Name: purification of progenitors from skeletal muscle
Uploaded: 2011-03-16T13:00:00
Duration: 12 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Progenitors from Skeletal Muscle at JoVE.com

1. אוסף רקמות: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בעכברים בין 7 ל 12 שבועות. בדרך כלל, לפחות שני בעלי חיים משמשים: האחד הוא להגדיר את FACS צבע שולט יחיד נדרש פיצוי עבור הקרינה מינוס אחד דגימות בקרה אלוטיפ. השני הוא מדגם בפועל למיון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים משאיפת CO 2 או לפי פרוטוקול אתיקה של בחירה. עכברים מניחים על מגבת נייר, פונה כלפי מעלה, ולרסס עם אתנול 70% ביסודיות על מנת למנוע זיהום עם פרווה העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את העור באזור הבטן עם מלקחיים, ולאחר מכן לבצע חתך אורכי קטן במספריים חדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קולפים את שני קפלי עור בכיוונים מנוגדים (למעלה ולמטה) כדי לחשוף לגמרי את שרירי הגפיים האחוריות מתחתיו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמת השריר והבלו ידי הוספת והארכת מספריים לאורך שני הצדדים של השוקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על התהליך זהה עבור עצם הירך כדי לחלץ את רקמת השריר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמים את כל רקמת שריר נכרת ב-60mm פטרי מנות, באמצעות צלחת אחת עבור הרקמה מהעכבר כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על הנ&quot;ל עבור כל העכברים. </li></ol> 2. לנתק את רקמות לתוך התאים על ידי יחיד עיכול אנזימטי: לאורך קטע זה של הפרוטוקול, להשתמש ריאגנטים סטרילית כלים לעבודה בתנאים סטריליים. <ol start="9" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2 מ&quot;ל של collagenase II (Sigma, חתול # 6885, 500u / mL) ו - 20 μL של המניה 250mm CaCl 2 אל צלחת פטרי כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקרוע את רקמת השריר לחתיכות קטנות (כ 1 מ&quot;מ 3) עם שני מלקחיים (אחד משונן, אחת מתוך כלים מדע טוב, עם 2 שיניים, חתול # 11051-10, 11154-10), לשים לב להסיר ולסלק כמה מזוהם ללא רקמות השריר ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסים את פטרי, כלים דגירה אותם 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחזר את פטרי, כלים להשתמש הבוכנה 3 מ&quot;ל המזרק ביסודיות מחית החלקים רקמות. השתמש באחת הבוכנה עבור כל דגימה, כדי למנוע זיהומים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף קצת (~ 5 מ&quot;ל) סטרילי קר PBS על צלחת פטרי כל העברת הבוצה רקמה לתוך צינור פלקון 50 מ&quot;ל (לשטוף את צלחת פטרי, אם יש צורך לשחזר את כל הרקמה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נער את הצינורית פלקון במרץ, למלא את הצינור עם PBS, צנטריפוגה @ 800rpm x 5 דקות (דגם Eppendorf הספסל העליון: 5810R), וכן לשאוב supernatant (חוזר 3 פעמים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים תערובת של 1mL collagenase ד &#39;(רוש, חתול # 11088882001, 1.5u / mL) / Dispase II (רוש, חתול #: 04942078001, 2.4u / mL) ו 10μL של CaCl 2 (250mm) כדי צינור אחד, דגירה על 37 מעלות צלזיוס עם רוטציה למשך שעה אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5-10 מ&quot;ל של מערבולת קר, סטרילי, PBS ו פיפטה ביסודיות כדי homogenize הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממלאים את צינורות עם PBS ומערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את הנוזל מסננת תא 40μm מונח על גבי צינור פלקון 50 מ&quot;ל לסנן את חתיכות גדולות של רקמה הנותרים. מחלקים כל דגימה שווה לשלוש מבחנות פלקון 50 מ&quot;ל. מלאו את כל הצינורות עם PBS אז צנטריפוגות @ 1600rpm במשך 5 דקות על 8 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל supernatant לאסוף תאים מכתים. </li></ol> 3. נוגדן מכתים ומיון: לאורך קטע זה של הפרוטוקול, להשתמש FACS סטרילית מאגרים לאיסוף ולעבוד בתנאים סטריליים. נוגדנים מסחרי נחשבים בדרך כלל סטרילי אם ינוהלו כהלכה. <ol start="20" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת צבע יחיד ושליטה דגימות אלוטיפ, resuspend המדגם במאגר FACS 1mL ולחלק את התאים מושעה בתשע 1.5mL מראש שכותרתו צינורות Eppendorf (100 μL כל שפופרת). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת מכתים צבע יחיד מערבב על פי הטבלה הבאה: שים לב: הריכוז הסופי של נוגדנים לשלוט אלוטיפ את הכתם צריך להתאים לזה של נוגדן הראשוני הם הבקרה. לדוגמה, אם אנטי SCA-1 משמש 1 μg/10 6 תאים, אלוטיפ המתאים יש להשתמש בריכוז זהה. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> Tube # </td><td> שם שפופרת </td><td> חברה </td><td> חתול # </td><td> שיבוט </td><td> אלוטיפ </td><td> מהילה </td></tr><tr><td> 1 </td><td> ללא כתם </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td> Hoechst33342 </td><td> סיגמא </td><td> B2261 </td><td></td><td></td><td> 2-5ug/ml </td></tr><tr><td> 3 </td><td> PI </td><td> סיגמא </td><td> P4864 </td><td></td><td></td><td> 1ug/ml </td></tr><tr><td rowspan="2"> 4 </td><td rowspan="2"> CD31-FITC CD45-FITC </td><td> ebioscience </td><td> 11-0311-85 </td><td> 390 </td><td> עכברוש IgG2a </td><td> 500 </td></tr><tr><td> בית עשה </td><td></td><td> I3 / 2 </td><td> עכברוש IgG2b </td><td> 500 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> Sca1-PECY7 </td><td> ebioscience </td><td> 25-5981-82 </td><td> D7 </td><td> עכברוש IgG2a </td><td> 5000 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> α-7 APC </td><td> בית עשה </td><td></td><td> R2F2 </td><td> עכברוש IgG2b </td><td> 1000 </td></tr></tbody></table></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת מכתים אלוטיפ לשלוט מתערבב באמצעות הטבלה הבאה: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> Tube # </td><td> שם של הצינור </td><td> Hoechst </td><td> PI </td><td> CD31- FITC </td><td> CD45- FITC </td><td> Scal- PE-CY7 </td><td> -7- APC </td><td> Rat- IgG2b- APC </td><td> Rat- IgG2a- pecy7 </td><td> Rat- IgG2a- FITC </td><td> Rat- IgG2b- FITC </td></tr><tr><td> 7 </td><td> שוה CD31 / CD45 </td><td> + </td><td> + </td><td> - </td><td> - </td><td> + </td><td> + </td><td> - </td><td> - </td><td> + </td><td> + </td></tr><tr><td> 8 </td><td> שוה Scal- pecy7 </td><td> + </td><td> + </td><td> + </td><td> + </td><td> - </td><td> + </td><td> - </td><td> + </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> 9 </td><td> שוה α-7-APC </td><td> + </td><td> + </td><td> + </td><td> + </td><td> + </td><td> - </td><td> + </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td></tr></tbody></table></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Pipet יחיד צבע איזוטופ מכתים לשלוט מתערבב (אנחנו בדרך כלל להתאים את הריכוז של נוגדנים כך בין 5 ל 10 μL של מכתים לערבב מתווספים כל דגימה) לתוך הצינור Eppendorf המתאים שלב 20. מערבבים היטב לדגור על הקרח במשך שעה 1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכתם תאים העכבר מדגם 800μL עם קוקטייל של נוגדנים (להלן) למיון תא FACS. מערבבים היטב לדגור על הקרח במשך שעה 1. קוקטייל נוגדנים: Hoechst, PI, CD31-FITC, CD45-FITC, Sca1-PECY7, α-7 APC שים לב: יחס אופטימלי של נוגדנים לתאי צריכות להיקבע על ידי כל אחד בנפרד titrating נוגדנים, כמו הבדלים משמעותיים עשויים להתקיים בין קבוצות. כמות אופטימלית של נוגדנים כדי לשמש צריך לבוא לידי ביטוי μgs של נוגדנים לכל 10 6 תאים היעד והמשיך קבוע בעת השימוש אצווה אותו נוגדן. ברור שאם את מספר התאים היעד אינו משתנה משמעותית בין ניסויים, או אם נפח מכתים ישתנה עם מספר תאים, דילול קבוע של נוגדן זה יכול לשמש גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפי: הוסף 1mL של כ חיץ FACS לכל אחד 9 צינורות שליטה; להוסיף 20mL של כ חיץ FACS אל הצינור המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה צינורות Eppendorf @ 3000rpm במשך 5 דקות (Eppendorf צנטריפוגות גבי ספסל, דגם: 5417C). צנטריפוגה צינור דגימה @ 1600rpm במשך 5 דקות (למעלה Eppendorf ספסל צנטריפוגות, דגם: 5810R). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב ולזרוק supernatant מכל הצינורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Resuspend במאגר FACS (1mL עבור כל אחד שולט, 4mL למדגם מיון), תאים פיפטה לתוך &quot;צינורות FACS&quot; דרך מסננת תא כובע (חתול פלקון BD # 352235, 40μm גודל הנקבוביות) כדי להסיר גושים שנותרו שעשויים להשפיע על cytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת סדרן FACS עם צבע שולט יחיד ושולט אלוטיפ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף תאים ממוינים על פי הטבלה הבאה חיץ mL 3.5 אוסף (95% DMEM, 5% FBS) בנפרד. בדרך כלל, כאשר קצירת הן הגפיים האחוריות, עכבר אחת סוג בר יכולה להניב כ 150,000 ובתאים myogenic או 100,000 ובתאים adipogenic, עם הכדאיות מעל 95%, דהיינו על ידי FACS ידי תאים ממוינים reanalyzing בסוף ההליך (איור 1 ) הגדרה של אבות myogenic ו adipogenic מבוסס על משטח מכתים <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נוגדן / כתם </td><td> אבי Myogenic (MP) </td><td> אבי Adipogenic (AP) </td></tr><tr><td> Hoechst </td><td> + </td><td> + </td></tr><tr><td> PI </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> CD31-FITC </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> CD45-FITC </td><td&gt; - </td><td> - </td></tr><tr><td> Sca1-PECY7 </td><td> - </td><td> + </td></tr><tr><td> α-7 APC </td><td> + </td><td> - </td></tr></tbody></table></li></ol> 4. השתלה: <ol start="28" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה תאים ממוינים @ 1500rpm במשך 5 דקות, להסיר את התאים supernatant ולהעביר autoclaved Eppendorf צינורות (1.5 מ&quot;ל), לשטוף עם תאים μL של 500 סטרילי PBS (נסיוב בחינם!), ואז צנטריפוגות @ 3000rpm במשך 5 דקות. שמירה על כל ריאגנטים בתנאים סטריליים ולעבוד במנדף בתרבית רקמה, resuspend אבות myogenic ב-PBS, או אבי adipogenic ב Matrigel (חתול BD # 354234) על כ 10 6 תאים / מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתלות או אבי אבות myogenic adipogenic לעכברים הנמען. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטשטש את העכבר עם isoflouran פי מדיניות המוסד שלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את השיער סביב איזור ההזרקה, ולאחר מכן לחטא את העור על ידי שפשוף עם אתנול 70% </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 20μL של אבות myogenic או אבות adipogenic (= 20k תאים) באמצעות 3 / 10 מזרק אינסולין CC (חתול BD # 309300). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר זמן מתאים (שלושה שבועות עובד היטב, אבל הבעת myofibers התורם הנגזרות סמנים מהונדס הם בדרך כלל מאליה בתוך שבוע לאחר ההשתלה), לטשטש את העכברים הנמען משלב 29 בזריקה intraperitoneal של 400 Avertin μL (חתול Sigma # T04840-2, 25 מ&quot;ג / מ&quot;ל), אנקב transcardially עם 50 מ&quot;ל PBS (מכיל 10 מיקרומטר של EDTA) הראשון, ואחריו 15 מ&quot;ל של PFA 4%. איסוף רקמות היעד, שלאחר לתקן עם PFA 4% בין לילה, אם נדרש, ואז להעביר סוכרוז 20% בין לילה. שבץ להקפיא, אוקטובר ו cryosection. </li></ol> 5. נציג תוצאות: כאשר חבר פרלמנט מושתלים לתוך השריר שלד העכבר, הם בקלות עם הפתיל קיימים myofibers. לכן כל תווית גנטי הנוכחית בתאי התורם יהיה להבחין בקלות הסיבים כי קיבל אותם. תרשים 2 מציג דוגמה שבה הביע את התאים המושתלים phostphatase אלקליין בני האדם, גילו histochemically. כאשר AP מושתלים התוצאה היא תלויה מאוד בסביבה של אתר ההשתלה: כאשר המושתלים מתחת לעור תאים אלו כדי לתת מקורות adipocytes ו myofibroblasts (ראה איור 2). באתרים רבים אחרים, כולל שרירים, הם אינם שורדים אלא ניוון שומן כבר המושרה 3. <img src="/files/ftp_upload/2476/2476fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. מיון אסטרטגיה לבידוד של אוכלוסיות אבי מן שרירי השלד (א) אסטרטגיה מיון:. תאים חיים זוהו המבוססת על פיזור קדימה פיזור לוואי. מכתים Hoechst שימש להוציא פסולת anuclear ו יודיד propidium (PI) מכתים להוציא תאים מתים. Hematopoietic (CD45) לבין האנדותל (CD31) תאים הוצאו משערי מיון. Α7 Hoechst + + PI - CD45 - CD31 - Scal - משנה זה מכיל את כל אבות myogenic (MP). + + Scal Hoechst לצרכן - CD45 - CD31 - α7 - האוכלוסייה כוללת אבות adipogenic (AP). (ב) Fluorescence מינוס אחד (FMO) שולטת אלוטיפ לאשר את הספציפיות של הכתם. (ג) טוהר בדיקות של תת MP ו AP לאחר מיון. <img src="/files/ftp_upload/2476/2476fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. תוצאות נציג הבאים MP ו AP השתלה. AP הושתלו תת עורי (פאנל עליון) MP לתוך שריר (הפאנל התחתון). בשני המקרים, תאים התורם שמקורה עכבר מהונדס המבטא phosphatase אלקליין אדם, שזוהה על ידי מכתימה את החום.

