Name: dissection of human vitreous body elements for proteomic analysis
Uploaded: 2011-01-23T17:45:00
Duration: 5 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis at JoVE.com

המימון ניתן על ידי להילחם עבור Sight. רקמות התקבלו מבנק העין איווה האריות.

1. מגזר Anterior Dissection. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקרנית היא להסיר תחילה ביצוע חתך בבית לימבוס לתא הקדמי באמצעות להב 15 ° (איור 1). ואז אחד הלהב של הקרנית-scleral מספריים מעוקל מוכנס לתוך החדר הקדמי. חתכים היקפיים מתקבלות הקרנית, הקדמי רק גובלת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.12 קוליברי מלקחיים ומספריים ווסטקוט משמשים לחתוך את איריס הקדמי circumferentially לגוף ריסי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גרעין העדשה מוסר עם מלקחיים קוליברי 0.12 או 15 ° להב (supersharp) לבין קליפת המוח ואת הקפסולה עם מלקחיים. </li></ol> 2. Core הזגוגיות שאיפה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחט מד 23 על מזרק 5 סמ&quot;ק מוכנס לתוך אמצע זגוגי (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כ 1 מ&quot;ל או יותר של הליבה הזגוגית היא aspirated בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגם ממוקם אז צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. </li></ol> 3. Dissection Anterior Hyaloid. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hyaloid הקדמי נחשב טבעת שקופה למחצה על ידי התאמת האור מן האירוע אור צוואר אווז מיקרוסקופ. השאיפה הקודם של הליבה זגוגי המפריד בין hyaloid הקדמי של מבנים אחרים לצורך זיהוי קל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גיליון של רקמה אלסטית הוא שלף בזהירות מהגוף ריסי עם קוליברי או מלקחיים ההלבשה לגזור במספריים Vannas. תמרון זה חוזר על עצמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגם ממוקם אז צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. </li></ol> 4. מאגר הזגוגיות Dissection. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים 0.12 לייצב את כוס העין, מספריים ווסטקוט משמשים &quot;פרח&quot; את העין על ידי ובסך הכל ארבעה ברווחים שווים מתח להקלה על קיצוצים מהגוף ריסי לקראת ראש עצב הראייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Plicata Pars גוף ריסי (איור 2) יוסר כל אחד הרביעים באמצעות מספריים ווסטקוט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבסיס זגוגי נתפסת אז משני צדי serrata אורה עם מלקחיים על פלאנה Pars לבין הרשתית (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתיחה רציף על בסיס זגוגי מוחל עם מלקחיים. חיתוך סדרתית עם ווסטקוט מספריים תמציות רקמה שקופה למחצה עם מראה &quot;מחרוזת פנינים&quot;, כפי שהוא נכרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגם ממוקם אז צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. </li></ol> 5. Cortex הזגוגיות הסרת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלאנה Pars הוא נכרת מכל אחד הרביעים במספריים ווסטקוט ידי חיתוך את העלון כ 3 מ&quot;מ אחורית של serrata אורה (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בין עלונים רקמות, קליפת זגוגי הוא מדמיין כסרט שקוף למחצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרט אלסטי נתפסת גם עם 0.12 מלקחיים או המוחזקים על ידי דבקות ספוג Weck-cel כירורגי. קליפת המוח היא זגוגי אז התרחקה מן הרשתית נכרת עם ווסטקוט מספריים (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגם ממוקם צינור microfuge ולאחר מכן לתוך חנקן נוזלי. כל הדגימות נשמרות ב -80 ° C עד מנוצלים לניסויים. </li></ol> 6. נציג תוצאות דגימות רקמה יכול להיות מעובד על ידי מגוון של שיטות ניסויים ספציפיים. במקרה שלנו, דגימות נשלחו לניתוח חלבונים על ידי SDS-PAGE (איור 3). <img src="/files/ftp_upload/2455/2455fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. חתך מבט של העין האנושית המתארות substructures שונים של הגוף הזגוגי. הזגוגית הקדמית ביותר היא שכבה collagenous דק הנקרא hyaloid הקדמי. ליבת זגוגי כוללת את כל האזור המרכזי של הגוף הזגוגי. חלק זה של הזגוגית היא מימית יותר בניגוד לבסיס זגוגי, שהוא צמיג מספיק כדי להיתפס על ידי מלקחיים, והוא מחובר היטב לגוף הרשתית ריסי הבסיס. הקפת הליבה הזגוגית היא מעטפת collagenous דק מאוד הנקרא קליפת זגוגי. <img src="/files/ftp_upload/2455/2455fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. האנטומיה בסיס הזגוגיות. בסיס מסד הזגוגית היא שקופה למחצה של הגוף הזגוגי ממוקם לאורך serrata אורה (חצים לבנים), המהווה את קו הגבול המפריד בין הגוף לבין הרשתית ריסי. הגבול הקדמי של הבסיס זגוגי משתרע על פני פלאנה Pars (קו לבן) של גוף ריסי. הגבול האחורי של הבסיס זגוגי מרחיב 2-3 מ&quot;מ האחורי של serrata אורה (מקף לבן). כדי לבסס את הבלו זגוגי, מלקחיים המשמשים לתפוס את רקמות למשוך אותו מהגוף הרשתית ריסי הבסיס. מוגבה פעם, מספריים ווסטקוט משמשים לחתוך לאורך בסיס. <img src="/files/ftp_upload/2455/2455fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. אחת ממדי SDS-PAGE של אלמנטים גוף הזגוגיות. ריכוזי חלבון סך hyaloid הקדמי, בסיס זגוגי, ויטהליבה reous, ואת קליפת זגוגי היו 11.24, 20.1, 16.61, 14.24 מ&quot;ג / מ&quot;ל, בהתאמה. ג&#39;ל אלקטרופורזה בוצע ב kV 200 במשך 45 דקות, מוכתם פלמינגו (Bio-Rad), ו דמיינו באמצעות הדמיה VersaDoc המערכת (Bio-Rad). פרופילים של רקמות שונות להראות כמה להקות דומות, המציין או משומר או לחצות מזהם חלבונים, כמו גם להקות ייחודי (כוכבית), המעיד על חלבונים מקומי דיפרנציאלי.

