Name: purification of progenitors from skeletal muscle
Uploaded: 2011-03-16T13:00:00
Duration: 12 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Progenitors from Skeletal Muscle at JoVE.com

<ol>
	<li>Buckingham, M., Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+stem+cells.">Skeletal muscle stem cells.</a> Curr Opin Genet Dev. 18, 330-336 (2008).</li><li>Relaix, F., Marcelle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+stem+cells.">Muscle stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 21, 748-753 (2009).</li><li>Joe, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+injury+activates+resident+fibro/adipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis.">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li><li>Natarajan, A., Lemos, D. R., Rossi, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibro/adipogenic+progenitors:+A+double-edged+sword+in+skeletal+muscle+regeneration.">Fibro/adipogenic progenitors: A double-edged sword in skeletal muscle regeneration.</a> Cell Cycle. 9, (2010).</li><li>Sherwood, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+adult+mouse+myogenic+progenitors:+functional+heterogeneity+of+cells+within+and+engrafting+skeletal+muscle.">Isolation of adult mouse myogenic progenitors: functional heterogeneity of cells within and engrafting skeletal muscle.</a> Cell. 119, 543-554 (2004).</li><li>Sacco, A., Doyonnas, R., Kraft, P., Vitorovic, S., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewal+and+expansion+of+single+transplanted+muscle+stem+cells.">Self-renewal and expansion of single transplanted muscle stem cells.</a> Nature. , (2008).</li><li>Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+isolation+of+satellite+cells+for+skeletal+muscle+regeneration.">Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration.</a> Science. 309, 2064-2067 (2005).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الهدف من هذا البروتوكول هو تحقيق توازن معقول بين عوائد عالية وقابلية عالية للخلايا النقية. الخطوة الأكثر أهمية في ضمان أن يتم استرداد الخلايا السليمة وكما كان متوقعا ، وتفكك النسيج الأنزيمية للانطلاق. وينبغي التعامل مع الأنسجة بشكل خاص أن يكون لطيف ، والتي من الصعب إثبات أو حتى نقدر في شكل السمعي البصري. عاملا رئيسيا آخر هو طول الداخلي. أطول يستغرقه الانتقال من الجهة المانحة إلى الحيوان المتلقي ، وأقل جدوى ، وبالتالي كفاءة engraftment. يجب أن يكون هناك أي سؤال حول الجدوى التي لم يتم الإجابة على الفور من خلال النظر في وتيرة الحدث PI إيجابية في عينات خلايا النقي بعد الفرز ، ونقترح أن يتم إجراء فحص لقياس الحد من تخفيف clonogenicity 3. أنواع نموذجية من العضلات غير التالفة العائد بشكل روتيني حوالي 1 في 15-20 خلايا قادرة على الشروع في المنشأ العضلي الليفي أو / مكون الشحم المستعمرات في المختبر. بينما اساسا 100 ٪ من المستعمرات التي انطلقت من النواب تتضمن myotubes متباينة ، إلا حوالي ثلث عدد المستعمرات التي تم الحصول عليها من FAPs تحتوي على الخلايا الشحمية ، بالإضافة إلى سلسة myofibroblasts أكتين العضلات إيجابية.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> كولاجيناز الثاني </td><td> سيغما الدريخ </td><td> C - 6885 ، </td><td> 500 ش / مل </td></tr><tr><td> كولاجيناز D </td><td> روش </td><td> 11088882001 </td><td> 1.5 ش / مل </td></tr><tr><td> تهجير الثاني </td><td> روش </td><td> 04942078001 </td><td> 2.4 ش / مل </td></tr><tr><td> خلية مصفاة </td><td> دينار بحريني </td><td> 352340 </td><td> 40 ميكرون </td></tr><tr><td> أنبوب مصفاة مع خلية </td><td> دينار بحريني </td><td> 352235 </td><td> 40 ميكرون </td></tr><tr><td> Hoechst33342 </td><td> سيغما الدريخ </td><td> B2261 </td><td> 2-5 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td> CD31 - FITC </td><td> Ebiosciences </td><td> 11-0311-85 </td><td> استنساخ 390 </td></tr><tr><td> CD45 - FITC </td><td> المنزل الذي أدلى </td><td></td><td> استنساخ I3 / 2 </td></tr><tr><td> Sca1 - PECY7 </td><td> Ebiosciences </td><td> 25-5981-82 </td><td> استنساخ D7 </td></tr><tr><td> α - 7 إنتغرين APC </td><td> المنزل الذي أدلى </td><td> استفسار مع مختبر روسي </td><td> R2F2 </td></tr></tbody></table>

