Name: isolation of mouse respiratory epithelial cells and exposure to experimental cigarette smoke at air liquid interface
Uploaded: 2011-02-21T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Respiratory Epithelial Cells and Exposure to Experimental Cigarette Smoke at Air Liquid Interface at JoVE.com

نشكر ايميكا Ifedigbo للحصول على المساعدة التقنية ، والدكتور تياجي شيفراج للخبرات قيمة. كما نشكر مركز هارفارد للحصول على المساعدة NeuroDiscovery مع المجهري. وأيد هذا العمل في جزء من قبل جمعية القلب الاميركية Predoctoral منح 09PRE2250120 للام هيلير ، والمعاهد الوطنية للصحة المنح ، R01 - HL60234 ، R01 - HL55330 ، R01 - HL079904 ، منحت لتشوي AMK.

بروتوكول الشاملة يتطلب 2 أيام العزلة عن خلية من أنسجة الحيوانات ، 5-10 أيام لتكاثر الخلايا ، ومبلغا إضافيا 10-14 يوما لتمايز الخلايا في الهواء السائل واجهة. مطلوب يوما اضافيا للتعرض الخلية والحصاد من العينات. 1. عزل الخلايا الظهارية ال?...

<ol>
	<li>You, Y., Richer, E. J., Huang, T., Brody, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+differentiation+of+mouse+tracheal+epithelial+cells:+selection+of+a+proliferative+population.">Growth and differentiation of mouse tracheal epithelial cells: selection of a proliferative population.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 283, L1315-L1320 (2002).</li><li>Davidson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+epithelial+cells:+isolation+and+culture.">Murine epithelial cells: isolation and culture.</a> J. Cyst. Fibros. 2, 59-62 (2004).</li><li>Davidson, D. J., Kilanowski, F. M., Randell, S. H., Sheppard, D. N., Dorin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+primary+culture+model+of+differentiated+murine+tracheal+epithelium.">A primary culture model of differentiated murine tracheal epithelium.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 279, L766-L778 (2000).</li><li>Rabe, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.;+Global+Initiative+for+Chronic+Obstructive+Lung+Disease.+Global+strategy+for+the+diagnosis,+management,+and+prevention+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease:+GOLD+executive+summary.">et al.; Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive pulmonary disease: GOLD executive summary.</a> Am. J Respir. Crit. Care Med. 176, 532-555 (2007).</li><li>Macnee, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease.</a> Clin. Chest Med. 28, 479-513 (2007).</li><li>Tuder, R. M., Yoshida, T., Arap, W., Pasqualini, R., Petrache, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art.+Cellular+and+molecular+mechanisms+of+alveolar+destruction+in+emphysema:+an+evolutionary+perspective.">State of the art. Cellular and molecular mechanisms of alveolar destruction in emphysema: an evolutionary perspective.</a> Proc. Am. Thorac. Soc. 3, 503-510 (2006).</li><li>Yao, H., Rahman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+concepts+on+the+role+of+inflammation+in+COPD+and+lung+cancer.">Current concepts on the role of inflammation in COPD and lung cancer.</a> Curr. Opin. Pharmacol. 9, 375-383 (2009).</li><li>van der Toorn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+irreversibly+modifies+glutathione+in+airway+epithelial+cells.">Cigarette smoke irreversibly modifies glutathione in airway epithelial cells.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 293, L1156-L1162 (2007).</li><li>Slebos, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+localization+and+function+of+heme+oxygenase-1+in+cigarette+smoke-induced+cell+death.">Mitochondrial localization and function of heme oxygenase-1 in cigarette smoke-induced cell death.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 36, 409-417 (2007).</li><li>Kim, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagic+proteins+regulate+cigarette+smoke+induced+apoptosis:+protective+role+of+heme+oxygenase-1.">Autophagic proteins regulate cigarette smoke induced apoptosis: protective role of heme oxygenase-1.</a> Autophagy. 4, 887-895 (2008).</li><li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Egr-1+regulates+autophagy+in+cigarette+smoke-induced+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Egr-1 regulates autophagy in cigarette smoke-induced chronic obstructive pulmonary disease.</a> PLoS ONE. 3, e3316-e3316 (2008).</li><li>Okuwa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+micronucleus+assay+for+cigarette+smoke+using+a+whole+smoke+exposure+system:+A+comparison+of+smoking+regimens.">In vitro micronucleus assay for cigarette smoke using a whole smoke exposure system: A comparison of smoking regimens.</a> Exp Toxicol Pathol. , (2009).</li><li>St-Laurent, J., Proulx, L. I., Boulet, L. P., Bissonnette, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+two+in+vitro+models+of+cigarette+smoke+exposure.">Comparison of two in vitro models of cigarette smoke exposure.</a> Inhal. Toxicol. 21, 1148-1153 (2009).</li><li>Watson, A. M., Benton, A. S., Rose, M. C., Freishtat, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+alters+tissue+inhibitor+of+metalloproteinase+1+and+matrix+metalloproteinase+9+levels+in+the+basolateral+secretions+of+human+asthmatic+bronchial+epithelium+in+vitro.">Cigarette smoke alters tissue inhibitor of metalloproteinase 1 and matrix metalloproteinase 9 levels in the basolateral secretions of human asthmatic bronchial epithelium in vitro.</a> J Investig. Med. 58, 725-729 (2010).</li><li>Rennard, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+in+research.">Cigarette smoke in research.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 479-480 (2004).</li><li>Shapiro, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smoke+gets+in+your+cells.">Smoke gets in your cells.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 481-482 (2004).</li></ol>