<ol>
	<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel.">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Prog Retin Eye Res. 19, 323-344 (2000).</li><li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+pharmacologic+vitreolysis.">Molecular biology of pharmacologic vitreolysis.</a> Trans Am Ophthalmol Soc. 103, 473-494 (2005).</li><li>Yoshimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+inflammatory+immune+mediators+in+vitreoretinal+diseases.">Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases.</a> PLoS One. 4, e8158-e8158 (2009).</li><li>Gao, B. B., Chen, X., Timothy, N., Aiello, L. P., Feener, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+vitreous+proteome+in+diabetes+without+diabetic+retinopathy+and+diabetes+with+proliferative+diabetic+retinopathy.">Characterization of the vitreous proteome in diabetes without diabetic retinopathy and diabetes with proliferative diabetic retinopathy.</a> J Proteome Res. 7, 2516-2525 (2008).</li><li>Izuta, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+SOD+and+VEGF+are+increased+in+vitreous+bodies+from+proliferative+diabetic+retinopathy+patients.">Extracellular SOD and VEGF are increased in vitreous bodies from proliferative diabetic retinopathy patients.</a> Mol Vis. 15, 2663-2672 (2009).</li><li>Azimzadeh, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formalin-fixed+paraffin-embedded+(FFPE)+proteome+analysis+using+gel-free+and+gel-based+proteomics.">Formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) proteome analysis using gel-free and gel-based proteomics.</a> J Proteome Res. 9, 4710-4720 (2010).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

הגוף הזגוגי הוא ג&#39;ל שקוף למחצה, אשר ההרכב המולקולרי הוא הבין היטב, במיוחד ברמה של substructures שלה: הבסיס זגוגי, הליבה, קליפה, ו hyaloid הקדמי. ליבת זגוגי מכיל collagens השנייה, החמישי, התשיעי, XI, יחד עם כונדרואיטין סולפט proteoglycans, proteoglycans heparan סולפט ו hyaluronan. 1,2 סמנים חלבון הליבה זגוגי נקשרו מחלות כגון רטינופתיה סוכרתית. 3-5 איך חלבונים אלה באים לידי ביטוי באופן דיפרנציאלי בכל substructures, ובמקרים רבים את זהותם חלבון מסוים, אינם ידועים. פרטים אלה עשויים לתת תובנה למקורו של חלבונים הקשורים למחלות vitreoretinal ספציפיים לעזור בעתיד טיפולים היעד. למרות שלאחר אופטימלית מורטם מרווח לנתיחה רקמות טרם נקבע, פירוק חלבונים עלול להשפיע הניסויים במורד הזרם. לדוגמה, אימונוהיסטוכימיה מושפע ב 12 שעות שלאחר המוות בעיניים וכמה פעילות אנזים מסוים עשוי לרדת תוך מספר שעות (תצפית לא פורסם). כל הרקמות במחקר זה נאספו בין 2 ל 8 שעות של מוות ללא שינויים משמעותיים ביטוי חלבון או התאמה analsyis proteomics. חנקן נוזלי מקפיא שיטת שימור נבחר על קיבעון על מנת למנוע שינויים קטנים במבנה החלבון נגרם על ידי מקבע לחצות קישור, אשר הודגמה ברקמות אחרות באמצעות LC-MS/MS. 6 מחקרים proteomic יהיה תלוי ביכולת במדויק לנתח את תאים שונים של הזגוגית, כפי שמודגם בניסוי הווידאו הזאת. יש לנו תוקף את טכניקת הניתוח באמצעות 1-ממדי SDS-PAGE. כאשר התוצאות שלנו מראים, יש ביטוי דיפרנציאלי חלבונים substructures הגוף השונים זגוגי. זיהוי החלבונים האלה יספקו הבנה מפורטת יותר של מידור זגוגי.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> 0.12 מלקחיים </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1502 </td></tr><tr><td> 5-cc מזרק </td><td> בקטון דיקינסון, </td><td> 309603 </td></tr><tr><td> מלקחיים ההלבשה ישר עם Serrations </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1400 </td></tr><tr><td> 23 מחט מד </td><td> בקטון דיקינסון, </td><td> 305145 </td></tr><tr><td> קוליברי מלקחיים </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> 2 / 132 </td></tr><tr><td> Castroviejo מספריים הקרנית בזווית </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3223 </td></tr><tr><td> Vannas מעוקל Capsulotomy מספריים </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3387 </td></tr><tr><td> Weck-cel כירורגית חניתות </td><td> מדטרוניק </td><td> 0008680 </td></tr><tr><td> ווסטקוט מספריים Tenotomy מעוקל </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3320 </td></tr></tbody></table>