<ol>
	<li>Buckingham, M., Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+stem+cells.">Skeletal muscle stem cells.</a> Curr Opin Genet Dev. 18, 330-336 (2008).</li><li>Relaix, F., Marcelle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+stem+cells.">Muscle stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 21, 748-753 (2009).</li><li>Joe, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+injury+activates+resident+fibro/adipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis.">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li><li>Natarajan, A., Lemos, D. R., Rossi, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibro/adipogenic+progenitors:+A+double-edged+sword+in+skeletal+muscle+regeneration.">Fibro/adipogenic progenitors: A double-edged sword in skeletal muscle regeneration.</a> Cell Cycle. 9, (2010).</li><li>Sherwood, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+adult+mouse+myogenic+progenitors:+functional+heterogeneity+of+cells+within+and+engrafting+skeletal+muscle.">Isolation of adult mouse myogenic progenitors: functional heterogeneity of cells within and engrafting skeletal muscle.</a> Cell. 119, 543-554 (2004).</li><li>Sacco, A., Doyonnas, R., Kraft, P., Vitorovic, S., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewal+and+expansion+of+single+transplanted+muscle+stem+cells.">Self-renewal and expansion of single transplanted muscle stem cells.</a> Nature. , (2008).</li><li>Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+isolation+of+satellite+cells+for+skeletal+muscle+regeneration.">Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration.</a> Science. 309, 2064-2067 (2005).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

