Name: purification of progenitors from skeletal muscle
Uploaded: 2011-03-16T13:00:00
Duration: 12 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Progenitors from Skeletal Muscle at JoVE.com

<ol>
	<li>Buckingham, M., Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+stem+cells.">Skeletal muscle stem cells.</a> Curr Opin Genet Dev. 18, 330-336 (2008).</li><li>Relaix, F., Marcelle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+stem+cells.">Muscle stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 21, 748-753 (2009).</li><li>Joe, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+injury+activates+resident+fibro/adipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis.">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li><li>Natarajan, A., Lemos, D. R., Rossi, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibro/adipogenic+progenitors:+A+double-edged+sword+in+skeletal+muscle+regeneration.">Fibro/adipogenic progenitors: A double-edged sword in skeletal muscle regeneration.</a> Cell Cycle. 9, (2010).</li><li>Sherwood, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+adult+mouse+myogenic+progenitors:+functional+heterogeneity+of+cells+within+and+engrafting+skeletal+muscle.">Isolation of adult mouse myogenic progenitors: functional heterogeneity of cells within and engrafting skeletal muscle.</a> Cell. 119, 543-554 (2004).</li><li>Sacco, A., Doyonnas, R., Kraft, P., Vitorovic, S., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewal+and+expansion+of+single+transplanted+muscle+stem+cells.">Self-renewal and expansion of single transplanted muscle stem cells.</a> Nature. , (2008).</li><li>Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+isolation+of+satellite+cells+for+skeletal+muscle+regeneration.">Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration.</a> Science. 309, 2064-2067 (2005).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Целью этого протокола является разумный баланс между высокой урожайностью и высокой жизнеспособности очищенные клетки. Наиболее важным шагом в обеспечении того, чтобы здоровые клетки восстанавливаются является, как ожидается, ферментативной диссоциации начиная ткани. Обработка ткани должны быть особенно нежными, которое трудно доказать или оценить даже в аудиовизуальном формате. Другим ключевым фактором является длина процедуры. Больше времени требуется, чтобы перейти от донора до реципиента животное, тем ниже жизнеспособность и поэтому приживления эффективности. В случае возникновения вопроса о жизнеспособности, что не сразу ответил, глядя на частоте П. И. положительным событием в очищенных образцов ячейки после сортировки, мы полагаем, что анализ предельного разбавления для измерения clonogenicity осуществляется 3. Типичные виды из неповрежденной мышцы обычно выход у 1 из 15-20 клеток, способных инициировать миогенной или фиброзно / адипогенной колоний в пробирке. Хотя по существу, 100% от колонии инициированы депутатами содержат дифференцированные myotubes, только около одной трети колоний получены из ФАП содержат жировых клеток в дополнение к гладкой мускулатуре актина положительные миофибробластов.

<table border="1"><tbody><tr><th> Название реагента </th><th> Компания </th><th> Номер в каталоге </th><th> Комментарии </th></tr><tr><td> Коллагеназы II </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C-6885, </td><td> 500 ед / мл </td></tr><tr><td> Коллагеназа D </td><td> Roche </td><td> 11088882001 </td><td> 1,5 Ед / мл </td></tr><tr><td> Свернуть II </td><td> Roche </td><td> 04942078001 </td><td> 2,4 Ед / мл </td></tr><tr><td> ячейки фильтра </td><td> BD </td><td> 352340 </td><td> 40 мкм </td></tr><tr><td> Труба с сотовыми фильтр </td><td> BD </td><td> 352235 </td><td> 40 мкм </td></tr><tr><td> Hoechst33342 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B2261 </td><td> 2-5 мкг / мл </td></tr><tr><td> CD31-FITC </td><td> Ebiosciences </td><td> 11-0311-85 </td><td> Клон 390 </td></tr><tr><td> CD45-FITC </td><td> Домашний </td><td></td><td> Клон I3 / 2 </td></tr><tr><td> SCA1-PECY7 </td><td> Ebiosciences </td><td> 25-5981-82 </td><td> Клон D7 </td></tr><tr><td> α-7 интегрин APC </td><td> Домашний </td><td> Запрос с Росси лаборатории </td><td> R2F2 </td></tr></tbody></table>

