Name: loading drosophila nerve terminals with calcium indicators
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00
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<ol><li> Seleccione un plato disección limpia que no ha sido expuesto a los fijadores. </li><li> La disección de un errante 3 de instar larva de Drosophila en medio de Schneider Drosophila contiene Ca 2 + y L-glutamina, (no cortar los nervios o fibras de daño muscular Nos. 7, 6, 13 ó 12). </li><li> Seleccione un vaso de llenado de pipeta con una punta de 12 micras (diámetro interno). </li><li> Utilizando una jeringa y el tubo (para aplicar una presión negativa en la pipeta) asegura...

<ol>
	<li>Macleod, G. T., Hegstrom-Wojtowicz, M., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+calcium+signals+in+Drosophila+motor+neuron+terminals.">Fast calcium signals in Drosophila motor neuron terminals.</a> J. Neurophysiol. 88, 2659-2663 (2002).</li><li>Macleod, G. T., Suster, M. L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+neuron+activity+in+the+Drosophila+larval+CNS+detected+with+calcium+indicators.">Single neuron activity in the Drosophila larval CNS detected with calcium indicators.</a> J. Neurosci. Methods. 127, 167-178 (2003).</li><li>Macleod, G. T., Marin, L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+vesicles:+test+for+a+role+in+presynaptic+calcium+regulation.">Synaptic vesicles: test for a role in presynaptic calcium regulation.</a> J. Neurosci. 24, 2496-2505 (2004).</li><li>Reiff, D. F., Thiel, P. R., Schuster, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+active+zone+density+during+long-term+strengthening+of+Drosophila+neuromuscular+junctions.">Differential regulation of active zone density during long-term strengthening of Drosophila neuromuscular junctions.</a> J. Neurosci. 22, 9399-9409 (2002).</li><li>Reiff, D. F., Ihring, A., Guerrero, G., Isacoff, E. Y., Joesch, M., Nakai, J., Borst, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+performance+of+genetically+encoded+indicators+of+neural+activity+in+flies.">In vivo performance of genetically encoded indicators of neural activity in flies.</a> J. Neurosci. 25, 4766-4778 (2005).</li></ol>

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Schneider&#x2019;s Insect Medium</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>S0146</td>
<td>must contain L-glutamine and calcium</td>
</tr>
<tr>
<td>L-glutamic acid monosodium salt hydrate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1626</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>

loading drosophila nerve terminals with calcium indicators

El calcio juega muchos papeles en el sistema nervioso, pero ninguno tan impresionante que, como el detonante de la liberación de neurotransmisores, y ninguno más profundo que el mensajero fundamental para la plasticidad sináptica que apoya el aprendizaje y la memoria. Para aclarar aún más los fundamentos moleculares de Ca 2 +-dependiente de los mecanismos sinápticos, un modelo de sistema se requiere que sea genéticamente maleable y accesible fisiológicamente. Drosophila melanogaster ofrece este modelo. En este sistema, genéticamente codificados indicadores fluorescentes están disponibles para detectar cambios de Ca 2 + en las terminaciones nerviosas. Sin embargo, estos indicadores han limitado la sensibilidad a Ca 2 + y, a menudo muestran una respuesta no lineal. De índices sintéticos fluorescentes son más adecuados para la medición de la rapidez de Ca 2 + cambios asociados con la actividad nerviosa. Aquí se demuestra una técnica para la carga de dextrano conjugado sintético Ca 2 + indicadores en las terminaciones nerviosas en vivo en larvas de Drosophila. Se hace especial hincapié en aquellos aspectos del protocolo más crítico para el éxito de la técnica, tales como la forma de evitar descargas de electricidad estática a lo largo de los nervios aislados, mantener la salud de la preparación durante los períodos de carga extendida, y asegurar la supervivencia de los axones, proporcionando Ca 2 + para promover el sellado de las terminaciones del axón cortado. De baja afinidad dextrano conjugado con Ca 2 +-indicadores, como la fluo-4 y Rhod, están disponibles, que muestran una alta relación señal-ruido, mientras que mínimamente interrumpir presináptica Ca 2 + dinámica. Dextrano-conjugación ayuda a prevenir la Ca 2 + indicadores que se están secuestradas en orgánulos como las mitocondrias. La técnica de carga se puede aplicar igualmente a las larvas, embriones y adultos.

