Name: purification of progenitors from skeletal muscle
Uploaded: 2011-03-16T13:00:00
Duration: 12 min 55 s
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	<li>Buckingham, M., Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+stem+cells.">Skeletal muscle stem cells.</a> Curr Opin Genet Dev. 18, 330-336 (2008).</li><li>Relaix, F., Marcelle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+stem+cells.">Muscle stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 21, 748-753 (2009).</li><li>Joe, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+injury+activates+resident+fibro/adipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis.">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li><li>Natarajan, A., Lemos, D. R., Rossi, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibro/adipogenic+progenitors:+A+double-edged+sword+in+skeletal+muscle+regeneration.">Fibro/adipogenic progenitors: A double-edged sword in skeletal muscle regeneration.</a> Cell Cycle. 9, (2010).</li><li>Sherwood, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+adult+mouse+myogenic+progenitors:+functional+heterogeneity+of+cells+within+and+engrafting+skeletal+muscle.">Isolation of adult mouse myogenic progenitors: functional heterogeneity of cells within and engrafting skeletal muscle.</a> Cell. 119, 543-554 (2004).</li><li>Sacco, A., Doyonnas, R., Kraft, P., Vitorovic, S., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewal+and+expansion+of+single+transplanted+muscle+stem+cells.">Self-renewal and expansion of single transplanted muscle stem cells.</a> Nature. , (2008).</li><li>Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+isolation+of+satellite+cells+for+skeletal+muscle+regeneration.">Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration.</a> Science. 309, 2064-2067 (2005).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

इस प्रोटोकॉल के लक्ष्य के लिए उच्च पैदावार और शुद्ध कोशिकाओं की उच्च व्यवहार्यता के बीच एक उचित संतुलन है. सुनिश्चित करना है कि स्वस्थ कोशिकाओं को बरामद कर रहे हैं में सबसे महत्वपूर्ण कदम है, जाहिर है, शुरू ऊतक के enzymatic पृथक्करण. ऊतक की हैंडलिंग विशेष रूप से कोमल है, जो प्रदर्शित करने के लिए या एक audiovisual प्रारूप में भी सराहना करते हैं करने के लिए कठिन है चाहिए. एक अन्य महत्वपूर्ण कारक प्रक्रिया की लंबाई है. अब यह दाता से प्राप्तकर्ता जानवर के लिए जाना जाता है, कम व्यवहार्यता और इसलिए, engraftment दक्षता. वहाँ व्यवहार्यता कि PI छँटाई के बाद शुद्ध सेल के नमूनों में सकारात्मक घटना की आवृत्ति में देखकर तुरंत जवाब नहीं है के बारे में कोई प्रश्न हो सकता है, तो हमारा सुझाव है कि एक सीमित कमजोर पड़ने clonogenicity को मापने परख 3 प्रदर्शन किया है . Undamaged मांसपेशियों से विशिष्ट प्रकार के नियमित रूप से 15-20 कोशिकाओं में इन विट्रो में myogenic / या fibro adipogenic कालोनियों की शुरुआत की सक्षम के बारे में 1 उपज. जबकि सांसदों से शुरू कालोनियों की अनिवार्य रूप से 100% विभेदित myotubes होते हैं, FAPs से प्राप्त कालोनियों के बारे में केवल एक तिहाई चिकनी पेशी actin सकारात्मक myofibroblasts के अलावा adipocytes होते हैं.

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियाँ </th></tr><tr><td> Collagenase द्वितीय </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> सी 6885, </td><td> 500 / u मिली </td></tr><tr><td> Collagenase डी </td><td> रॉश </td><td> 11088882001 </td><td> 1.5 / u मिली </td></tr><tr><td> द्वितीय विस्थापित </td><td> रॉश </td><td> 04942078001 </td><td> 2.4 यू / मिलीलीटर </td></tr><tr><td> सेल झरनी </td><td> BD </td><td> 352340 </td><td> 40 सुक्ष्ममापी </td></tr><tr><td> सेल झरनी के साथ ट्यूब </td><td> BD </td><td> 352235 </td><td> 40 सुक्ष्ममापी </td></tr><tr><td> Hoechst33342 </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> B2261 </td><td> 2-5 स्नातकीय / मिलीलीटर </td></tr><tr><td> CD31-FITC </td><td> Ebiosciences </td><td> 11-0311-85 </td><td> 390 क्लोन </td></tr><tr><td> CD45-FITC </td><td> घर में निर्मित </td><td></td><td> क्लोन I3 / 2 </td></tr><tr><td> Sca1 - PECY7 </td><td> Ebiosciences </td><td> 25-5981-82 </td><td> क्लोन D7 </td></tr><tr><td> α-7 integrin APC </td><td> घर में निर्मित </td><td> रॉसी प्रयोगशाला के साथ पूछताछ </td><td> R2F2 </td></tr></tbody></table>