purification of progenitors from skeletal muscle

Скелетная мышца состоит из нескольких популяций предшественников различных эмбрионального происхождения и потенциала развития. Миогенный прародителей, как правило, проживающих в &quot;спутниковые позиции ячейки&quot; между мембраной myofiber плазмы и ламинин богатых базальной мембраны, что ensheaths это, говорят сами за себя обновление клеток, которые являются исключительно привержены миогенной 1,2 линии. Мы недавно описал второго класса судна связанные прародителей, которые могут генерировать миофибробластов и белых адипоцитов, который реагирует на повреждения за счет эффективного ввода пролиферацию и обеспечивает трофическую поддержку миогенной клеток в процессе регенерации тканей 3,4. Один из самых надежных тестов, чтобы определить области развития и регенеративный потенциал данной популяции клеток зависит от их изоляции и трансплантации 5-7. С этой целью мы оптимизировали протоколов для их очистки с помощью проточной цитометрии из ферментативно диссоциированных мышцы, которые мы будем наброски в этой статье. Популяций полученные с помощью этого метода будет содержать либо миогенной или фиброзно / адипогенной колониеобразующих клеток: никаких других типов клеток, которые способны расширять в пробирке или выживания в естественных условиях доставки. Однако, когда эти группы населения используются сразу после сортировки для молекулярного анализа (например, QRT-PCR) необходимо иметь в виду, что только что сортируются подмножества может содержать и другие загрязнения клетки, которые не имеют возможности формирования колоний или прививка получателей.

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Progenitors from Skeletal Muscle at JoVE.com

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Метод ферментативной диссоциации, маркировка поверхности и очистки с помощью проточной цитометрии фиброзно / адипогенной и миогенной прародителей из мышиных скелетных мышцах.

Очистка прародителей из скелетных мышц

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Research

JoVE Journal

Biology

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Взрослые и эмбриональные скелетных мышц Microexplant культуры и выделение скелетных мышц стволовых клеток

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

Митохондриальная Изоляция от скелетных мышц

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Флуоресценции на основе измерения магазин управлением поступления кальция в живых клетках: от искусственного раковых клеток в скелетных мышечных волокон

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

Лазерная нанесенные травмы рыбок данио эмбриональных скелетных мышц

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Выделение и культура Индивидуальные мышечных волокон и их сателлитные клетки от взрослых скелетных мышц

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

Выделение кровеносных сосудов, полученных мультипотентные прекурсоров от человека скелетных мышц

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

Выделение митохондрий из минимальных количествах мыши скелетных мышц для измерения Высокая пропускная микропланшетов дыхания

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements

Выделение неповрежденном Митохондрии из скелетных мышц с помощью дифференциального центрифугирования для измерения респирометрии высокого разрешения

Mitochondria are involved in cellular energy metabolism and use oxygen to produce energy in the form of adenosine triphosphate (ATP). Differential ...

Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts

Выделение и характеристика экзосом фибробластов скелетных мышц

Exosomes are small extracellular vesicles released by virtually all cells and secreted in all biological fluids. Many methods have been developed for the ...

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors (FAPs) and Myogenic Progenitors (MPs) in Skeletal Muscle in the Rat

Identification, Isolation, and Characterization of Fibro-Adipogenic Progenitors FAPs and Myogenic Progenitors MPs in Skeletal Muscle in the Rat

Идентификация, выделение и характеристика фибро-адипогенных предшественников (ФАП) и миогенных прародителей (МП) в скелетных мышцах крыс

Fibro-adipogenic Progenitors (FAPs) are resident interstitial cells in skeletal muscle that, together with myogenic progenitors (MPs), play a key role in ...