperimenti, con aumento di peso monitorati giornalmente. Soltanto gli animali che per ritrovare il peso pre-intervento i livelli vengono utilizzati per gli esperimenti. Il giorno dell&#39;esperimento, i ratti sono digiunato e collegati a pompe contenente insulina e D50. Glucosio al basale è valutata dalla linea arteriosa ed utilizzato un punto di riferimento per tutto l&#39;esperimento (euglicemia). In seguito a questo, l&#39;insulina è infusa a velocità costante nella circolazione venosa. Per abbinare il calo di glucosio nel sangue, D50 è infusa. Se il tasso di infusione D50 è superiore al tasso di assorbimento, un aumento del glucosio si verificherà. Allo stesso modo, se il tasso è insufficiente per soddisfare tutta l&#39;assorbimento di glucosio del corpo, una goccia si verificherà. Titolazione di glucosio continua fino a letture del glucosio stabili sono realizzati. I livelli di glucosio e la velocità di infusione del glucosio durante questo periodo stabili sono registrati e riportati. Risultati forniscono un indice di sensibilità all&#39;insulina tutto il corpo. La tecnica può essere raffinato per soddisfare specifiche esigenze sperimentali. E &#39;ulteriormente migliorata con l&#39;uso di traccianti radioattivi che possono determinare il tessuto specifico di insulina glucosio-stimolata così come tutta fatturato glucosio corpo.

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Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

Il iperinsulinemico-euglicemico pinza è il &quot;gold standard&quot; per la valutazione dell&#39;azione dell&#39;insulina. L&#39;insulina è infusa a velocità costante stimolo del glucosio. La quantità di glucosio esogeno infusa per contrastare questo calo è indice di sensibilità all&#39;insulina. Ecco la procedura viene eseguita su un consapevole, ratto sfrenato.

Iperinsulinemico-euglicemico pinza nei topi

Type 2 diabetes (T2D) is rapidly rising in prevalence. Characterized by either inadequate insulin production or the inability to utilize insulin produced, ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps in Conscious, Unrestrained Mice

Iperinsulinemico-euglicemico Morsetti in Cosciente, Mouse sfrenato

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold ...

Ricerca

Medicina

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

L&#39;angiogenesi nel polmone del ratto ischemica

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

Lento rilascio Drug Delivery attraverso Elvax 40W al Rat Retina: Implicazioni per il trattamento di condizioni croniche

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

Cateterismo dell&#39;arteria carotide e giugulare Vena di eseguire misure emodinamiche, Infusi e campionamento del sangue in un modello di ratto cosciente

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

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La valutazione transcutanea della funzione renale nei roditori Conscious

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The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Il dimetilnitrosamina indotta fibrosi epatica modello nel ratto

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Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

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