Name: establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay
Uploaded: 2011-01-11T20:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por fondos de la Fundación Overstreet.

1. Configuración básica antes de proceder a la disección: <ol><li> Volumen apropiado de medio completo NSC se prepara mezclando NeuroCult NSC medio basal y NeuroCult Suplementos NSC proliferación en una proporción de 9:1, respectivamente. </li><li> El medio es calentado en un baño de agua a 37 ° C. </li><li> Frío HEPES buffer medio esencial mínimo (HEM), con alta concentración de antibióticos (10%) se prepara para la disección y el propósito de lavado. Por otra parte, NSC medio basal con la suplementació...

<ol>
	<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+forebrain:+a+relatively+quiescent+subpopulation+of+subependymal+cells.">Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.</a> Neuron. 13, 1071-1082 (1994).</li><li>Craig, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+growth+factor+expansion+of+endogenous+subependymal+neural+precursor+cell+populations+in+the+adult+mouse+brain.">In vivo growth factor expansion of endogenous subependymal neural precursor cell populations in the adult mouse brain.</a> J Neurosci. 16, 2649-2658 (1996).</li><li>Golmohammadi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+frequency+and+distribution+of+stem+and+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+brain.">Comparative analysis of the frequency and distribution of stem and progenitor cells in the adult mouse brain.</a> Stem Cells. 26, 979-987 (2008).</li><li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., BA, R. e. y. n. o. l. d. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship.">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li><li>Louis, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+neural+stem+and+progenitor+cells+in+the+neural+colony-forming+cell+assay.">Enumeration of neural stem and progenitor cells in the neural colony-forming cell assay.</a> Stem Cells. 26, 988-996 (2008).</li></ol>

El ensayo neuroesfera es el método de elección para el aislamiento y la expansión de las células madre neurales 1-5 debido a su sencillez y reproducibilidad. Este ensayo es una herramienta invaluable para generación a gran escala de células precursoras indiferenciadas del SNC, que podrían ser utilizados para los estudios in vitro e in vivo. Cabe destacar que neuroesferas podrían ser generados por la bona fide las células madre neuronales y progenitores más restringido. Por...

* Para hacer HEM, mezcla 110L paquete de MEM and160ml de HEPES 1M y obtener un volumen de 8,75 L con agua destilada. Ajuste el pH final de 7,4 y almacenar a 4 ° C.

establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay

En los mamíferos, las células madre actúa como una fuente de células indiferenciadas para mantener génesis y renovación celular en diferentes tejidos y órganos durante el ciclo de vida del animal. Que potencialmente pueden reemplazar las células que se pierden en el proceso de envejecimiento o en el proceso de lesiones y enfermedades. La existencia de células madre neurales (NSC) fue descrita por primera vez por Reynolds y Weiss (1992) en los mamíferos adultos del sistema nervioso central (SNC) utilizando un nuevo sistema de suero libre de la cultura, el ensayo neuroesfera (NSA). El uso de este ensayo, también es posible aislar y expandir NSCs de diferentes regiones del sistema nervioso central embrionario. Estos in vitro NSCs ampliado son multipotentes y pueden dar lugar a los tres principales tipos de células del sistema nervioso central. Mientras que la NSA parece relativamente simple de realizar, la atención a los procedimientos demostrado aquí se requiere a fin de lograr resultados confiables y consistentes. Este video demuestra prácticamente la NSA para generar y ampliar NSCs a partir del día 14 embrionario del ratón tejido cerebral y ofrece detalles técnicos por lo que uno puede lograr culturas neuroesfera reproducible. El procedimiento incluye la recolección de embriones de ratón E14, microdisección del cerebro para recoger las eminencias ganglionares, la disociación de los tejidos recolectados en el medio de NSC para obtener una suspensión de células individuales, y, finalmente, placas células en cultivo NSA. Después de 5-7 días en la cultura, las neuroesferas primarios resultantes se pasan a ampliar aún más el número de la NSCs para futuros experimentos.

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Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Este protocolo de vídeo se muestra la aplicación de la prueba neuroesfera para el aislamiento y la expansión de las células madre neurales de las eminencias ganglionares del día embrionario 14 de cerebro de ratón.

El establecimiento de embriones de ratón con células madre neurales Cultura mediante el ensayo de neuroesfera

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

La disección y la Cultura de las neuronas comisurales de médula espinal embrionaria

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Investigación

Neurociencias

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

El aislamiento y la expansión de las células troncales nerviosas de ratones adultos mediante el ensayo de neuroesfera

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

La localización de la proteína en 3D Cultura de células madre neurales: una metodología de visualización híbrida

The importance of 3-dimensional (3D) topography in influencing neural stem and progenitor cell (NPC) phenotype is widely acknowledged yet challenging to ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neural formadoras de colonias ensayo de células: un ensayo para discriminar Bona Fide células troncales nerviosas de células progenitoras neurales

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Surgical Transplantation of Mouse Neural Stem Cells into the Spinal Cords of Mice Infected with Neurotropic Mouse Hepatitis Virus

El trasplante quirúrgico de células madre neurales en la médula espinal de los ratones infectados con el virus neurotrópico Hepatitis Ratón

Mice infected with the neurotropic JHM strain of mouse hepatitis virus (MHV) develop pathological and clinical outcomes similar to patients with the ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

El ensayo neuroblasto: un ensayo para la generación y enriquecimiento de las células progenitoras neuronales de la diferenciación de la progenie de células madre neurales Usando citometría de flujo

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Aislamiento y cultivo de células neuronales de ratas embrionarias: un protocolo rápido

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Aislamiento y cultivo de células de la cresta neural de embriones murinos del Tubo Neural

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

La medición cuantitativa de los niveles relativos de ácido retinoico en E8.5 embriones y Neurosphere culturas utilizando el ensayo indicador basado en células raras-lacZ F9

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Enumeración de células madre neurales Usando ensayos clonales

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...