ويتم تكييف بروتوكول يصف عزل الخلايا الظهارية الماوس القصبة الهوائية من بروتوكولات آخرون لك ، 1 ، وغيرها مع بعض التعديلات 2-3 كما هو الحال مع أي خلية العزلة بروتوكول يصف ، فإن الجانب الأكثر أهمية هو تجنب التلوث من مسببات الأمراض البكتيرية أو الفطر?...

* آلة تدخين السجائر هو العرف تصميم وملفقة 14 &quot;x14&quot; x20 &quot;من غرف مزدوجة والمياه لون الضوء دليلا واضحا تغلف 1 / 2&quot; سميكة غرفة يكسان البولي عن التعرض لدخان السجائر مع التحكم في درجة الحرارة ، والمياه استشعار مستوى اغلاق للرقابة النظام. يتم تثبيت تدخين السجائر / النفخ وحدة لتدخين سيجارة ينفث معدلات متغير. عندما تكون الوحدة في الاستخدام ، ويحاكي حاضنة ، بمعنى أن يتم التحكم في درجة الحرارة والرطوبة وثاني أكسيد الكربون في النظام. النظام ما يلي : (I) مخصصة غرفة مزدوجة / المياه تغلف الوحدة التي تحافظ على البيئة الخاضعة للرقابة في تجارب زراعة الأنسجة. (II) واجب ثقيل الرقمية عالية الدقة ضخ المياه المزدوج درجة حرارة النظام مع جهاز استشعار دائري منسوب المياه والتحكم في درجة الحرارة (III) تدخين السجائر وحدة مع مضخة النفخ. (الرابع) دورة مضخة جهاز استشعار مراقبة معدل cycler (الرابع) والمقاوم للصدأ الفولاذ عالية الدقة في خط حامل التصفية. (V) منصة غطاء قابل للفصل 11 / 2 &quot;حجم السجائر التماثل المحوري مروحة خلط الدخان (السادس) والمياه متوسطة الحجم مع حمام قوس دائري المتصاعدة للمياه (السابع) 1 / 2&#39; درج زجاجي سميك مع أقواس ل مضخة نفخة وحامل لجمع رماد السجائر. يمكن أن تكون بديلا هذا الجهاز كما هو موضح مع آلات مماثلة التدخين المتاحة تجاريا مثل هذا النوع من النظم المتاحة بورصة طوكيو ( <a href="http://www.tse-systems.com">www.tse - systems.com</a> ).

isolation of mouse respiratory epithelial cells and exposure to experimental cigarette smoke at air liquid interface

