Name: localizing protein in 3d neural stem cell culture: a hybrid visualization methodology
Uploaded: 2010-12-19T18:00:00
Duration: 21 min 47 s
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我们感谢专家在视频制作和编辑，马特库克协助数据收集技术援助埃文Dysart和马克莱昂纳尔和萨拉专家社论援助格尔巴德。这项工作是由从加拿大健康研究研究所（CIHR，澳门币62626）SALB，在卫生研究项目资助战略培训计划SALB和SF（CIHR在神经退行性Lipidomics培训计划，TGF 9121），和基础设施运营赠款从加拿大创新基金会和安大略省创新信托到SF的支持。司收到在安大略省科学技术研究生奖学金帕金森研究协会的贡献。 NV接收到一个老龄化研究所和专业奖学金的神经退行性Lipidomics CIHR培训计划。我们非常感谢由AutoDesk公司研究提供的教育软件和技术支持。

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	<li>Kempermann, G., Jessberger, S., Steiner, B., Kronenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milestones+of+neuronal+development+in+the+adult+hippocampus.">Milestones of neuronal development in the adult hippocampus.</a> Trends Neurosci. 27, 447-452 (2004).</li><li>Campos, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurospheres:+insights+into+neural+stem+cell+biology.">Neurospheres: insights into neural stem cell biology.</a> J Neurosci Res. 78, 761-769 (2004).</li><li>Imbeault, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+matrix+controls+gap+junction+protein+expression+and+function+in+postnatal+hippocampal+neural+progenitor+cells.">The extracellular matrix controls gap junction protein expression and function in postnatal hippocampal neural progenitor cells.</a> BMC Neurosci. 10, 13-13 (2009).</li></ol>

对所有实验动物，在动物保健委员会渥太华大学和加拿大动物保健委员会由规定的准则和法规的规定执行。

该协议描述了一个程序，以文化和串行c​​ryosection产后海马的NPC，本地化免疫检测蛋白的表达，并最终重建和分析免疫阳性细胞在整个三维神经球的地形位置。通过结合细胞生物学文化和加工技术，显微成像（的OpenLAB，即兴创作和其他图像分析软件），图形编辑软件的能力（Adobe Photoshop的），三维动画和合成软件能力（Autodesk Maya中），我们提出了一个方法，重建整个细胞成分允许蜂窝整个神经球文化的地位和蛋白表达的忠实重建序列的二维图像的三维文化。此协议可结合登记和重建啶薄连续切片或通过较厚的连续切片，共聚焦ž栈具有同等的效力。因为单一的NPC在神经球以上的神经发生在产后脑gliogenesis过程中所观察到的许多阶段的文化概括克隆扩增，其三维结构的影响的重要全国人大代表在后代的命运的决定因素， 暴露在相同的实验环境1。血统和蛋白表达的核心和外围串行神经干节的分歧表明，多个物理因素，包括单元格的位置，机械应力和剪切力，发挥重要的作用，在调节全国人大生物学2。此外，缝隙连接蛋白的表达，分析在这里，已经显示出更改后，当NPC的3D神经球悬挂或层粘连蛋白与功能连接蛋白介导的通信的改变是否在塑料基板或3D免费培养细胞的基板上镀培养浮动文化3。蜂窝位置全国人大命运的影响仍不清楚。这在技术上是具有挑战性的，在3D的文化血统和信号蛋白的抗原性评估需要破坏的3D架构，使所有细胞的细胞通透性和抗体访问的全国生物学分析空间位置的影响。在这里，我们显示，混合的可视化方法提供了一个确定的某些蛋白质是否表现出3D的文化独特的位置本地化的手段，可用于推断和蛋白质的功能和调节神经球内区域本地化测试，以及，也许是最重要，提供了需要研究的三维地形和蜂窝定位在三维培养全国人大命运的影响定位数据。

*所有其他标准在协议中列出的化学试剂，Sigma - Aldrich公司。从Invitrogen公司的所有其他标准组织培养试剂。

localizing protein in 3d neural stem cell culture: a hybrid visualization methodology

3维（3D）影响神经干细胞和祖细胞的地形的重要性（人大）的表型是广泛承认具有挑战性的研究。当从胚胎或产后脑分离，单一的NPC将悬浮液中扩散，形成神经球。这些文化内的子细胞自发地在扩张的过程中，尽管被暴露在相同的外环境采取不同的发展谱系（神经细胞，少突胶质细胞和星形胶质细胞）。本阶段的进展概括许多观察到的神经发生在产后脑gliogenesis的过程，往往是用于在受控环境中的基本​​全国人大生物学研究。然而，评估的3D地形和蜂窝定位在全国人大命运这些文化的影响是困难的。要本地化靶蛋白和免疫细胞化学法确定的全国人民代表大会的谱系，自由浮动的神经球必须在基板上镀，或连续切片。这种处理是必需的，以确保整个球体相当于细胞通透性和抗体访问。因此，冰冻切片或三维的Z -堆叠共聚焦重建的二维啶图像，只能提供关于细胞位置的空间信息在离散的物理或数字化三维切片和不完整的领域可视化的细胞位置。在这里重申的神经球文化的地形，并允许在整个文化蛋白表达的空间分析，我们提出一个孤立的协议，扩展，和产后适合啶或焦靶蛋白的免疫检测海马神经球连续切片。 Connexin29（Cx29）为例分析。接下来，使用混合图形编辑和三维建模软件严格的应用，以保持生物的细节，我们介绍了如何重新组装这些图像的三维结构定位和数字地图内标示完整的神经干细胞。这种方法使整个3D的文化地形的靶蛋白和细胞的细胞位置的可视化和分析，将有助于一个更详细的分析，对在体外的神经发生和gliogenesis过程中细胞之间的空间关系。 Imbeault和巴伦苏埃拉同等贡献，并应考虑共同第一作者。

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Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

在这里，我们描述了如何产生，扩大，并在三维（3D）培养的immunolabel产后海马神经祖细胞（筹备）。接下来，使用混合可视化技术，我们将演示如何immunolabelled冰冻切片的数字图像，可用于重建和地图的整个3D神经球免疫阳性细胞的空间位置。

本地化的蛋白质三维神经干细胞培养：一个混合的可视化方法

The importance of 3-dimensional (3D) topography in influencing neural stem and progenitor cell (NPC) phenotype is widely acknowledged yet challenging to ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

从胚胎脊髓​​连合神经的解剖和文化

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

科研

神经科学

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

成人北极黄鼠海马神经干细胞的生长和分化

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

建立小鼠胚胎神经干细胞培养神经球含量

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

神经细胞集落形成细胞分析检测，以区分善意的神经祖细胞的神经干细胞

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

从人类毛囊神经嵴干细胞的分离和培养的

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

神经母细胞含量：从区分神经干细胞后代使用流式细胞仪，神经祖细胞的生成和富集含量

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

从小鼠胚胎神经管的神经嵴细胞的分离和培养

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

使用克隆测定神经干细胞的计数。

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

分离和成人神经干细胞的培养从鼠标Subcallosal区

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

人视网膜色素上皮细胞向大鼠眼巩膜视网膜移植精制方案的研制

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...