Name: loading drosophila nerve terminals with calcium indicators
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00
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<ol><li> Wählen Sie eine saubere Präparation Gericht, das nicht an Fixiermittel ausgesetzt wurde. </li><li> Dissect ein wandernder 3 rd instar Drosophila Larve in Schneiders Drosophila Medium mit Ca 2 + und L-Glutamin, (nicht schneiden alle Nerven oder Schäden Muskelfasern Nr. 7, 6, 13 oder 12). </li><li> Wählen Sie ein Glas füllen-Pipette mit einer 12 Mikrometer Spitze (Innendurchmesser). </li><li> Mit einer Spritze und Schlauch (Unterdruck an die Pipette gelten) sicherzustellen, d...

<ol>
	<li>Macleod, G. T., Hegstrom-Wojtowicz, M., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+calcium+signals+in+Drosophila+motor+neuron+terminals.">Fast calcium signals in Drosophila motor neuron terminals.</a> J. Neurophysiol. 88, 2659-2663 (2002).</li><li>Macleod, G. T., Suster, M. L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+neuron+activity+in+the+Drosophila+larval+CNS+detected+with+calcium+indicators.">Single neuron activity in the Drosophila larval CNS detected with calcium indicators.</a> J. Neurosci. Methods. 127, 167-178 (2003).</li><li>Macleod, G. T., Marin, L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+vesicles:+test+for+a+role+in+presynaptic+calcium+regulation.">Synaptic vesicles: test for a role in presynaptic calcium regulation.</a> J. Neurosci. 24, 2496-2505 (2004).</li><li>Reiff, D. F., Thiel, P. R., Schuster, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+active+zone+density+during+long-term+strengthening+of+Drosophila+neuromuscular+junctions.">Differential regulation of active zone density during long-term strengthening of Drosophila neuromuscular junctions.</a> J. Neurosci. 22, 9399-9409 (2002).</li><li>Reiff, D. F., Ihring, A., Guerrero, G., Isacoff, E. Y., Joesch, M., Nakai, J., Borst, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+performance+of+genetically+encoded+indicators+of+neural+activity+in+flies.">In vivo performance of genetically encoded indicators of neural activity in flies.</a> J. Neurosci. 25, 4766-4778 (2005).</li></ol>

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		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
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		<tbody>
		
<tr>
<td>Schneider&#x2019;s Insect Medium</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>S0146</td>
<td>must contain L-glutamine and calcium</td>
</tr>
<tr>
<td>L-glutamic acid monosodium salt hydrate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1626</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
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loading drosophila nerve terminals with calcium indicators

Calcium spielt viele Rollen im Nervensystem aber keiner eindrucksvoller als als Auslöser für die Freisetzung von Neurotransmittern, und niemand tiefer als wie der Bote essentiell für die synaptische Plastizität, dass Lernen und Gedächtnis unterstützt. Zur weiteren Aufklärung der molekularen Grundlagen der Ca 2 +-abhängige synaptische Mechanismen, ist ein Modell-System benötigt, das sowohl genetisch formbar und physiologisch zugänglich. Drosophila melanogaster bietet ein solches Modell. In diesem System sind genetisch kodierte fluoreszierende Indikatoren zur Verfügung Ca 2 + Änderungen in Nervenendigungen zu erkennen. Allerdings haben diese Indikatoren Empfindlichkeit gegenüber Ca 2 + beschränkt und zeigen oft ein nicht-lineares Ansprechverhalten. Synthetische fluoreszierenden Indikatoren sind besser für die Messung der schnellen Ca 2 + ändert sich mit Nerven-Aktivität assoziiert geeignet. Hier zeigen wir eine Technik zum Be-Dextran-konjugierten synthetischen Ca 2 +-Indikatoren in den Live-Nervenendigungen in Drosophila-Larven. Besonderes Augenmerk wird auf jene Aspekte des Protokolls am wichtigsten für die Technik für den Erfolg, wie, wie elektrostatische Entladungen entlang der isolierten Nerven zu vermeiden, die Erhaltung der Gesundheit der Zubereitung bei längeren Ladezeiten gelegt, und die Gewährleistung Axon Überleben durch Ca 2 + zur Förderung der Abdichtung von abgetrennten Axonendigungen. Geringe Affinität Dextran-konjugierten Ca 2 +-Indikatoren, wie Fluo-4 und rhod, zur Verfügung, die ein hohes Signal-Rausch-Verhältnis zu zeigen, während minimal stören präsynaptischen Ca 2 + Dynamik. Dextran-Konjugation hilft zu verhindern, Ca 2 +-Indikatoren werden in Organellen wie Mitochondrien sequestriert. Die Belastung Technik kann auch für Larven, Embryonen und Erwachsenen angewendet werden.

