Name: establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay
Uploaded: 2011-01-11T20:10:00
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Ce travail a été soutenu financièrement par la Fondation Overstreet.

1. Configuration de base Avant de procéder à la dissection: <ol><li> Volume approprié de milieu complet NSC est préparée en mélangeant NeuroCult NSC moyen basale et NeuroCult NSC Suppléments prolifération à un ratio 9:1, respectivement. </li><li> Le milieu est chauffé dans un bain d&#39;eau à 37 ° C. </li><li> Froid tamponné HEPES milieu essentiel minimum (HEM) à forte concentration d&#39;antibiotiques (10%) est préparé pour la dissection et l&#39;objet à laver. Alternativement, le NSC milieu basal av...

<ol>
	<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+forebrain:+a+relatively+quiescent+subpopulation+of+subependymal+cells.">Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.</a> Neuron. 13, 1071-1082 (1994).</li><li>Craig, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+growth+factor+expansion+of+endogenous+subependymal+neural+precursor+cell+populations+in+the+adult+mouse+brain.">In vivo growth factor expansion of endogenous subependymal neural precursor cell populations in the adult mouse brain.</a> J Neurosci. 16, 2649-2658 (1996).</li><li>Golmohammadi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+frequency+and+distribution+of+stem+and+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+brain.">Comparative analysis of the frequency and distribution of stem and progenitor cells in the adult mouse brain.</a> Stem Cells. 26, 979-987 (2008).</li><li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., BA, R. e. y. n. o. l. d. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship.">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li><li>Louis, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+neural+stem+and+progenitor+cells+in+the+neural+colony-forming+cell+assay.">Enumeration of neural stem and progenitor cells in the neural colony-forming cell assay.</a> Stem Cells. 26, 988-996 (2008).</li></ol>

Le test est Neurosphère la méthode de choix pour l&#39;isolement et l&#39;expansion des cellules souches neurales 1-5 raison de sa simplicité et de reproductibilité. Ce test est un outil précieux pour production à grande échelle des cellules précurseurs du SNC indifférencié, qui pourrait être utilisé à la fois in vitro et in vivo. Il convient de souligner que neurosphères pourrait être généré à la fois du bona fide des cellules souches neurales et les progéniteurs plus re...

* Pour faire HEM, mélanger 110L paquet de MEM and160ml d&#39;HEPES 1M et porter le volume à 8,75 L à l&#39;aide d&#39;eau distillée. Réglez le pH final à 7,4 et le stocker à 4 ° C.

establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay

Dans les mammifères, les cellules souches agit comme une source de cellules indifférenciées de maintenir la genèse des cellules et de renouvellement dans les différents tissus et organes pendant la durée de vie de l&#39;animal. Ils peuvent éventuellement remplacer les cellules qui sont perdues dans le processus de vieillissement ou dans le processus de blessure et de maladie. L&#39;existence de cellules souches neurales (NSC) a d&#39;abord été décrit par Reynolds et Weiss (1992) dans le système nerveux des mammifères adultes central (SNC) en utilisant un système de culture sans sérum roman, l&#39;essai de Neurosphère (NSA). En utilisant ce dosage, il est également possible d&#39;isoler et d&#39;élargir NSCs de différentes régions du SNC embryonnaire. Ces NSCs dans élargi in vitro sont multipotentes et peuvent donner lieu à trois principaux types de cellules du SNC. Alors que la NSA semble relativement simple à réaliser, attention aux procédures démontré ici est nécessaire afin d&#39;obtenir des résultats fiables et cohérents. Cette vidéo montre pratiquement la NSA pour générer et développer NSCs du jour embryonnaire du tissu cérébral de 14 souris et fournit les détails techniques, on peut obtenir pour les cultures Neurosphère reproductibles. La procédure comprend la récolte d&#39;embryons de souris E14, microdissection cerveau pour récolter les éminences ganglionnaires, la dissociation des tissus récoltés dans le milieu de NSC pour gagner une suspension cellulaire unique, et enfin plaquage cellules en culture NSA. Après 5-7 jours de culture, les neurosphères résultant primaires sont passées à élargir le nombre des CNS pour des expériences futures.

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Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Ce protocole vidéo démontre l&#39;application du test Neurosphère pour l&#39;isolement et l&#39;expansion des cellules souches neurales de la éminences ganglionnaires du jour embryonnaire 14 cerveau de souris.

Établir embryonnaires de la souris culture de cellules souches neurales utilisant le test Neurosphère

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissection et la culture de neurones de la moelle épinière commissurales embryonnaires

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Recherche

Neurosciences

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

L&#39;isolement et expansion des cellules souches neurales de souris adultes utilisant le test Neurosphère

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

Localisation des protéines en 3D de la culture de cellules souches neuronales: une méthodologie de visualisation hybride

The importance of 3-dimensional (3D) topography in influencing neural stem and progenitor cell (NPC) phenotype is widely acknowledged yet challenging to ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neural-Formant Colonie dosage cellulaire: Un test pour distinguer Bona Fide Cellules souches neuronales à partir de cellules progénitrices neurales

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Surgical Transplantation of Mouse Neural Stem Cells into the Spinal Cords of Mice Infected with Neurotropic Mouse Hepatitis Virus

Transplantation chirurgicale de cellules souches neurales de souris dans la moelle épinière des souris infectées avec le virus de l&#39;hépatite murine neurotrope

Mice infected with the neurotropic JHM strain of mouse hepatitis virus (MHV) develop pathological and clinical outcomes similar to patients with the ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Le test neuroblaste: Un test pour la génération et l&#39;enrichissement des cellules souches neuronales à partir de différenciation des cellules souches neurales Progeny Par cytométrie en flux

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Isolement et culture de cellules embryonnaires de rat neurones: un protocole rapide

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolement et culture de cellules de crêtes neurales de tube neural embryonnaire murin

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

Mesure quantitative des niveaux relatifs à l&#39;acide rétinoïque E8.5 Embryons et Neurosphère Cultures Utilisation du F9 RARE-Lacz base de cellules Reporter Assay

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Énumération des cellules souches neurales utilisant clonales Assays

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...