dissection of human vitreous body elements for proteomic analysis

זגוגי הוא ברור אופטית, תאי מטריקס collagenous הממלא את פנים העין overlies הרשתית. 1,2 אינטראקציות בין חריגה substructures הזגוגית לבין הרשתית ביסוד vitreoretinal מחלות שונות, כולל דמעה התנתקות הרשתית, כווץ מקולרי, חור מקולרי, גיל ניוון מקולרי הקשור, המתיחה vitreomacular, vitreoretinopathy שגשוג, רטינופתיה סוכרתית שגשוג, ו vitreoretinopathies בירושה. 1,2 ההרכב המולקולרי של substructures זגוגי אינו ידוע. מאז הגוף הזגוגי הוא שקוף עם גישה כירורגית מוגבל, זה כבר קשה ללמוד substructures שלה ברמה המולקולרית. פיתחנו שיטה להפריד ולשמר את הרקמות הללו לניתוח proteomic וביוכימיים. הטכניקה לנתיחה בסרטון זה ניסיוני מראה כיצד לבודד בסיס זגוגי, hyaloid הקדמי, הליבה זגוגי, ואת קליפת זגוגי מהעיניים שלאחר המוות האנושי. אחת ממדי SDS-PAGE מנתח של כל רכיב זגוגי הראו כי טכניקת לנתיחה שלנו הביא ארבעה פרופילים חלבון ייחודי המתאים מסד כל הגוף הזגוגי האדם. זיהוי של חלבונים מידור דיפרנציאלי יגלה מולקולות המועמד שבבסיס מחלות vitreoretinal שונים.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis at JoVE.com

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

וידאו זה מראה טכניקה יעילה עבור מבדל ו בניתוח שונות שקוף למחצה מבנים בגוף האדם זגוגי בעיניים פוסט מורטם.

Dissection של גוף האדם אלמנטים הזגוגיות לניתוח proteomic

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

פרוטוקול ליפרתרמיה הארוכה משך כל גוף בעכברים

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

כל הזגוגיות ההומור Dissection לניתוח Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Laser-capture Microdissection of Human Prostatic Epithelium for RNA Analysis

Microdissection לייזר לכידתו של אדם הערמונית האפיתל לניתוח RNA

The prostate gland contains a heterogeneous milieu of stromal, epithelial, neuroendocrine and immune cell types.  Healthy prostate is comprised of ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

דיסקציה של הלבלב העכבר עבור ניתוח היסטולוגית והגדרת פרופיל מטבולי

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

דיסקציה והתרבות Explant של Allantois מאתר לניתוח במבחנה של קובץ מצורף Allantoic

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Body Composition and Metabolic Caging Analysis in High Fat Fed Mice

הרכב הגוף וניתוח מטבולית שכולאת בעכברים פד שומן גבוה

Alterations to body composition (fat or lean mass), metabolic parameters such as whole-body oxygen consumption, energy expenditure, and substrate ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

ניתוח כמותי מיקרו-CT Aortopathy במודל של עכברים של β-aminopropionitrile-induced מפרצת אבי העורקים, דיסקציה

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

כל הגוף ואת אזורי כימות של האדם פעיל חום רקמת שומן באמצעות 18F-FDG PET/CT...

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Segmentation and Linear Measurement for Body Composition Analysis using Slice-O-Matic and Horos

פילוח ומדידה ליניארית לניתוח הרכב הגוף באמצעות פרוסה-או-מאטי והורוס

Body composition is associated with risk of disease progression and treatment complications in a variety of conditions. Therefore, quantification of ...

Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion

מיקום, ניתוח וניתוח של גנגליון מורין סטלה

The autonomic nervous system is a substantial driver of cardiac electrophysiology. Especially&#160;the role of its sympathetic branch is an ongoing matter ...