מטרת פרוטוקול זה היא איזון סביר בין תשואות גבוהות כדאיות גבוהה של תאים מטוהרים. השלב הקריטי ביותר להבטיח כי תאים בריאים הם התאוששו הוא, כצפוי, ניתוק האנזימטית של רקמת המוצא. הטיפול של הרקמה צריך להיות עדין במיוחד, אשר קשה להוכיח או להעריך אפילו בפורמט אורקולי. גורם המפתח הוא אורך ההליך. ככל שנדרש כדי לצאת מן התורם אל החיה הנמען, התחתון את הכדאיות, ולכן את היעילות engraftment. אם יש איזו שאלה לגבי כדאיות שלא ענה מיד על ידי הסתכלות תדירות האירוע לצרכן חיובי דגימות תאים מטוהרים לאחר מיון, אנו ממליצים כי assay דילול הגבלת למדוד clonogenicity מבוצעת 3. מיני טיפוסיות מן השריר ניזוק באופן שגרתי התשואה על 1 ב 15-20 תאים המסוגלים ליזום מושבות myogenic או fibro / adipogenic במבחנה. בעוד למעשה 100% במושבות יזם של חברי פרלמנט להכיל myotubes הבדיל, רק כשליש מושבות המתקבל FAPs מכילים adipocytes בנוסף חלקה אקטין myofibroblasts שריר חיובית.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> תגובות </th></tr><tr><td> Collagenase II </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> C-6885, </td><td> 500 u / ml </td></tr><tr><td> Collagenase D </td><td> רוש </td><td> 11088882001 </td><td> 1.5 u / ml </td></tr><tr><td> לעקור II </td><td> רוש </td><td> 04942078001 </td><td> 2.4 u / ml </td></tr><tr><td> תא מסננת </td><td> BD </td><td> 352340 </td><td> 40 מיקרומטר </td></tr><tr><td> Tube עם מסננת תא </td><td> BD </td><td> 352235 </td><td> 40 מיקרומטר </td></tr><tr><td> Hoechst33342 </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> B2261 </td><td> 2-5 UG / ml </td></tr><tr><td> CD31-FITC </td><td> Ebiosciences </td><td> 11-0311-85 </td><td> Clone 390 </td></tr><tr><td> CD45-FITC </td><td> תוצרת בית </td><td></td><td> Clone I3 / 2 </td></tr><tr><td> Sca1-PECY7 </td><td> Ebiosciences </td><td> 25-5981-82 </td><td> Clone D7 </td></tr><tr><td> α-7 integrin APC </td><td> תוצרת בית </td><td> תחקור עם רוסי מעבדה </td><td> R2F2 </td></tr></tbody></table>

