Name: localizing protein in 3d neural stem cell culture: a hybrid visualization methodology
Uploaded: 2010-12-19T18:00:00
Duration: 21 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology at JoVE.com

Evan Dysart ve Marc Léonard video prodüksiyon ve düzenleme, veri toplama konusunda yardım için Matt Cooke uzman teknik yardım için teşekkür eder, ve uzman yayın yardım için Sarah Gelbard. Kanada Sağlık Araştırma Enstitüsü (CIHR, MOP 62.626) SALB, Sağlık Araştırma programı hibe SALB ve SF Stratejik Eğitim Girişimi (TGF Nörodejeneratif Lipidomics CIHR Eğitim Programı, 9121) ve altyapı işletme hibeleri tarafından finanse edildi Kanada Vakfı Yenilik ve Ontario Yenilik Güven SF destek. SI Parkinson Araştırma Konsorsiyumu katkıları ile bir Ontario Bilim ve Teknoloji Yüksek Lisans Bursu aldı. NV Yaşlanma Enstitüsü ve sonrası profesyonel dostluk Nörodejeneratif Lipidomics CIHR Eğitim Programı alır. Biz minnetle AutoDesk Research tarafından sağlanan eğitim, yazılım ve teknik destek kabul etmiş sayılırsınız.

<ol>
	<li>Kempermann, G., Jessberger, S., Steiner, B., Kronenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milestones+of+neuronal+development+in+the+adult+hippocampus.">Milestones of neuronal development in the adult hippocampus.</a> Trends Neurosci. 27, 447-452 (2004).</li><li>Campos, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurospheres:+insights+into+neural+stem+cell+biology.">Neurospheres: insights into neural stem cell biology.</a> J Neurosci Res. 78, 761-769 (2004).</li><li>Imbeault, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+matrix+controls+gap+junction+protein+expression+and+function+in+postnatal+hippocampal+neural+progenitor+cells.">The extracellular matrix controls gap junction protein expression and function in postnatal hippocampal neural progenitor cells.</a> BMC Neurosci. 10, 13-13 (2009).</li></ol>

Tüm hayvanlar üzerinde yapılan deneyler, Ottawa Hayvan Bakım Komitesi Üniversitesi ve Kanada Hayvan Bakım Konseyi tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı.

Bu protokol, kültür ve seri cryosection post-natal hipokampal NPC&#39;ler, bir yordam açıklanır İmmuno protein ekspresyonu yerelleştirmeniz ve nihayet tüm 3D neurosphere içinde immünopozitif hücreleri topografik konumu yeniden ve analiz. Hücre biyolojisi kültürü ve işleme teknikleri, mikroskopi görüntüleme (openlabın, Doğaçlama ve diğer görüntü analiz yazılımları) birleştirerek, grafik düzenleme yazılımı kapasiteleri (Adobe Photoshop), 3D animasyon ve kompozisyon yazılım kapasiteleri (Autodesk Maya), biz yeniden bir metodoloji mevcut sadık bir neurosphere kültür boyunca hücresel konum ve protein ifade yeniden inşası için izin seri 2D görüntüleri 3D kültürlerin tüm hücresel bileşimi. Bu protokol, kayıt ve kalın seri bölümleri ile epifluorescent ince seri bölümleri veya konfokal Z-yığınlarının rekonstrüksiyonu eşit etkinliği ile kombine edilebilir. Çünkü doğum sonrası beyindeki nöron ve gliogenesis boyunca gözlenen birçok aşamadan neurosphere kültür özetlediği tek NPC&#39;ler klonal genişleme, 3D yapısının etkisi aynı deneysel ortam 1 ​​maruz döl önemli bir NPC kaderini belirleyici temsil eder. Seri neurosphere bölümleri, merkez ve çevre soy ve protein ekspresyonu Farklılıklar NPC biyoloji 2 düzenleyen hücre konumu, mekanik stres ve kesme kuvveti de dahil olmak üzere birden çok fiziksel faktörler önemli rol oynamaktadır. Ayrıca, Konneksin protein ekspresyonu, burada analiz NPC&#39;ler 3D süspansiyon neurospheres veya hücreleri, plastik ve yüzey veya 3D ücretsiz kültür olup olmadığını değişmiş fonksiyonel Konneksin aracılı iletişim laminin substrat kaplama olarak kültüre bağlı olarak değişiklik gösterilmiştir kayan kültürler 3. NPC kaderi hücresel pozisyon etkisi belirsizliğini korumaktadır. Bu teknik, soy ve sinyalizasyon proteinler antijenik değerlendirme 3D mimarisi bozulması hücre permeabilization ve tüm hücrelerin antikor erişimi sağlamak için ihtiyaç duyduğu verilen NPC biyoloji 3D kültür içinde mekansal konumu etkisini analiz etmek zordur. Burada, biz melez bir görselleştirme metodoloji bazı proteinler, benzersiz 3D kültür pozisyonel lokalizasyonu sergi olup olmadığını belirleyen bir vasıta olduğunu, belki de en önemlisi, bölgesel lokalizasyon açısından neurosphere içinde protein fonksiyonu ve düzenleme anlaması ve test etmek için kullanılır, ve olabilir 3D topografya ve hücresel konumlandırma 3D kültür NPC kaderi üzerindeki etkilerini incelemek için gerekli olan konumsal veri sağlar.

