Name: quantification of dsdna using the hitachi f-7000 fluorescence spectrophotometer and picogreen dye
Uploaded: 2010-11-05T17:00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of dsDNA using the Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer and PicoGreen Dye at JoVE.com

1. כלי ההתקנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל spectrofluorometer ולאפשר להתחמם במשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש ב-Excel ליצור קובץ עם תקנים נתונים לדוגמה, כפי שמוצג באיור 1 ולשמור אותו סי.אס. &quot;csv&quot; פורמט. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. לתקנים נתוני דגימות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת fluorometer כדלקמן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon1.jpg" alt="סמל 1" /> כפתור זה ייפתח חלון שיטת ניתוח, באיור 2. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. שיטת ניתוח חלון, הכרטיסייה כללי. בצע את הבחירות הבאות: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;מדידה&quot;, בחר photometry מ למשוך למטה בתפריט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;מפעיל&quot;, להזין את שם המפעיל המתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אין צורך להזין מידע בשדה &quot;כלי&quot;. זו נבחרת באופן אוטומטי על ידי התוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השדה &quot;דגימה&quot; אינו פעיל בעת שימוש בקורא microplate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן הערות אשר ייתכן שתרצה לכלול בדוח בשדה &quot;הערות&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;אביזרים&quot;, להזין מידע הקשור האביזרים המשמשים לבדיקה זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערה הכפתורים בצד ימין של החלון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כפתור &quot;טען&quot; מאפשר טעינה שיטות ניתוח שנשמרו בעבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> &quot;שמור&quot; כפתור המאפשר עדכון סדרה של פרמטרים מבחן או שיטת ניתוח הציל בעבר נטען, תוך שימוש באותו שם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> &quot;שמור בשם&quot; כפתור מאפשר חיסכון קבוצה חדשה של פרמטרים מבחן או שיטת ניתוח בשם הרצוי. </li></ul> כעת לחץ על הלשונית &quot;quantitation&quot;, ראה איור 3 ולעשות את הבחירות הבאות. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. שיטת ניתוח חלון, לשונית quantitation. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;סוג quantitation&quot;, בחר אורך גל. זה מצביע על קריאה הקרינה ייעשה באמצעות הגל הנבחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;סוג כיול&quot;, בחר 1 כדי st. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;מספר אורכי גל&quot;, בחר 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;יחידת ריכוז&quot;, הזן ng / mL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו את תיבות נבחר עבור &quot;כיול ידני&quot; ו &quot;עקומת כוח דרך אפס&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב &quot;ספרות אחרי הנקודה העשרונית&quot; שדה, בחר 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב &quot;הגבלהתחתונה ריכוז&quot; שדה, הזן 0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;ריכוז גבול עליון, הזן 10000. </li></ul> כעת לחץ על הלשונית &quot;כלי&quot; ולעשות את הבחירות הבאות. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4. שיטת ניתוח חלון, בכרטיסיה כלי <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב &quot;מצב נתונים:&quot; את השדה, בחר פלואורסצנטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> &quot;מהירות קיצוץ&quot; השדה אינו פעיל בשלב זה, הוא משמש רק עבור מדידות זרחני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה מצב &quot;אורך גל&quot;, בחר גם קבוע WL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;EX / WL1&quot; להיכנס 480nm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב &quot;EM / WL1&quot; שדה להיכנס 520nm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל השדות האחרים תחת EX ו EM אינם פעילים בשלב זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;EX סדק&quot; לבחור 5.0nm מ למשוך למטה בתפריט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;א.