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Loading Drosophila Nerve Terminals with Calcium Indicators

El calcio es un mensajero en todas partes en el sistema nervioso, esencial para desencadenar la liberación de neurotransmisores y los cambios en la fuerza sináptica. Aquí se demuestra una técnica para la carga de Ca 2 +-los indicadores en las terminaciones nerviosas de Drosophila. También demuestran la fabricación de los aparatos necesarios y hacer hincapié en los puntos críticos para el éxito de la técnica.

Cargando Drosophila terminales nerviosas con indicadores de calcio

Calcium plays many roles in the nervous system but none more impressive than as the trigger for neurotransmitter release, and none more profound than as ...

Research

JoVE Journal

Biology

Ex vivo Mechanical Loading of Tendon

Ex vivo Carga mecánica del tendón

Injuries to the tendon (e.g., wrist tendonitis, epicondyltis) due to overuse are common in sports activities and the workplace.  Most are associated with ...

Investigación

Biología

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizar el vivo Drosophila Gliales-unión neuromuscular con tintes fluorescentes

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

Assembly, Loading, and Alignment of an Analytical Ultracentrifuge Sample Cell

Concentración, la carga, y la alineación de una célula de ultracentrifugación analítica de muestras

The analytical ultracentrifuge (AUC) is a powerful biophysical tool that allows us to record macromolecular sedimentation profiles during high speed ...

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

La liberación de dopamina en los terminales presinápticos individuales visualizados con FFNs

The nervous system transmits signals between neurons via neurotransmitter release during synaptic vesicle fusion. To observe neurotransmitter uptake and ...

Cargo Loading onto Kinesin Powered Molecular Shuttles

Las operaciones de carga en Kinesin molecular Traslados Desarrollado

Cells have evolved sophisticated molecular machinery, such as kinesin motor proteins and microtubule filaments, to support active intracellular transport ...

Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium (CRAC) Currents in Human T Lymphocytes

Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium CRAC Currents in Human T Lymphocytes

De células enteras de grabación de calcio activados por calcio de lanzamiento (CRAC) Las corrientes en los linfocitos T humanos

In T lymphocytes, depletion of Ca2+ from the intracellular Ca2+ store leads to activation of plasmalemmal Ca2+ channels, called Calcium Release-Activated ...

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

La medición de flujos rápidos de calcio en los cardiomiocitos

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading (TED)

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading TED

Direct Imaging de calcio ER con Targeted-esterasa inducida colorante de carga (TED)

Visualization of calcium dynamics is important to understand the role of calcium in cell physiology. To examine calcium dynamics, synthetic fluorescent ...

Monitoring ER/SR Calcium Release with the Targeted Ca2+ Sensor CatchER+

Monitoring ER/SR Calcium Release with the Targeted Ca2+ Sensor CatchER+

Seguimiento de la liberación de calcio ER / SR con el Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Sensor de Captura<supUnesdoc.unesco.org unesdoc.unesco.org</sup

Intracellular calcium (Ca2+) transients evoked by extracellular stimuli initiate a multitude of biological processes in living organisms. At the center of ...

Forward Genetic Screen Using Transgenic Calcium Reporter Aequorin to Identify Novel Targets in Calcium Signaling

Antaño de la pantalla genética utilizando la aequorin de la reportera transgénica de calcio para identificar nuevas metas en la señalización del calcio

Forward genetic screens have been important tools in the unbiased identification of genetic components involved in several biological pathways. The basis ...