purification of progenitors from skeletal muscle

कंकाल की मांसपेशी अलग भ्रूण मूल और विकास क्षमता के कई पूर्वज आबादी शामिल हैं. Myogenic progenitors, आमतौर पर myofiber प्लाज्मा झिल्ली और laminin अमीर तहखाने झिल्ली है कि यह ensheaths के बीच एक उपग्रह सेल की स्थिति में रहने वाले, स्वयं renewing कोशिकाओं है कि केवल myogenic वंश 1,2 करने के लिए प्रतिबद्ध हैं. हमने हाल ही में पोत जुड़े progenitors कि myofibroblasts और सफेद adipocytes, जो कुशलता प्रसार दर्ज करके क्षति जवाब है और myogenic कोशिकाओं ऊतक पुनर्जनन 3,4 दौरान पौष्टिकता समर्थन प्रदान करता है उत्पन्न कर सकते हैं की एक द्वितीय श्रेणी का वर्णन किया है. सबसे भरोसेमंद assays के लिए एक दिया सेल की आबादी का विकास और पुनर्योजी क्षमता का निर्धारण उनके अलगाव और 5-7 प्रत्यारोपण पर निर्भर करता है . यह अंत करने के लिए हम enzymatically dissociated मांसपेशियों से प्रवाह cytometry, जो हम इस लेख में की रूपरेखा तैयार करेंगे द्वारा उनकी शुद्धि के लिए प्रोटोकॉल अनुकूलित है. इस पद्धति का उपयोग करके प्राप्त की आबादी या तो myogenic या fibro / adipogenic कॉलोनी कोशिकाओं के गठन में शामिल होंगे: कोई अन्य कोशिका प्रकार इन विट्रो में vivo वितरण में विस्तार या जीवित करने में सक्षम हैं. हालांकि, जब इन आबादी आणविक विश्लेषण (जैसे QRT-पीसीआर) एक ध्यान में रखना है कि हौसले से सॉर्ट किया गया सबसेट अन्य contaminant कोशिकाओं है कि कालोनियों बनाने या engrafting प्राप्तकर्ताओं की क्षमता की कमी शामिल कर सकते हैं चाहिए के लिए तरह के बाद तुरंत इस्तेमाल किया जाता है.

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Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Enzymatic पृथक्करण, सतह और fibro / adipogenic और murine कंकाल की मांसपेशी से myogenic progenitors के प्रवाह cytometry द्वारा लेबलिंग शुद्धि के लिए विधि.

कंकाल की मांसपेशी से progenitors के शोधन

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Research

JoVE Journal

Biology

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

वयस्क और भ्रूण के कंकाल की मांसपेशी Microexplant संस्कृति और कंकाल की मांसपेशी स्टेम सेल के अलगाव

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

कंकाल की मांसपेशी से Mitochondrial अलगाव

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

स्टोर संचालित जीवित कोशिकाओं में कैल्शियम प्रविष्टि प्रतिदीप्ति आधारित मापन संवर्धित सेल कैंसर से कंकाल की मांसपेशी फाइबर

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

लेजर प्रवृत्त Zebrafish भ्रूण कंकाल की मांसपेशी की चोट

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

अलगाव और व्यक्तिगत और वयस्क कंकाल की मांसपेशी से myofibers अपने उपग्रह कोशिकाओं की संस्कृति

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

मानव कंकाल की मांसपेशी से रक्त वाहिका व्युत्पन्न multipotent व्यापारियों का अलगाव

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

उच्च Throughput Microplate श्वसन माप के लिए माउस कंकाल की मांसपेशी की कम मात्रा से माइटोकॉन्ड्रिया के अलगाव

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements

उच्च संकल्प Respirometry माप के लिए अंतर centrifugation द्वारा कंकाल की मांसपेशी से बरकरार माइटोकॉन्ड्रिया के अलगाव

Mitochondria are involved in cellular energy metabolism and use oxygen to produce energy in the form of adenosine triphosphate (ATP). Differential ...

Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts

कंकाल की मांसपेशी फाइब्रोब्लास्ट से एक्सोसोम का अलगाव और लक्षण वर्णन

Exosomes are small extracellular vesicles released by virtually all cells and secreted in all biological fluids. Many methods have been developed for the ...

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors (FAPs) and Myogenic Progenitors (MPs) in Skeletal Muscle in the Rat

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors FAPs and Myogenic Progenitors MPs in Skeletal Muscle in the Rat

चूहे में कंकाल मांसपेशी में फाइब्रो-एडिपोजेनिक प्रोजेनिटर्स (एफएपी) और मायोजेनिक प्रोजेनिटर्स (सांसदों) की पहचान, अलगाव और लक्षण वर्णन

Fibro-adipogenic Progenitors (FAPs) are resident interstitial cells in skeletal muscle that, together with myogenic progenitors (MPs), play a key role in ...