purification of progenitors from skeletal muscle

שריר השלד מכיל אוכלוסיות מרובות אבי ממוצא עובריים ברורים הפוטנציאל ההתפתחותי. אבות Myogenic, בדרך כלל תושבי &quot;העמדה תא הלוויין&quot; בין הממברנה myofiber פלזמה הממברנה laminin עשיר במרתף ensheaths זה, הן עצמית חידוש התאים מחויבים אך ורק 1,2 את השושלת myogenic. תיארנו לאחרונה מדרגה שנייה של אבות כלי קשורה כי ניתן להפיק myofibroblasts ו adipocytes לבן, אשר מגיב נזק על ידי הפצת ביעילות הכניסה ומספקת תמיכה trophic לתאי myogenic במהלך התחדשות רקמות 3,4. אחת מבחני האמינים ביותר לקבוע את הפוטנציאל ההתפתחותי ועל ההתחדשות של האוכלוסייה תא נתון מסתמך על הבידוד שלהם השתלת 5-7. לשם כך יש לנו אופטימיזציה פרוטוקולים לטיהור שלהם על ידי cytometry לזרום שריר ניתק enzymatically, אשר נתאר במאמר זה. האוכלוסיות שהושגו בשיטה זו תכלול גם תאים המושבה myogenic או fibro / adipogenic יוצרים: אין סוגי תאים אחרים ומסוגלים להרחיב במבחנה או לשרוד במשלוח vivo. עם זאת, כאשר אוכלוסיות אלו משמשים מיד לאחר למיין את ניתוח מולקולרי (למשל qRT-PCR) יש לזכור כי תת מיון טרי עשוי להכיל תאים מזהמים אחרים כי חוסר היכולת של יוצרים מושבות או engrafting הנמענים.

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Progenitors from Skeletal Muscle at JoVE.com

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

שיטת ניתוק האנזימטית, תיוג משטח וטיהור על ידי cytometry זרימה של fibro / adipogenic ואת אבות myogenic מן שרירי השלד Murine.

טיהור אבות מן שרירי השלד

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Research

JoVE Journal

Biology

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

למבוגרים עובריים שרירי השלד Microexplant התרבות בידוד בתאי גזע שרירי השלד

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

בידוד מיטוכונדריאלי של שריר השלד

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

הקרינה מבוסס מדידה הכניסה חנות המופעל הסידן בתאים חיים: מתא הסרטן תרבותי כדי סיב שריר שלד

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

פגיעת הליזר הביא על שריר שלד עוברי דג זברה

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

בידוד ותרבות של Myofibers פרט ותאי הלווין שלהם משרירי שלד למבוגרים

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

בידוד של דם המופק מכולים multipotent מבשרים משרירי שלד אדם

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

בידוד של המיטוכונדריה מכמויות מינימליות של שרירי שלד עכבר למדידות תפוקה גבוהה microplate נשימה

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements

בידוד של המיטוכונדריה ללא פגע מן שרירי השלד על ידי דיפרנציאל צנטריפוגה מדידות Respirometry ברזולוציה גבוהה

Mitochondria are involved in cellular energy metabolism and use oxygen to produce energy in the form of adenosine triphosphate (ATP). Differential ...

Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts

בידוד ואפיון אקסוזומים מפיברובלסטים של שרירי השלד

Exosomes are small extracellular vesicles released by virtually all cells and secreted in all biological fluids. Many methods have been developed for the ...

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors (FAPs) and Myogenic Progenitors (MPs) in Skeletal Muscle in the Rat

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors FAPs and Myogenic Progenitors MPs in Skeletal Muscle in the Rat

זיהוי, בידוד ואפיון של אבות פיברו-אדיפוגניים (FAPs) ואבעות מיוגניים (חברי פרלמנט) בשריר השלד בחולדה

Fibro-adipogenic Progenitors (FAPs) are resident interstitial cells in skeletal muscle that, together with myogenic progenitors (MPs), play a key role in ...