* Protokol listelenen tüm diğer standart kimyasal reaktifler Sigma-Aldrich. Diğer tüm standart doku kültürü reaktifler Invitrogen.

localizing protein in 3d neural stem cell culture: a hybrid visualization methodology

Nöral kök ve progenitör hücre etkileyen 3 boyutlu (3D) topografyanın önemi (NPC) fenotipi yaygın henüz çalışmaya zorlu kabul edilmektedir. Embriyonik veya doğum sonrası beyin ne zaman ayrışmış, tek NPC&#39;ler neurospheres formu askıya çoğalacak. Bu kültürlerin içinde kızı hücreleri aynı ekstrasellüler ortam maruz olmasına rağmen kendiliğinden genişleme içerisinde farklı gelişim soyları (nöronlar, oligodendrosit ve astrositler) benimsemek. Bu ilerlemesini özetlediği aşamaları çoğu doğum sonrası beyindeki nöron ve gliogenesis boyunca gözlenen ve kontrollü bir ortam içinde temel NPC biyoloji okumak için sık sık kullanılır. NPC kaderi bu kültürlerin içinde 3D topografya ve hücresel konumlandırma tam etkisini değerlendiren Ancak, zordur. Hedef proteinler lokalize ve immünhistokimya ile NPC soy belirlemek için, serbest neurospheres bir substrat üzerindeki kaplama veya seri kesitli olmalıdır. Bu işleme eşdeğer hücre permeabilization ve küreden antikor erişim sağlamak için gereklidir. Sonuç olarak, cryosections veya 3D Z-yığınlarının konfokal rekonstrüksiyonlar epifluorescent 2D görüntüleri sadece mekansal ayrık fiziksel veya dijital 3D dilimleri içinde hücre konumu hakkında bilgi verebilir ve bozulmamış bir alanda hücresel konum görselleştirmek yok. Burada neurosphere kültür topografya yinelemek ve tüm kültür boyunca protein ekspresyonu mekansal analizi izin verecek, biz bir protokol izolasyonu için, genişleme ve hedef proteinlerin epifluorescent veya konfokal İmmuno için uygun doğum sonrası hipokampal neurospheres seri kesit sunuyoruz. Connexin29 (Cx29) bir örnek olarak analiz edilir. Sonra, grafik düzenleme ve 3D modelleme bir melez kullanarak biyolojik detay titizlikle korumak için uygulanan yazılımları, bu görüntülerin 3 boyutlu yapısal konumlandırma yeniden birleştirmek ve dijital olarak tam neurosphere içinde etiketli hücreler haritası nasıl açıklar. Bu metodoloji, tüm 3D kültür topoğrafya boyunca hedef proteinleri ve hücreleri hücresel pozisyon görselleştirme ve analiz sağlar ve daha ayrıntılı bir analizi, in vitro nöron ve gliogenesis boyunca hücreleri arasındaki mekansal ilişkileri kolaylaştıracaktır. Imbeault ve Valenzuela Her ikisi de eşit derecede katkıda bulunan ve ilk yazarın ortak düşünülmelidir.

Watch this Scientific Journal Video about Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology at JoVE.com

Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

Burada, üç boyutlu (3D) kültür üretmek genişletmek ve immunolabel postnatal hipokampal nöral progenitör hücrelerin (NPC) nasıl açıklar. Sonra, hibrid görselleştirme teknolojiler kullanılarak, dijital görüntüler immunolabelled cryosections tüm 3D neurosphere boyunca immünopozitif hücreler mekansal konumunu yeniden ve harita için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

3D Nöral Kök Hücre Kültürü yerelleştirme Protein: Hybrid Görselleştirme Metodolojisi

The importance of 3-dimensional (3D) topography in influencing neural stem and progenitor cell (NPC) phenotype is widely acknowledged yet challenging to ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Embriyonik Omurilik Commissural Nöronlar Diseksiyon ve Kültür

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

Yetişkin Hipokampal Arctic Zemin Sincap Nöral Kök Hücre Büyüme ve Farklılaşma

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Hücre Testi Şekillendirme Sinir-Koloni: Sinir Progenitör Hücreler Bona Fide Sinir Kök Hücreler Ayırım Bir Testi

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

İnsan Saç köklerinin arasından Sinir Crest Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Neuroblast Test: Akım Sitometri Kullanımı Farklılaşan Nöral Kök Hücre Döl nöronal Progenitör Hücrelerinin üretilmesi ve zenginleştirilmesi için bir Testi

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Nöral Kök Hücre Sayım klonal Tahliller Kullanma

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Fare Subcallosal Zone İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kök Hücre Kültürü

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

Sıçan gözlerinin içine insan retina Pigment epitel hücrelerinin Trans-scleral Subretinal nakli için rafine bir protokol geliştirilmesi

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...