يمكن عزل الخلايا الظهارية الرئوي من الجهاز التنفسي لدى الفئران وتربيتها في الهواء السائل واجهة (علي) كنموذج للظهارة تنفسية مختلفة. يوصف بروتوكول للعزل وتعريض هذه الخلايا لدخان السجائر التيار (CS) ، من أجل دراسة استجابات الخلايا الظهارية التعرض CS. بروتوكول يتكون من ثلاثة أجزاء : عزل الخلايا الظهارية من القصبة الهوائية فأرة ، وزراعة هذه الخلايا في الهواء السائل واجهة (علي) الخلايا الطلائية ومتباينة تماما ، وإيصال التيار CS معايرة لهذه الخلايا في الثقافة. نظام يسمح للثقافة علي ثقافة ظهائر الجهاز التنفسي في ظل ظروف أكثر شبها من محيطهم الفسيولوجية العادية نظم ثقافة السائل. دراسة الاستجابات الخلوية الجزيئية والرئة والتعرض CS هو عنصر حاسم لفهم الأثر البيئي لتلوث الهواء على صحة الإنسان. قد نتائج البحوث في هذا المجال أن تسهم في نهاية المطاف نحو فهم مسببات مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD) ، وغيرها من الأمراض ذات الصلة بالتبغ ، والتي تمثل مشاكل صحية عالمية رئيسية.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Respiratory Epithelial Cells and Exposure to Experimental Cigarette Smoke at Air Liquid Interface at JoVE.com

Isolation of Mouse Respiratory Epithelial Cells and Exposure to Experimental Cigarette Smoke at Air Liquid Interface

يمكن عزل الخلايا الظهارية الرئوي من الجهاز التنفسي لدى الفئران وتربيتها في الهواء السائل واجهة كنموذج للظهارة تنفسية مختلفة. يوصف بروتوكول للعزل ، زراعة وتعريض هذه الخلايا لدخان السجائر العادية ، من أجل دراسة الاستجابات الجزيئية لهذا السم البيئية.

عزل الخلايا الظهارية ماوس الجهاز التنفسي والتعرض لدخان السجائر في واجهة تجريبية الهواء السائل

Pulmonary epithelial cells can be isolated from the respiratory tract of mice and cultured at air-liquid interface (ALI) as a model of differentiated ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Human Pneumococcal Carriage

التجريبية النقل المكورات الرئوية الإنسان

Experimental human pneumococcal carriage (EHPC) is scientifically important because nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae is both the major ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

العزلة، والحفظ بالتبريد والثقافة من الخلايا الظهارية البشرية السلى للتطبيقات السريرية

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

القياس الآلي للالرئوي وانتفاخ الرئة ومجرى الهواء الصغيرة في إعادة عرض السجائر الفئران المعرضة للدخان

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Isolation and Culture Expansion of Tumor-specific Endothelial Cells

العزلة وثقافة توسيع ورم محددة الخلايا البطانية

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model ...

Comparing the Effects of Electronic Cigarette Vapor and Cigarette Smoke in a Novel In Vivo Exposure System

Comparing the Effects of Electronic Cigarette Vapor and Cigarette Smoke in a Novel In Vivo Exposure System

مقارنة تأثيرات بخار السجائر الإلكترونية ودخان السجائر في رواية<em&gt; في فيفو</em&gt; نظام التعرض

Electronic cigarettes (E-cigarettes) are being widely used, and growing in popularity. It is estimated that more than 9 million adults use them regularly. ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

جيل طراز انسداد الشعب الهوائية المزمن في الفئران بالتعرض للأوزون المتكررة

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

تقييم سمية الاستنشاق الحاد للجسيمات المحمولة جواً من خلال كشف خلايا الرئة البشرية المزروعة في واجهة الهواء والسائل

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

تأثير تركيبات المسيل للدموع الاصطناعية على النشاط الأيضي للخلايا الظهارية القرنية البشرية بعد التعرض للديسيكيشن

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

تحريض وتحليل الإجهاد التأكسدي في الجمال النائم Transposon-Transfected الخلايا الظهارية صبغة الشبكية البشرية

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 ...

Isolation and Profiling of Human Primary Mesenteric Arterial Endothelial Cells at the Transcriptome Level

عزل وتوصيف الخلايا البطانية الشريانية المساريقية الأولية البشرية على مستوى النسخ

Endothelial cells (ECs) are crucial for vascular and whole-body function through their dynamic response to environmental cues. Elucidating the ...