מ. סדק&quot; לבחור 5.0nm מ למשוך למטה בתפריט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו נבחר בתיבת מול &quot;מתח PMT 1-1000V&quot; את השדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;PMT מתח&quot;, בחר 700V מ למשוך למטה בתפריט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב &quot;calc סטטיסטי אוטומטי. מספר&quot; בשדה לבחור 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;משכפל&quot; לבחור 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;זמן אינטגרציה&quot;, בחר 0.1s. &lt;/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;עיכוב&quot; הזן או בחר 0s. </li></ul> לחץ על לשונית &quot;צג&quot;. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig5.jpg" alt="איור 5" /> איור 5. שיטת ניתוח חלון, הכרטיסיה צג. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב &quot;ציר Y&quot;, &quot;מקס:&quot; שדה, בחר 10000 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב &quot;ציר Y&quot;, &quot;מינימום:&quot; שדה, בחר 0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר בתיבה משמאל את &quot;פתח עיבוד נתונים לאחר רכישת נתונים&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו נבחר את תיבת משמאל &quot;הדו&quot;ח הדפסת לאחר רכישת נתונים&quot;, אלא אם כן אתה רוצה לדווח תודפס באופן אוטומטי לאחר קריאות הושלמו. </li></ul> לחץ על הכרטיסייה &quot;הדוח&quot;, ראה איור 6. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig6.jpg" alt="איור 6" /> איור 6. שיטת ניתוח חלון, Tab דוח. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשדה &quot;פלט&quot;, בחר דוח הדפסה מתוך למשוך למטה בתפריט. אתה יכול גם לבחור &quot;השתמש ב-Microsoft Excel&quot; אם אתה רוצה לייצא את הנתונים ל-Excel, או &quot;הדפסה השתמש מחולל גיליון&quot; אם באמצעות להוסיף אופציונלית על מחולל דוחות תוכנית אשר תאפשר הפקת דוחות בהתאמה אישית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על תיבות עבור הפריטים שברצונך לכלול בדוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשמור את כל הפרמטרים שנבחרו בכרטיסיות שונות של החלון &quot;שיטת ניתוח&quot;, לחץ שוב על הכרטיסייה &quot;כללי&quot; ולשמור אותם תחת שם הקובץ במיקום שבו אתה יכול למצוא אותם לשימוש עתידי, ולחץ על &quot; אישור &quot;כדי לסגור את החלון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה משלים את הגדרת פרמטרים של מכשיר הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כעת נוכל להגדיר את הקורא microplate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon2.jpg" alt="סמל 2" /> כפתור, אשר יביא את חלון ההתקנה MPR על העליונה. </li></ul> בחר בארות עבור התקנים דוגמאות בכרטיסייה חלון / פלייט ההתקנה MPR, כפי שמוצג באיור 7. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig7.jpg" alt="איור 7" /> איור 7. MPR חלון ההתקנה, הכרטיסייה פלייט. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על המיקום A1 ו לגרור את העכבר כדי E1, ואז ללחוץ על <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon3.jpg" alt="סמל 3" /> כפתור. זה יבחר את העמדות לשמש הסטנדרטים. עמדות אלו יודגשו בצבע ירוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו אנחנו צריכים לבחור F1 עמדות H3 עבור הדגימות. לחץ וגרור את העכבר החל F1 עמדה, לעמדה H3 ולאחר מכן לחץ על <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon4.jpg" alt="סמל 4" /> כפתור, זה ידגיש את עמדות בצבע צהוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז לחזור על הפעולה זהה עבור עמדות A2 ל-E3, כדי לבחור אותן עמדות למדידות המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו, בואו לטעון את הקובץ מופרדים בפסיקים הקובץ משתנה (CSV) שהוכן מראש עם לתקנים מידע לדוגמא. </li></ul> לחץ על הכרטיסייה &quot;ובכן מידע&quot; של &quot;חלון MPR ההתקנה&quot;, כפי שמוצג באיור 8. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig8.jpg" alt="איור 8" /> איור 8. MPR חלון ההתקנה, הכרטיסיה פרטי טוב. