Name: establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay
Uploaded: 2011-01-11T20:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door financiering van de Overstreet Foundation.

1. Basic Set Up Alvorens Dissection: <ol><li> Geschikt volume van complete NSC medium wordt bereid door het mengen van NeuroCult NSC basismedium en NeuroCult NSC proliferatieverdrag Supplementen op een 09:01 verhouding, respectievelijk. </li><li> Het medium wordt opgewarmd in een 37 ° C waterbad. </li><li> Koude HEPES-gebufferd minimum essentieel medium (HEM) met een hoge concentratie van antibiotica (10%) is voorbereid voor dissectie en wassen doel. Als alternatief kan NSC basaal medium met antibiotica suppletie ook...

<ol>
	<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+forebrain:+a+relatively+quiescent+subpopulation+of+subependymal+cells.">Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.</a> Neuron. 13, 1071-1082 (1994).</li><li>Craig, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+growth+factor+expansion+of+endogenous+subependymal+neural+precursor+cell+populations+in+the+adult+mouse+brain.">In vivo growth factor expansion of endogenous subependymal neural precursor cell populations in the adult mouse brain.</a> J Neurosci. 16, 2649-2658 (1996).</li><li>Golmohammadi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+frequency+and+distribution+of+stem+and+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+brain.">Comparative analysis of the frequency and distribution of stem and progenitor cells in the adult mouse brain.</a> Stem Cells. 26, 979-987 (2008).</li><li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., BA, R. e. y. n. o. l. d. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship.">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li><li>Louis, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+neural+stem+and+progenitor+cells+in+the+neural+colony-forming+cell+assay.">Enumeration of neural stem and progenitor cells in the neural colony-forming cell assay.</a> Stem Cells. 26, 988-996 (2008).</li></ol>

De neurosphere assay is de methode van keuze voor de isolatie en de uitbreiding van neurale stamcellen 1-5 vanwege de eenvoud en reproduceerbaarheid. Deze test is een waardevol instrument voor grootschalige opwekking van ongedifferentieerde CNS voorloper cellen, die kunnen worden gebruikt voor zowel in vitro als in vivo studies. Benadrukt moet worden dat neurospheres kunnen worden gegenereerd uit zowel de bonafide neurale stamcellen en meer beperkt voorlopers. Daarom is de berekening van de neurosphe...

* Om HEM te maken, mix 110L pakje MEM and160ml van 1M HEPES en breng het volume tot 8,75 L met gedestilleerd water. Stel de uiteindelijke pH naar 7,4 en op te slaan bij 4 ° C.

establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay

In zoogdieren, stamcellen fungeert als een bron van ongedifferentieerde cellen naar cel ontstaan ​​en vernieuwing in verschillende weefsels en organen te behouden gedurende de levensduur van het dier. Ze kunnen eventueel vervangen door cellen die verloren zijn gegaan in het verouderingsproces en bij het proces van letsel en ziekte. Het bestaan ​​van neurale stamcellen (NSCs) werd voor het eerst beschreven door Reynolds en Weiss (1992) in de volwassen centrale zenuwstelsel (CZS) met behulp van een nieuw serum-vrije cultuur systeem, de neurosphere assay (NSA). Met behulp van deze test, is het ook mogelijk te isoleren en uit te breiden NSCs uit verschillende regio&#39;s van de embryonale CZS. Deze in vitro uitgebreid NSCs zijn multipotente en kunnen aanleiding geven tot de drie belangrijkste celtypes van het centrale zenuwstelsel. Terwijl de NSA lijkt relatief eenvoudig uit te voeren, de aandacht voor de procedures aangetoond hier is nodig om betrouwbare en consistente resultaten te bereiken. Deze video toont op een praktische NSA te genereren en te NSCs uit te breiden van embryonale dag 14-mouse hersenweefsel en zorgt voor technische details, zodat men kan bereiken reproduceerbaar neurosphere culturen. De procedure omvat het oogsten E14 muizenembryo&#39;s, de hersenen microdissectie het ganglion eminenties, dissociatie van het geoogste weefsel in NSC medium oogst naar een enkele celsuspensie te krijgen, en uiteindelijk plating cellen in NSA cultuur. Na 5-7 dagen in cultuur, zijn de resulterende primaire neurospheres gepasseerd verder uit te breiden het nummer van de NSCs voor toekomstige experimenten.

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Deze video toont protocol de toepassing van de neurosphere test voor de isolatie en de uitbreiding van neurale stamcellen van het ganglionisch eminenties van embryonale dag 14-hersenen van muizen.

Tot vaststelling van Embryonale Mouse Neural Stem Cell Culture Met behulp van de Neurosphere Assay

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissectie en Cultuur van Commissural neuronen van het ruggenmerg Embryonic

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Isolatie en uitbreiding van de volwassen muis neurale stamcellen Met behulp van de Neurosphere Assay

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

Het lokaliseren van Eiwit in 3D Neural Stem Cell Culture: een hybride Visualisatie Methodologie

The importance of 3-dimensional (3D) topography in influencing neural stem and progenitor cell (NPC) phenotype is widely acknowledged yet challenging to ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neurale-Colony Forming Cell-test: Een test om Bona Fide neurale stamcellen van Neural Progenitor Cellen Discrimineer

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Surgical Transplantation of Mouse Neural Stem Cells into the Spinal Cords of Mice Infected with Neurotropic Mouse Hepatitis Virus

Chirurgische Transplantatie van Mouse neurale stamcellen in het ruggenmerg van muizen geïnfecteerd met neurotrope Mouse Hepatitis Virus

Mice infected with the neurotropic JHM strain of mouse hepatitis virus (MHV) develop pathological and clinical outcomes similar to patients with the ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

De Neuroblast test: een test voor de generatie en de verrijking van Neuronale stamcellen uit Onderscheidende factor voor neurale stamcellen Nakomelingen met behulp van flowcytometrie

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Isolatie en Cultuur van Rat Embryonale neurale cellen: een Quick-protocol

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolatie en Cultuur van neurale lijst cellen van embryonale Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

Kwantitatieve meting van relatieve retinoïnezuur Levels in E8.5 embryo&#39;s en neurosfeerculturen Met behulp van de F9 RARE-lacZ-Cell gebaseerde Reporter Assay

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Opsomming van neurale stamcellen Met behulp van klonen Testen

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...