Name: isolation of mouse respiratory epithelial cells and exposure to experimental cigarette smoke at air liquid interface
Uploaded: 2011-02-21T17:00:00
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Ringraziamo Emeka Ifedigbo per assistenza tecnica e il Dr. Shivraj Tyagi per la preziosa esperienza. Ringraziamo anche il Centro NeuroDiscovery Harvard per l&#39;assistenza al microscopio. Questo lavoro è stato sostenuto in parte da un American Heart Association Predoctoral concedere 09PRE2250120 a Hilaire Lam, e le sovvenzioni NIH, R01-HL60234, HL55330-R01, R01-HL079904, assegnato a AMK Choi.

Il protocollo generale richiede 2 giorni per isolamento di cellule da tessuti animali, 5-10 giorni per la proliferazione cellulare, e un ulteriore 10-14 giorni per la differenziazione cellulare in aria-liquido. Un giorno in più è necessario per l&#39;esposizione delle cellule e la raccolta di campioni. 1. Isolamento di mouse cellule epiteliali tracheobronchiale (MTEC). Nota: Tutte le procedure descritte di seguito sono stati esaminati e approvati dalla cura degli...

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	<li>You, Y., Richer, E. J., Huang, T., Brody, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+differentiation+of+mouse+tracheal+epithelial+cells:+selection+of+a+proliferative+population.">Growth and differentiation of mouse tracheal epithelial cells: selection of a proliferative population.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 283, L1315-L1320 (2002).</li><li>Davidson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+epithelial+cells:+isolation+and+culture.">Murine epithelial cells: isolation and culture.</a> J. Cyst. Fibros. 2, 59-62 (2004).</li><li>Davidson, D. J., Kilanowski, F. M., Randell, S. H., Sheppard, D. N., Dorin, J. 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I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+in+research.">Cigarette smoke in research.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 479-480 (2004).</li><li>Shapiro, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smoke+gets+in+your+cells.">Smoke gets in your cells.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 481-482 (2004).</li></ol>

Il protocollo descrive l&#39;isolamento di mouse cellule epiteliali tracheali è adattato dai protocolli di Lei et al., 1, e altri 2-3 con modifiche. Come con qualsiasi isolamento protocollo descrive cellulare, l&#39;aspetto più critico è quello di evitare la contaminazione da batteri patogeni o fungine mediante rigorose tecniche asettiche. Un secondo passo fondamentale è quello di evitare la contaminazione delle culture di fibroblasti, che possono essere evitati mediante dissezione att...

* La macchina fumo di sigaretta è progettato e fabbricato 14 &quot;x14&quot; x20 &quot;a doppio scomparto e acqua camicia prova di tonalità chiara luce 1 / 2&quot; di spessore in policarbonato Lexan per la camera di esposizione al fumo di sigaretta a temperatura controllata, sensore di livello dell&#39;acqua controllato spegnimento del sistema. Un fumo di sigaretta / sbuffando unità è predisposta per una sigaretta sbuffando variabile tassi. Quando l&#39;unità è in uso, che imita un incubatore, nel senso che la temperatura, l&#39;umidità e l&#39;anidride carbonica sono controllati nel sistema. Il sistema comprende: (I) una misura doppia camera / acqua unità camicia che mantiene un ambiente controllato per gli esperimenti di coltura di tessuti. (II) Un dovere digitale pesante, alto livello di precisione a doppia pompa di circolazione dell&#39;acqua temperatura del sistema con sensore di livello dell&#39;acqua e il controllo della temperatura (III) Un&#39;unità sbuffando fumo di sigaretta con pompa. (IV) Una pompa ciclo sensore di controllo della frequenza cycler (IV) Una precisione in acciaio inox ad alta in-Line portafiltro. (V) Un coperchio rimovibile montato 11 / 2 &quot;dimensione assiale fumo di sigaretta fan uniformità di miscelazione. (VI) Un bagno d&#39;acqua di medie dimensioni con staffa di montaggio per il circolatore d&#39;acqua. (VII) A 1 / 2 &#39;vassoio plexiglas spessore di staffe per il puff pompa e supporto per collettore di cenere di sigaretta. Questa macchina, come descritto può essere sostituito con simili disponibili in commercio macchine fumatori, quali il tipo a disposizione dai sistemi TSE ( <a href="http://www.tse-systems.com">www.tse-systems.com</a> ).