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן לחץ על <img src="/files/ftp_upload/2465/2465icon5.jpg" alt="סמל 5" /> כפתור. חלון Windows Explorer יפתח אשר כפי שמוצג באיור 9, אשר יאפשר איתור &quot;ובכן information.csv&quot; קובץ וטעינה בו. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig9.jpg" alt="איור 9" /> איור 9. טעינת מידע מדגם היטב. לאחר טעינת הקובץ &quot;ובכן מידע&quot;, &quot;מידע טוב&quot; ייראה כפי שמוצג באיור 10 <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig10.jpg" alt="איור 10" /> איור 10. מידע טעון מדגם היטב. </li></ul></li></ol></li></ol> 2. לדוגמה Picogreen Assay הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 1X TE חוצץ (10 mM טריס-HCl, 1 mM EDTA) על ידי הוספת 1 מ&quot;ל של 20 X TE הצפתעד 19 מ&quot;ל di H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון PicoGreen מגיב על ידי הוספת 50 μL 200 X מגיב PicoGreen עד 9.95 הצפת מ&quot;ל 1 X TE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת תקנים (Lambda dsDNA) על ידי ביצוע דילולים הסידורי של המניות dsDNA (100 מיקרוגרם / מ&quot;ל). ראשית להכין תמיסה של 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​dsDNA ידי הוספת 25 μL של המניה dsDNA (100 מיקרוגרם / מ&quot;ל) ו -25 הצפת μL 1 x TE. ואז להכין את פתרונות סטנדרטיים על ידי הוספת כמויות המצוין של dsDNA ו חיץ כמפורט בטבלה שלהלן: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ריכוז dsDNA </td><td> נפח dsDNA </td><td> נפח של הצפת </td></tr><tr><td> 1 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> 20 μL של 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​dsDNA </td><td> 980 μL 1 X TE הצפת </td></tr><tr><td> 0.1 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> 100 μL של 1 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​dsDNA </td><td> 900 μL 1 X TE הצפת </td></tr><tr><td> 0.01 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> 100 μL של 0.1 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​dsDNA </td><td> 900 μL 1 X TE הצפת </td></tr><tr><td> 0.001 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> 100 μL של 0.01 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​dsDNA </td><td> 900 μL 1 X TE הצפת </td></tr></tbody></table></li></ol> 3. מדידה לתקנים Fluorescence לדוגמא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 150 μL של תקן זה לתוך בארות A1-E1 של צלחת 96 היטב, לכל איור 7, ועל פי הטבלה הבאה: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> טוב </td><td> תקן </td></tr><tr><td> A1 </td><td> 1 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> B1 </td><td> 0.1 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> C1 </td><td> 0.01 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> D1 </td><td> 0.001 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> E1 </td><td> 1 X TE הצפת </td></tr></tbody></table></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 150 דגימות ידוע μL לתוך בארות F1 כדי H3, שמוצג באיור 7 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים פתרון PicoGreen מוכן בשלב 1.2 לתוך שוקת מיועד לשימוש רב ערוצי פיפטה. השתמש פיפטה רב ערוצי לספק 150 μL פתרון PicoGreen לבארות A1-H3. מערבבים פתרון תקני בעדינות עם פיפטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים צלחת באזור חשוך להמתין 2-5 דקות תגובה לפתח. </li></ol> 4. נציג תוצאות עקומת כיול טוב מוערך באמצעות פרמטרים שונים הניתנים על ידי תוכנת ה-F-7000 על מדידה של סטנדרטים החישוב של עקומת הכיול על ידי התוכנה. מקדם נחישות מציין את מטיב ההתאמה של הסטנדרטים נמדד עקומת כיול מחושב. ככל ערך זה היא &quot;1&quot;, טוב יותר את ההתאמה של הערך הנמדד ואת עקומת כיול. אם הערך הוא רחוק מלהיות &quot;1&quot;, סטנדרטים חייבים להיות נמדד מחדש, מוכן שוב, או הכושר של עקומת הכיול השתנה. איור 11 מציג דוגמה של עקומת כיול עם מקדם נחישות מחושב = 0.99993, השיג עבור כימות dsDNA PicoGreen באמצעות צבע. <img src="/files/ftp_upload/2465/2465fig11.jpg" alt="איור 11" /> איור 11. דוגמה של עקומת כיול dsDNA.

