Name: establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay
Uploaded: 2011-01-11T20:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Detta arbete stöddes av medel från Overstreet Foundation.

1. Grundläggande installation innan du fortsätter till Dissection: <ol><li> Lämplig volym av hela NSC mediet bereds genom att blanda NeuroCult NSC bassubstratets och NeuroCult NSC spridning Kosttillskott vid ett 9:1-förhållande, respektive. </li><li> Mediet värms upp i ett 37 ° C vattenbad. </li><li> Kall HEPES-buffrad minst viktigt medium (HEM) med hög koncentration av antibiotika (10%) är redo för dissektion och tvätt syfte. Alternativt kan NSC bassubstratets med antibiotika tillskott även användas för...

<ol>
	<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+forebrain:+a+relatively+quiescent+subpopulation+of+subependymal+cells.">Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.</a> Neuron. 13, 1071-1082 (1994).</li><li>Craig, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+growth+factor+expansion+of+endogenous+subependymal+neural+precursor+cell+populations+in+the+adult+mouse+brain.">In vivo growth factor expansion of endogenous subependymal neural precursor cell populations in the adult mouse brain.</a> J Neurosci. 16, 2649-2658 (1996).</li><li>Golmohammadi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+frequency+and+distribution+of+stem+and+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+brain.">Comparative analysis of the frequency and distribution of stem and progenitor cells in the adult mouse brain.</a> Stem Cells. 26, 979-987 (2008).</li><li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., BA, R. e. y. n. o. l. d. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship.">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li><li>Louis, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+neural+stem+and+progenitor+cells+in+the+neural+colony-forming+cell+assay.">Enumeration of neural stem and progenitor cells in the neural colony-forming cell assay.</a> Stem Cells. 26, 988-996 (2008).</li></ol>

Den neurosphere analysen är den metod som föredras för isolering och expansion av neurala stamceller 1-5 grund av dess enkelhet och reproducerbarhet. Denna analysmetod är ett ovärderligt verktyg för storskalig produktion av odifferentierade CNS föregångare celler, som kan användas för både in vitro och in vivo-studier. Det bör understrykas att neurospheres kan genereras från både seriösa neurala stamceller och mer begränsad stamceller. Därför beräkna neurosphere bildar oft...

* För att göra HEM, blanda 110L paket MEM and160ml 1M HEPES och föra volymen till 8,75 L med destillerat vatten. Ställ den slutliga PH till 7,4 och lagra den i 4 ° C.

establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay

I mammalians fungerar stamceller som en källa till odifferentierade celler för att upprätthålla cellens uppkomst och förnyelse i olika vävnader och organ under den livslängd djuret. De kan potentiellt ersätta celler som går förlorade i åldrandeprocessen eller i färd med att skada och sjukdom. Förekomsten av neurala stamceller (NSCs) beskrevs först av Reynolds och Weiss (1992) i den vuxna däggdjur centrala nervsystemet (CNS) enligt en ny serumfritt kultur system, neurosphere analys (NSA). Med hjälp av denna analys är det också möjligt att isolera och expandera NSCs från olika regioner av embryonala CNS. Dessa in vitro expanderade NSCs är multipotenta och kan ge upphov till de tre stora celltyper i CNS. Medan NSA verkar relativt enkla att utföra, uppmärksamma de förfaranden som visats här krävs för att erhålla tillförlitliga och konsekventa resultat. Denna video demonstrerar praktiskt NSA för att skapa och expandera NSCs från embryonala dag 14-musen hjärnvävnad och ger tekniska detaljer så kan man uppnå reproducerbara neurosphere kulturer. Förfarandet omfattar skörd E14 musembryon, hjärnan microdissection att skörda ganglieblockerande höjder, dissociation av den skördade vävnad i NSC mediet för att få en enda cell fjädring och slutligen plätering celler i NSA kultur. Efter 5-7 dagar i kultur, är den resulterande primära neurospheres passerats att ytterligare utöka antalet NSCs för framtida experiment.

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Denna video protokoll visar tillämpningen av neurosphere test för isolering och utbyggnad av neurala stamceller från ganglieblockerande eminens embryonala dag 14-musen hjärnan.

Etablera Embryonala Mus Neurala Kultur Stem Cell Använda Neurosphere analys

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissektion och kultur commissural neuroner från embryonala ryggmärg

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Isolering och utvidgning av den vuxna Mouse neurala stamceller Använda Neurosphere analys

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

Lokalisera Protein i 3D Neural Stem Cell Culture: en hybrid Visualisering Methodology

The importance of 3-dimensional (3D) topography in influencing neural stem and progenitor cell (NPC) phenotype is widely acknowledged yet challenging to ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neural-kolonibildande Cell-analys: en analys att diskriminera Bona Fide neuronala stamceller från neurala stamceller

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Surgical Transplantation of Mouse Neural Stem Cells into the Spinal Cords of Mice Infected with Neurotropic Mouse Hepatitis Virus

Kirurgisk Transplantation av Mouse neurala stamceller i ryggmärgen av Möss som infekterats med neurotrop mus hepatitvirus

Mice infected with the neurotropic JHM strain of mouse hepatitis virus (MHV) develop pathological and clinical outcomes similar to patients with the ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Den Neuroblast Analys: En analys för generering och anrikning av neuronala progenitorceller från Skilja Neural Stem Cell Progeny med hjälp av flödescytometri

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Isolering och kultur råttembryonala neurala celler: En snabb protokoll

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering och odling av neurallistceller från embryonala Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

Kvantitativ mätning av relativ retinsyra nivåer i E8.5 embryon och neurosfärkulturer med hjälp av F9 sällsynta LacZ Cell-baserad Reporter analys

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Räkning av neurala stamceller Använda Klon Analyser

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...