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Loading Drosophila Nerve Terminals with Calcium Indicators

Calcium ist ein allgegenwärtiges Botenstoff im Nervensystem, wichtig für die Auslösung die Freisetzung von Neurotransmittern und Veränderungen der synaptischen Stärke. Hier zeigen wir eine Technik zum Be-Ca 2 +-Indikatoren in Drosophila Nervenendigungen. Wir zeigen auch die Herstellung der erforderlichen Geräte und betonen Punkte von entscheidender Bedeutung für die Technik für den Erfolg.

Loading Drosophila Nerve Terminals mit Calcium-Indikatoren

Calcium plays many roles in the nervous system but none more impressive than as the trigger for neurotransmitter release, and none more profound than as ...

Research

JoVE Journal

Biology

Ex vivo Mechanical Loading of Tendon

Ex vivo mechanische Belastung der Sehnen

Injuries to the tendon (e.g., wrist tendonitis, epicondyltis) due to overuse are common in sports activities and the workplace.  Most are associated with ...

Forschung

Biologie

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualisierung der Live- Drosophila Glial-neuromuskulären Synapse mit Fluoreszenzfarbstoffen

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

Assembly, Loading, and Alignment of an Analytical Ultracentrifuge Sample Cell

Montage-, Lade-und Alignment einer analytischen Ultrazentrifuge Messkammerdirektanschluss

The analytical ultracentrifuge (AUC) is a powerful biophysical tool that allows us to record macromolecular sedimentation profiles during high speed ...

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

Freisetzung von Dopamin an den einzelnen präsynaptischen visualisiert FFNs

The nervous system transmits signals between neurons via neurotransmitter release during synaptic vesicle fusion. To observe neurotransmitter uptake and ...

Cargo Loading onto Kinesin Powered Molecular Shuttles

Frachtladesysteme auf Kinesin Powered Molekulare Shuttles

Cells have evolved sophisticated molecular machinery, such as kinesin motor proteins and microtubule filaments, to support active intracellular transport ...

Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium (CRAC) Currents in Human T Lymphocytes

Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium CRAC Currents in Human T Lymphocytes

Whole-Cell Aufnahme von Calcium Release-Activated Calcium (CRAC) Ströme in menschlichen T-Lymphozyten

In T lymphocytes, depletion of Ca2+ from the intracellular Ca2+ store leads to activation of plasmalemmal Ca2+ channels, called Calcium Release-Activated ...

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

Mess-Fast-Flux Calcium in Kardiomyozyten

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading (TED)

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading TED

Direct Imaging von Calcium ER mit Targeted-Esterase Induzierte Dye Loading (TED)

Visualization of calcium dynamics is important to understand the role of calcium in cell physiology. To examine calcium dynamics, synthetic fluorescent ...

Monitoring ER/SR Calcium Release with the Targeted Ca2+ Sensor CatchER+

Monitoring ER/SR Calcium Release with the Targeted Ca2+ Sensor CatchER+

Monitoring ER / SR Calcium Release mit dem gezielten Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Sensor Catcher<sup&gt; +</sup

Intracellular calcium (Ca2+) transients evoked by extracellular stimuli initiate a multitude of biological processes in living organisms. At the center of ...

Forward Genetic Screen Using Transgenic Calcium Reporter Aequorin to Identify Novel Targets in Calcium Signaling

Forward Genetic Screen Mit transgenem CalciumReporter Aequorin, um neuartige Ziele bei der Calciumsignalisierung zu identifizieren

Forward genetic screens have been important tools in the unbiased identification of genetic components involved in several biological pathways. The basis ...