Name: establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay
Uploaded: 2011-01-11T20:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto da un finanziamento della Fondazione Overstreet.

1. Impostazione di base prima di procedere alla dissezione: <ol><li> Volume appropriato di completo media NSC è preparata mescolando NeuroCult medio basale NSC e NeuroCult NSC Supplementi proliferazione con un rapporto 9:1, rispettivamente. </li><li> Il mezzo è riscaldato in un bagno d&#39;acqua a 37 ° C. </li><li> Freddo HEPES-buffered medio minimo indispensabile (HEM), con elevata concentrazione di antibiotici (10%) è preparato per la dissezione e lo scopo di lavaggio. In alternativa, media NSC basale con l&#39;...

<ol>
	<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+forebrain:+a+relatively+quiescent+subpopulation+of+subependymal+cells.">Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.</a> Neuron. 13, 1071-1082 (1994).</li><li>Craig, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+growth+factor+expansion+of+endogenous+subependymal+neural+precursor+cell+populations+in+the+adult+mouse+brain.">In vivo growth factor expansion of endogenous subependymal neural precursor cell populations in the adult mouse brain.</a> J Neurosci. 16, 2649-2658 (1996).</li><li>Golmohammadi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+frequency+and+distribution+of+stem+and+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+brain.">Comparative analysis of the frequency and distribution of stem and progenitor cells in the adult mouse brain.</a> Stem Cells. 26, 979-987 (2008).</li><li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., BA, R. e. y. n. o. l. d. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship.">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li><li>Louis, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+neural+stem+and+progenitor+cells+in+the+neural+colony-forming+cell+assay.">Enumeration of neural stem and progenitor cells in the neural colony-forming cell assay.</a> Stem Cells. 26, 988-996 (2008).</li></ol>

Il dosaggio neurosfere è il metodo di scelta per l&#39;isolamento e l&#39;espansione delle cellule staminali neurali 1-5 per la sua semplicità e riproducibilità. Questo saggio è uno strumento prezioso per la grande generazione di cellule precursori indifferenziati sistema nervoso centrale, che potrebbe essere utilizzato sia per in vitro e in vivo. Va sottolineato che neurosfere potrebbe essere generato sia dalla bona fide cellule staminali e progenitori neurali più ristretto. Pertanto, ...

* Per rendere HEM, mescolare 110L pacchetto di MEM and160ml di HEPES 1M e portare il volume a 8,75 L con acqua distillata. Impostare il PH finale a 7,4 e conservarlo a 4 ° C.

establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay

In mammiferi, le cellule staminali agisce come una fonte di cellule indifferenziate per mantenere la genesi e il rinnovamento cellulare in vari tessuti ed organi durante la vita dell&#39;animale. Essi possono potenzialmente sostituire le cellule che si perdono nel processo di invecchiamento o in via di infortuni e malattie. L&#39;esistenza di cellule staminali neurali (NSC) è stato descritto da Reynolds e Weiss (1992) negli adulti dei mammiferi sistema nervoso centrale (SNC) utilizzando un siero privo di sistema di coltura romanzo, il saggio neurosfere (NSA). Da questo test, è anche possibile isolare ed espandere NSCs provenienti da diverse regioni del SNC embrionale. Queste NSCs espanse in vitro sono multipotenti e possono dar luogo a tre tipi principali di cellule del sistema nervoso centrale. Mentre la NSA sembra relativamente semplice da eseguire, l&#39;attenzione alle procedure dimostrato qui è necessario per ottenere risultati affidabili e coerenti. Questo video dimostra praticamente NSA per generare ed espandere NSCs fin dal primo giorno embrionale 14-topo tessuto cerebrale e fornisce dettagli tecnici così si può raggiungere culture neurosfere riproducibile. La procedura prevede la raccolta E14 embrioni di topo, microdissezione cervello per raccogliere le eminenze gangliari, dissociazione dei tessuti raccolti in NSC medio per ottenere una sospensione singola cellula e, infine, placcatura cellule in coltura NSA. Dopo 5-7 giorni di cultura, la risultante neurosfere primarie sono diversi passaggi di espandere ulteriormente il numero delle NSCs per gli esperimenti futuri.

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Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Questo protocollo video mostra l&#39;applicazione del test neurosfere per l&#39;isolamento e l&#39;espansione delle cellule staminali neurali da eminenze gangliari del giorno embrionale 14-topo cervello.

Stabilire embrionali di topo Neural Stem Cell Culture del saggio di neurosfere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissezione e la cultura di neuroni embrionali commissurali da midollo spinale

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Ricerca

Neuroscienze

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Isolamento ed espansione della cellule staminali neurali del mouse utilizzando il saggio neurosfere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

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The importance of 3-dimensional (3D) topography in influencing neural stem and progenitor cell (NPC) phenotype is widely acknowledged yet challenging to ...

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Neural-formanti colonia saggio Cell: un test per discriminare Bona Fide cellule staminali neurali da cellule progenitrici neurali

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Surgical Transplantation of Mouse Neural Stem Cells into the Spinal Cords of Mice Infected with Neurotropic Mouse Hepatitis Virus

Il trapianto chirurgico di cellule staminali neurali del mouse nel midollo spinale di topi infettati con virus dell&#39;epatite neurotropi mouse

Mice infected with the neurotropic JHM strain of mouse hepatitis virus (MHV) develop pathological and clinical outcomes similar to patients with the ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Il saggio neuroblasti: un test per la generazione e arricchimento delle cellule progenitrici neuronali di differenziare i Progeny cellule staminali neurali in citometria a flusso

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Isolamento e la coltura di cellule embrionali neuronali di ratto: un protocollo veloce

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolamento e la coltura delle cellule della cresta neurale da Embryonic Murine tubo neurale

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

Misurazione quantitativa dei livelli relativi dell&#39;acido retinoico nelle E8.5 embrioni e neurosfere Culture Utilizzando il F9 RARE-LacZ cellulare a base di Reporter Assay

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

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Conteggio di cellule staminali neurali L&#39;utilizzo clonali Assays

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