<ol>
	<li>Singer, V. L., Jones, L. J., Yue, S. T., Haugland, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+PicoGreen+reagent+and+development+of+a+fluorescence-based+solution+assay+for+double-stranded+DNA+quantitation.">Characterization of PicoGreen reagent and development of a fluorescence-based solution assay for double-stranded DNA quantitation.</a> Analytical Biochemistry. 249 (2), 228-238 (1997).</li></ol>

לואיס מורנו א ו ל קנדרה קוקס מועסקים על ידי Hitachi גבוהה טכנולוגיות אמריקה המייצרת את המכשיר משמש במאמר זה.

Pipetting זהירות במהלך הכנת המדגם, וכן באמצעות ספקטרופוטומטר הקרינה יציבה רגיש חיונית להשגת תוצאות טובות לשחזור. במקרה של ספקטרופוטומטר את הקרינה משמשים מבחן זה, הוא הציע להשתמש מדגם 300 μL נפח הסופי הקורא microplate. נפח נמוך מקטין את רגישות, נפח גדול יותר עלול לגרום לזיהום הכלאה בין בארות.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Distilled H2O</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Quant-iT Picogreen dsDNA Assay Kit from Invitrogen</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>P7589</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nalge Nunc Fluorescence Microplates p/n 237108</td>
<td>Supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>237108</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>12 Channel Eppendorf Micropipette</td>
<td>Supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>3516677</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000 &mu;L Eppendorf Pipette</td>
<td>Supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>200 &mu;L Eppendorf Pipette </td>
<td>Supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 mL serological pipet</td>
<td>Supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Aluminum foil</td>
<td>Supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette tips</td>
<td>Supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer with FL Solutions 2.1</td>
<td>Equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>5J1-0003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microplate Reader Accessory for F-7000</td>
<td>Equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>5J0-0139</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

quantification of dsdna using the hitachi f-7000 fluorescence spectrophotometer and picogreen dye

כימות של ה-DNA, בעיקר בריכוזים קטנים, היא משימה חשובה עם מגוון רחב של יישומים ביולוגיים כולל תקן מבחני ביולוגיה מולקולרית כגון סינתזה וטיהור של ה-DNA, אבחון יישומים כגון כימות של מוצרי הגברה DNA, גילוי של מולקולות דנ&quot;א סמים ההכנות. במהלך וידיאו זה נדגים את היכולת של ספקטרופוטומטר Hitachi F-7000 Fluorescence מצויד אביזר Micro Reader פלייט לבצע כימות dsDNA באמצעות בדיקות מולקולריות קוואנט, זה PicoGreen ערכת צבע מגיב. ספקטרופוטומטר F-7000 Fluorescence מציעה רגישות גבוהה מדידות מהירות גבוהה. זוהי מערכת גמישה המסוגלת מדידת הקרינה, הארה, זרחני. מספר מצבי מדידה זמינים, כולל גל סריקה, סריקה בזמן, photometry ו 3-D מדידה סריקה. ספקטרופוטומטר יש רגישות בטווח של 50 picomoles של והעמסת בעת שימוש בנפח 300 מדגם μL ב microplate, והוא מסוגל למדוד מהירות סריקה של 60,000 ננומטר / דקה. כמו כן, יש טווח דינמי רחב של עד 5 סדרי גודל המאפשר שימוש של עקומות כיול על פני טווח רחב של ריכוזים. מערכת אופטית משתמשת בכל אופטיקה רעיוני לאנרגיה רגישות מקסימלית. טווח אורך הגל הסטנדרטי הוא 200-750 ננומטר, ניתן להרחיב 900 ננומטר, כאשר באחת photomultipliers אופציונלי אינפרא אדום הקרוב. המערכת מאפשרת בקרת טמפרטורה אופציונלי עבור הקורא צלחת 5-60 מעלות צלזיוס בטמפרטורה באמצעות אופציונלי חיצוני מבוקר circulator נוזלי. הקורא microplate מאפשר שימוש של 96 microplates היטב, את מהירות המדידה עבור 96 בארות הוא פחות מ 60 שניות בעת שימוש במצב קינטיקה. שולטת תוכנה עבור ה-F-7000 ו microplate Reader הם גם גמישה. דוגמאות ניתן להגדיר פורמטים או עמודה או שורה, וכן כל שילוב של בארות עשוי להיבחר מדידות מדגם. זה מאפשר ניצול אופטימלי של microplate. בנוסף, התוכנה מאפשרת ייבוא ​​מיקרו מדגם צלחת תצורות שנוצרו ב-Excel שנשמרו ערכים מופרדים בפסיקים, או &quot;csv&quot; פורמט. תצורות microplate מדידה ניתן לשמור נזכר על ידי התוכנה לנוחות ויעילות מוגברת. תוצאות הנתונים יכול להיות פלט דיווח סטנדרטי, ל-Excel, או תוכנית דווח אופציונלי גנרטור.

