Name: establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay
Uploaded: 2011-01-11T20:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מימון מקרן אוברסטריט.

1. יסוד הגדרת לפני שתמשיך Dissection: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נפח מתאים של המדיום המל&quot;ל להשלים הוא מוכן על ידי ערבוב NeuroCult בינוני NSC הבסיס, NeuroCult NSC תוספי הפצת ביחס 9:01 בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המדיום הוא התחמם בתוך אמבט מים 37 מעלות צלזיוס....

<ol>
	<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+forebrain:+a+relatively+quiescent+subpopulation+of+subependymal+cells.">Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.</a> Neuron. 13, 1071-1082 (1994).</li><li>Craig, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+growth+factor+expansion+of+endogenous+subependymal+neural+precursor+cell+populations+in+the+adult+mouse+brain.">In vivo growth factor expansion of endogenous subependymal neural precursor cell populations in the adult mouse brain.</a> J Neurosci. 16, 2649-2658 (1996).</li><li>Golmohammadi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+frequency+and+distribution+of+stem+and+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+brain.">Comparative analysis of the frequency and distribution of stem and progenitor cells in the adult mouse brain.</a> Stem Cells. 26, 979-987 (2008).</li><li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., BA, R. e. y. n. o. l. d. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship.">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li><li>Louis, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+neural+stem+and+progenitor+cells+in+the+neural+colony-forming+cell+assay.">Enumeration of neural stem and progenitor cells in the neural colony-forming cell assay.</a> Stem Cells. 26, 988-996 (2008).</li></ol>

Assay neurosphere היא שיטת הבחירה של בידוד והרחבת בתאי גזע עצביים 1-5 בגלל הפשטות שלה reproducibility. Assay זהו כלי רב ערך עבור הדור בקנה מידה גדול של תאים במערכת העצבים המרכזית מובחן מבשר, אשר יכול לשמש הן במבחנה במחקרים vivo. יודגש כי neurospheres יכול להיווצר משני לתאי גזע עצביים ב...

* כדי להפוך את המכפלת, לערבב 110L חבילה של מזכרות and160ml של HEPES 1M ולהביא את נפח L 8.75 בעזרת מים מזוקקים. הגדר את PH הסופי 7.4 ולאחסן אותו ב 4 ° C.

establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay

ב mammalians, בתאי גזע מהווה גם מקור של תאים שלא עברו התמיינות לשמור בראשית התא התחדשות רקמות ואיברים שונים במהלך תוחלת החיים של החיה. הם יכולים באופן פוטנציאלי להחליף תאים אובדים בתהליך ההזדקנות או בתהליך של פציעה ומחלה. קיומו של בתאי גזע עצביים (NSCs) תוארה לראשונה במערכת יונקים בוגרים העצבים המרכזית (CNS) באמצעות נסיוב ללא הרומן בתרבות המערכת, assay neurosphere (NSA) של ריינולדס וייס (1992). שימוש assay, זה גם אפשרי לבודד להרחיב NSCs מאזורים שונים של מערכת העצבים העוברית. אלה ב NSCs במבחנה מורחבת multipotent הם יכולים להצמיח את שלושת סוגי התאים העיקריים של מערכת העצבים המרכזית. בעוד NSA נראית פשוטה יחסית לביצוע, לב הנהלים הפגינו כאן נדרשת על מנת להשיג תוצאות אמינה ועקבית. סרט הווידאו הזה מדגים למעשה NSA ליצור ולהרחיב NSCs מיום עובריים 14-עכבר רקמת המוח ומספק פרטים טכניים כך אפשר להשיג תרבויות neurosphere לשחזור. ההליך כולל קצירת E14 עוברי עכברים, microdissection המוח לקצור את יואילו הוד מעלתם ganglionic, ניתוק של הרקמה שנקטפו במדיום NSC להשיג ההשעיה תא בודד, ולבסוף ציפוי התאים בתרבית NSA. לאחר 5-7 ימים בתרבות, neurospheres הראשוני וכתוצאה מכך הם passaged להרחיב עוד יותר את מספר NSCs ניסויים עתידיים.

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

זה פרוטוקול וידאו מדגים את היישום של assay neurosphere לבידוד והרחבת בתאי גזע עצביים מן יואילו הוד מעלתם ganglionic היום עובריים 14-עכבר המוח.

הקמת עכבר עובריים גזע עצביים תרבית תאים באמצעות Assay Neurosphere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissection והתרבות של נוירונים Commissural מחוט השדרה עובריים

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

בידוד הרחבה של תאים בוגרים עכבר גזע עצביים שימוש Assay Neurosphere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

חלבון לוקליזציה ב 3D תרבות גזע עצביים נייד: מתודולוגיה ויזואליזציה היברידי

The importance of 3-dimensional (3D) topography in influencing neural stem and progenitor cell (NPC) phenotype is widely acknowledged yet challenging to ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

עצבית, המושבה יצירת Assay נייד: Assay להפלות בונה תאים בתום גזע עצביים מן ובתאים עצבית

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Surgical Transplantation of Mouse Neural Stem Cells into the Spinal Cords of Mice Infected with Neurotropic Mouse Hepatitis Virus

כירורגי של השתלת תאים עכבר גזע עצביים לתוך מיתרי השדרה של עכברים נגועים בנגיף הפטיטיס עכבר Neurotropic

Mice infected with the neurotropic JHM strain of mouse hepatitis virus (MHV) develop pathological and clinical outcomes similar to patients with the ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Assay Neuroblast: Assay לדור והעשרה של ובתאים העצבית הבחנה בין צאצאיהם גזע עצביים Cell שימוש cytometry זרימה

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

בידוד והתרבות של תאים עובריים עצביים עכברוש: ​​פרוטוקול מהיר

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

מדידה כמותית של רמות חומצה רטינואית יחסית ב E8.5 עוברים neurosphere תרבויות באמצעות assay Reporter F9 נדיר- lacZ מבוססי תאים

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

ספירת בתאי גזע עצביים באמצעות מבחני המשובטים

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...