purification of progenitors from skeletal muscle

يحتوي على العضلات والهيكل العظمي من السكان من أصول متعددة السلف جنينية متميزة وإمكانات النمو. الأسلاف عضلي ، ويقيم عادة في &quot;خلية موقف فضائية&quot; بين غشاء البلازما myofiber والغشاء القاعدي laminin الغنية التي ensheaths عليه ، وتجديد الخلايا الذاتية التي تلتزم فقط إلى 1،2 النسب عضلي. وقد وصفت لنا في الآونة الأخيرة من الدرجة الثانية من أسلاف السفينة المرتبطة بها والتي يمكن أن تولد خلايا شحمية بيضاء وmyofibroblasts ، الذي يستجيب للضرر عن طريق إدخال بكفاءة الانتشار وتقدم الدعم الغذائي للخلايا المنشأ العضلي أثناء تجديد الأنسجة 3،4. واحدة من المقايسات الأكثر ثقة لتحديد إمكانات نمو والتجدد من السكان تعتمد على خلية معينة من عزلتهم وزرع 5-7. تحقيقا لهذه الغاية ونحن الأمثل لتنقية البروتوكولات من خلال التدفق الخلوي من العضلات نأت إنزيمي ، وهو ما سيوضح في هذه المقالة. سوف السكان الحصول عليها باستخدام هذه الطريقة تحتوي على أي خلايا مولدة للعضل أو مستعمرة الليفي / تشكيل مكون الشحم : لا يوجد أنواع الخلايا الأخرى قادرة على التوسع في المختبر أو على قيد الحياة في الجسم الحي التسليم. ومع ذلك ، عندما يتم استخدام هؤلاء السكان على الفور بعد فرز للتحليل الجزيئي (مثلا qRT - PCR) واحد يجب أن نضع في اعتبارنا أن مجموعات فرعية فرزها حديثا قد تحتوي على خلايا الملوثات الأخرى التي تفتقر إلى القدرة على تكوين مستعمرات أو engrafting المتلقين.

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Progenitors from Skeletal Muscle at JoVE.com

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

طريقة لتفارق الأنزيمية ، ووضع العلامات السطحية وتنقية بواسطة الخلوي تدفق الليفي / مكون الشحم والأسلاف عضلي من الهيكل العظمي والعضلات الفئران.

تنقية الأسلاف من الهيكل العظمي والعضلات

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Research

JoVE Journal

Biology

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

الكبار والعضلات والهيكل العظمي الجنينية Microexplant الثقافة وعزل خلايا جذعية عضلية هيكلية

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

الميتوكوندريا من عزل العضلات والهيكل العظمي

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

مضان القائم على القياس من دخول الكالسيوم المتجر الذي يعمل في الخلايا الحية: من خلية السرطان مثقف على عضلة

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

الليزر بإلحاق الضرر من العضلات الهيكلية اسماك الزرد الجنينية

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

العزلة وثقافة فردية وMyofibers زنزاناتهم القمر الصناعي من العضلات الهيكلية الكبار

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

العزلة من الدم والأوعية المشتقة متعددة القدرات السلائف من العضلات الهيكلية البشرية

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

عزل الميتوكوندريا من كميات الحد الأدنى من الفأر العضلات الهيكلية للإنتاجية عالية صفيحة ميكروسكوبية الجهاز التنفسي القياسات

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements

عزل الميتوكوندريا سليمة من العضلات الهيكلية التي كتبها التفاضلية الطرد المركزي لقياسات عالية الدقة قياس التنفس

Mitochondria are involved in cellular energy metabolism and use oxygen to produce energy in the form of adenosine triphosphate (ATP). Differential ...

Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts

عزل وتوصيف الإكسوسومات من الخلايا الليفية العضلية الهيكلية

Exosomes are small extracellular vesicles released by virtually all cells and secreted in all biological fluids. Many methods have been developed for the ...

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors (FAPs) and Myogenic Progenitors (MPs) in Skeletal Muscle in the Rat

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors FAPs and Myogenic Progenitors MPs in Skeletal Muscle in the Rat

تحديد وعزل وتوصيف السلف الليفية الشحمية (FAPs) والذرى العضلية المنشأ (أعضاء البرلمان) في العضلات الهيكلية في الجرذ

Fibro-adipogenic Progenitors (FAPs) are resident interstitial cells in skeletal muscle that, together with myogenic progenitors (MPs), play a key role in ...