Name: establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay
Uploaded: 2011-01-11T20:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Bu çalışma Overstreet Vakfı parasal destek verdi.

1. Diseksiyon için Başlamadan Önce Temel Set Up: <ol><li> Tam MGK orta Uygun hacmi, 09:01 oranında NeuroCult MGK Bazal Orta ve NeuroCult MGK Silahların Yayılmasını Önleme Takviyeler sırasıyla karıştırılarak hazırlanır. </li><li> Orta, 37 ° C su banyosunda ısıtılır. </li><li> Antibiyotik yüksek konsantrasyonda (% 10) Soğuk Hepes-tamponlu asgari temel orta (HEM), diseksiyon ve yıkama amacı için hazırlanmıştır. Alternatif olarak, antibiyotik takviyesi ile MGK bazal orta de bu amaç için ku...

<ol>
	<li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+forebrain:+a+relatively+quiescent+subpopulation+of+subependymal+cells.">Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells.</a> Neuron. 13, 1071-1082 (1994).</li><li>Craig, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+growth+factor+expansion+of+endogenous+subependymal+neural+precursor+cell+populations+in+the+adult+mouse+brain.">In vivo growth factor expansion of endogenous subependymal neural precursor cell populations in the adult mouse brain.</a> J Neurosci. 16, 2649-2658 (1996).</li><li>Golmohammadi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+frequency+and+distribution+of+stem+and+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+brain.">Comparative analysis of the frequency and distribution of stem and progenitor cells in the adult mouse brain.</a> Stem Cells. 26, 979-987 (2008).</li><li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., BA, R. e. y. n. o. l. d. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship.">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li><li>Louis, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+neural+stem+and+progenitor+cells+in+the+neural+colony-forming+cell+assay.">Enumeration of neural stem and progenitor cells in the neural colony-forming cell assay.</a> Stem Cells. 26, 988-996 (2008).</li></ol>

Neurosphere tahlil sadeliği ve tekrarlanabilirlik nedeniyle nöral kök hücreler 1-5 izolasyonu ve genişleme için tercih edilen bir yöntemdir. Bu testte hem de in vitro ve in vivo çalışmalar için kullanılan olabilir farklılaşmamış MSS öncü hücreler, büyük ölçekli üretimi için paha biçilmez bir araçtır. Neurospheres iyi niyetli nöral kök hücreler ve daha sınırlı atalarıdır hem olabileceği vurgulanmalıdır. Bu nedenle, neurosphere oluşturan frekans hesaplan...

* HEM yapmak için, 110L paket 1M Hepes MEM and160ml karıştırın ve distile su kullanılarak 8.75 L hacmi getirmek. 7.4 nihai PH ayarlama ve 4 saklamak ° C

establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay

Memelilerde, kök hücreleri farklılaşmamış hücreler, hayvanın ömrü boyunca, farklı doku ve organlarda hücre doğuşu ve yenileme korumak için bir kaynak olarak görür. Bu potansiyel yaşlanma sürecini veya yaralanma ve hastalık sürecinde kaybolur hücreleri değiştirebilirsiniz. Nöral kök hücrelerin varlığı (NSC&#39;lerde) ilk roman serum serbest bir kültür sistemi, neurosphere assay (NSA) ile yetişkin memelilerin merkezi sinir sistemi (MSS) Reynolds ve Weiss (1992) tarafından tarif edilmiştir. Bu testte, aynı zamanda, farklı bölgelerinden embriyonik MSS NSC&#39;lerde izole etmek ve genişletmek için uygulanabilir. Bu in vitro genişletilmiş NSC&#39;lerde multipotent ve MSS üç önemli hücre tiplerinin ortaya çıkmasına neden olabilir. NSA gerçekleştirmek için nispeten basit olmakla birlikte, güvenilir ve tutarlı sonuçlar elde etmek için gerekli Burada gösterilen usul dikkat. Bu video pratik NSA 14-fare beyin dokusu oluşturmak ve embriyonik günden itibaren NSC&#39;lerde genişletmek gösterir ve teknik detaylar bir tekrarlanabilir neurosphere kültürleri elde edebilirsiniz sağlar. Bu prosedür, tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için MGK orta hasat doku ganglion eminences, disosiyasyon hasat, beyin mikrodiseksiyon E14 fare embriyoları, hasat ve son olarak NSA kültür hücreleri kaplama içerir. Kültür 5-7 gün sonra, ortaya çıkan birincil neurospheres daha sonraki deneyler için NSC&#39;lerde sayısını artırmak için geçişli.

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay at JoVE.com

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Bu video protokolü, embriyonik gün 14-fare beyninde ganglion eminences nöral kök hücrelerin izolasyonu ve genişleme için neurosphere testinin uygulama göstermektedir.

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Embriyonik Omurilik Commissural Nöronlar Diseksiyon ve Kültür

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Neurosphere Testi Yetişkin Fare Nöral Kök Hücre İzolasyonu ve Genişleme

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

3D Nöral Kök Hücre Kültürü yerelleştirme Protein: Hybrid Görselleştirme Metodolojisi

The importance of 3-dimensional (3D) topography in influencing neural stem and progenitor cell (NPC) phenotype is widely acknowledged yet challenging to ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Hücre Testi Şekillendirme Sinir-Koloni: Sinir Progenitör Hücreler Bona Fide Sinir Kök Hücreler Ayırım Bir Testi

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Surgical Transplantation of Mouse Neural Stem Cells into the Spinal Cords of Mice Infected with Neurotropic Mouse Hepatitis Virus

Spinal Kordonlar nörotropik Mouse Hepatit Virüs ile Etkilenmiş Fare Fare Nöral Kök Hücre Transplantasyon Cerrahi

Mice infected with the neurotropic JHM strain of mouse hepatitis virus (MHV) develop pathological and clinical outcomes similar to patients with the ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Neuroblast Test: Akım Sitometri Kullanımı Farklılaşan Nöral Kök Hücre Döl nöronal Progenitör Hücrelerinin üretilmesi ve zenginleştirilmesi için bir Testi

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Sıçan Embriyonik Nöral Hücre İzolasyonu ve Kültür: Bir Hızlı Protokol

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

F9 NADİR-LacZ Hücre tabanlı Muhabir Test kullanma E8.5 Embriyolar ve Neurosphere Kültürleri Bağıl Retinoik Asit Düzeylerinin Kantitatif Ölçümü

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Nöral Kök Hücre Sayım klonal Tahliller Kullanma

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...