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of dsDNA using the Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer and PicoGreen Dye at JoVE.com

Quantification of dsDNA using the Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer and PicoGreen Dye

הפגנה של כימות dsDNA באמצעות מולקולרית בדיקות PicoGreen לצבוע Hitachi ו-F-7000 ספקטרופוטומטר Fluorescence מצויד אביזר microplate הקורא.

כימות dsDNA באמצעות ה-F-7000 Hitachi Fluorescence ספקטרופוטומטר ו PicoGreen דיי

Quantification of DNA, especially in small concentrations, is an important task with a wide range of biological applications including standard molecular ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microvolume Protein Concentration Determination using the NanoDrop 2000c Spectrophotometer

ריכוז חלבון Microvolume קביעת באמצעות 2000c NanoDrop ספקטרופוטומטר

Traditional spectrophotometry requires placing samples into cuvettes or capillaries. This is often impractical due to the limited sample volumes often ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

זמן לשגות הדמיה של מיטוזה לאחר transfection siRNA

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Quantification of &gamma;H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

Quantification of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

כימות γH2AX מוקדים בתגובה קרינה Ionising

DNA double-strand breaks (DSBs), which are induced by either endogenous metabolic processes or by exogenous sources, are one of the most critical DNA ...

Concentration Determination of Nucleic Acids and Proteins Using the Micro-volume Bio-spec Nano Spectrophotometer

קביעת ריכוז חומצות גרעין וחלבונים שימוש Micro בנפח Bio-spec ספקטרופוטומטר Nano

Nucleic Acid quantitation procedures have advanced significantly in the last three decades.  More and more, molecular biologists require consistent ...

Absolute Quantum Yield Measurement of Powder Samples

מדידה אבסולוטית קוונטית תשואה של דוגמאות אבקת

Measurement of fluorescence quantum yield has become an important tool in the search for new solutions in the development, evaluation, quality control and ...

Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI

Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI

ויזואליזציה של Caenorhabditis elegans לציפורן מבנים באמצעות דיי ויטל lipophilic, DiI

The cuticle of C. elegans is a highly resistant structure that surrounds the exterior of the animal1-4. The cuticle not only protects the animal from the ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

הדמיה וניתוח של מולקולות ה-mRNA באמצעות הקרינה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה ב<em&gt; Cerevisiae Saccharomyces</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Observation and Quantification of Telomere and Repetitive Sequences Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) with PNA Probes in Caenorhabditis elegans

Observation and Quantification of Telomere and Repetitive Sequences Using Fluorescence In Situ Hybridization FISH with PNA Probes in Caenorhabditis elegans

תצפית כימות הטלומרים ו רצפים חוזרים קרינה באמצעות<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה (דגים) עם PNA בדיקות ב<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Telomere is a ribonucleoprotein structure that protects chromosomal ends from aberrant fusion and degradation. Telomere length is maintained by telomerase ...

Visualization and Quantification of Mesenchymal Cell Adipogenic Differentiation Potential with a Lineage Specific Marker

ויזואליזציה, כימות פוטנציאל בידול Adipogenic תא Mesenchymal עם סמן ספציפי שושלת היוחסין

Several dyes are currently available for use in detecting differentiation of mesenchymal cells into adipocytes. Dyes, such as Oil Red O, are cheap, easy ...

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

הדמיה וכימות של רקמות שומן חום ובז' בעכברים באמצעות [18F]FDG מיקרו-PET/MR הדמיה

Brown and beige adipocytes are now recognized as potential therapeutic targets for obesity and metabolic syndromes. Non-invasive molecular imaging methods ...