Name: postsynaptic recordings at afferent dendrites contacting cochlear inner hair cells: monitoring multivesicular release at a ribbon synapse
Uploaded: 2011-02-10T16:00:00
Duration: 11 min 45 s
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Este trabajo fue apoyado por una Fundación de Investigación de la Sordera de Becas de Investigación de EY y NIDCD DC006476 a EG y NIDCD DC005211 el Centro para la audición y el equilibrio, la Universidad Johns Hopkins. Obra de autor Tim Phelps, la Universidad Johns Hopkins. LG escribió el manuscrito inicial, EY y LG filmó la disección y la grabación. Todos los autores siempre figuras ejemplares y ha contribuido a la redacción del manuscrito.

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El paso crítico en este procedimiento es la disección. Si el tejido se estira o se dañó durante la disección, las fibras aferentes no va a sobrevivir. Tejido de las ratas más jóvenes es más elástica y de perdón. Nos encontramos con que los días postnatales 10 a 11 son los más fáciles de diseccionar y experimentos tienen mayores tasas de éxito. Un importante grado de maduración se produce después del nacimiento coclear, con las ratas empiezan a oír de todo el día postnatal 12 14. Por lo tanto, a la edad en que la disección es más fácil, las sinapsis no pueden ser completamente maduros 4. La disección se describe aquí para las ratas es esencialmente el mismo para los ratones, la principal diferencia es el tamaño más pequeño de la cóclea del ratón. Esta técnica permite que las propiedades de las sinapsis cinta para ser examinado en ratones modificados transgénicamente 15. Otras modificaciones de esta técnica incluyen: la adición de un colorante fluorescente a la solución intracelular a las fibras de la etiqueta 3, las grabaciones se combina con las células ciliadas internas presináptica y postsináptica bouton aferentes, lo que permite la función de transferencia sináptica entre las células antes y después de que se determine 2 y suelta sello de grabaciones extracelular en boutons aferentes para evitar la pérdida de la integridad celular. La configuración de registro extracelular es más fácil de conseguir que toda la configuración de las células y los experimentos son generalmente de mayor duración.

Arriba está el equipo en nuestras configuraciones electrofisiológicos utilizado para la grabación de las terminales aferentes.

postsynaptic recordings at afferent dendrites contacting cochlear inner hair cells: monitoring multivesicular release at a ribbon synapse

La sinapsis aferente entre las células ciliadas internas (IHC) y la fibra del nervio auditivo proporciona un sitio electrofisiológicamente accesible para registrar la actividad postsináptica de una sola cinta sinapsis 1-4. Las sinapsis de las células sensoriales de la cinta la liberación de neurotransmisores, significa que la tasa de los cuales se modula en respuesta a cambios graduales en IHC potencial de membrana 5. Sinapsis de la cinta se ha demostrado que funcionan por la liberación multivesiculares, donde múltiples vesículas pueden ser liberados al mismo tiempo para evocar excitatorios postsinápticos corrientes (EPSCs) de diferentes amplitudes 1, 4, 6-11. Ni el papel de la cinta presináptica, ni el mecanismo subyacente a la liberación multivesiculares está bien entendido. La IHC es inervado por 10-20 fibras del nervio auditivo, y todos los contactos de la fibra de la IHC con un solo amielínicas final para formar una sinapsis sola cinta. El pequeño tamaño de los centros de salud integrados boutons aferentes contacto (aproximadamente 1 m de diámetro) permite grabaciones con resolución temporal excepcional a realizar. Además, la técnica puede ser adaptada para registrar tanto las células pre-y post-sináptica de forma simultánea, lo que permite la función de transferencia en la sinapsis a ser estudiados directamente 2. Por lo tanto, este método proporciona un medio por el cual los aspectos fundamentales de la neurotransmisión puede ser estudiada, de la liberación multivesiculares a la función difícil de alcanzar de la cinta en las células sensoriales.

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Postsynaptic Recordings at Afferent Dendrites Contacting Cochlear Inner Hair Cells: Monitoring Multivesicular Release at a Ribbon Synapse

Plenario de células patch-clamp grabaciones de las dendritas de fibras nerviosas auditivas en la sinapsis cinta del pelo interior de células de la cóclea de los mamíferos.

Grabaciones postsinápticos en las dendritas aferentes cocleares ponerse en contacto con las células ciliadas internas: Comunicado de Vigilancia multivesiculares en una sinapsis cinta

The afferent synapse between the inner hair cell (IHC) and the auditory nerve fiber provides an electrophysiologically accessible site for recording the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Patch Clamp Recordings in Inner Ear Hair Cells Isolated from Zebrafish

Grabaciones de patch clamp en Inner células del oído pelo Aislado de pez cebra

Patch  clamp analyses of the voltage-gated channels in sensory hair cells isolated  from a variety of species have been described previously1-4 but this  ...

Investigación

Neurociencias

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FM dyes are used to study the synaptic vesicle (SV) cycle. These amphipathic probes have a hydrophilic head and hydrophobic tail, making them ...

Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm

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The electrical activity of cells in tissues can be monitored by electrophysiological techniques, but these are usually limited to the analysis of ...

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