isolation of mouse respiratory epithelial cells and exposure to experimental cigarette smoke at air liquid interface

Le cellule epiteliali polmonari può essere isolato dal tratto respiratorio dei topi e colto in aria-liquido (ALI) come un modello di differenziazione dell&#39;epitelio respiratorio. Un protocollo è descritto per isolare queste cellule e di esporre al fumo di sigaretta mainstream (CS), al fine di studiare le risposte delle cellule epiteliali all&#39;esposizione CS. Il protocollo si compone di tre parti: l&#39;isolamento delle cellule epiteliali delle vie aeree da mouse trachea, la coltura di queste cellule in aria-liquido (ALI) come cellule altamente differenziate epiteliali, e la consegna del tradizionale CS calibrato a queste cellule in coltura. Il sistema di coltura ALI permette la cultura del epiteli delle vie respiratorie, in condizioni che si avvicinano maggiormente a loro ambiente fisiologico rispetto ai sistemi normali coltura liquida. Lo studio delle risposte cellulari e molecolari di esposizione ai polmoni CS è un componente fondamentale di comprendere l&#39;impatto dell&#39;inquinamento atmosferico ambientale sulla salute umana. I risultati della ricerca in questo settore possono in ultima analisi, contribuire alla comprensione della eziologia della malattia polmonare ostruttiva cronica (BPCO), e altre malattie legate al tabacco, che rappresentano gravi problemi di salute globale.

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Isolation of Mouse Respiratory Epithelial Cells and Exposure to Experimental Cigarette Smoke at Air Liquid Interface

Le cellule epiteliali polmonari può essere isolato dal tratto respiratorio dei topi e colto in aria-liquido come un modello di differenziazione dell&#39;epitelio respiratorio. Un protocollo è descritto per l&#39;isolamento, la coltura e l&#39;esposizione di queste cellule al fumo di sigaretta tradizionale, al fine di studiare le risposte molecolari di questa tossina ambientale.

Isolamento di mouse cellule epiteliali delle vie respiratorie ed esposizione al fumo di sigaretta Sperimentale interfaccia Air Liquid

Pulmonary epithelial cells can be isolated from the respiratory tract of mice and cultured at air-liquid interface (ALI) as a model of differentiated ...

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JoVE Journal

Medicine

Experimental Human Pneumococcal Carriage

Sperimentale trasporto pneumococco umano

Experimental human pneumococcal carriage (EHPC) is scientifically important because nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae is both the major ...

Ricerca

Medicina

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolamento, Crioconservazione e Cultura umani Cellule epiteliali Amnion per le applicazioni cliniche

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

Misurazione automatica di enfisema polmonare e piccole vie aeree ritocca in sigaretta Mice-fumo esposti

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Isolation and Culture Expansion of Tumor-specific Endothelial Cells

Isolamento e cultura espansione delle cellule endoteliali tumore-specifici

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model ...

Comparing the Effects of Electronic Cigarette Vapor and Cigarette Smoke in a Novel In Vivo Exposure System

Comparing the Effects of Electronic Cigarette Vapor and Cigarette Smoke in a Novel In Vivo Exposure System

Confronto degli effetti di fumo elettronico di sigarette e sigaretta in un romanzo<em&gt; In Vivo</em&gt; Sistema di esposizione

Electronic cigarettes (E-cigarettes) are being widely used, and growing in popularity. It is estimated that more than 9 million adults use them regularly. ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

Generazione di un modello di malattia polmonare ostruttiva cronica nei topi da esposizione ripetuta dell'ozono

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

Valutazione della tossicità dell'inalazione acuta delle particelle aerotrasportate esponendo cellule polmonari umane coltivate all'interfaccia aria-liquida

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

Effetto delle formulazioni lacrimali artificiali sull'attività metabolica delle cellule epiteliali corneali umane dopo l'esposizione all'essiccazione

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Induzione e analisi dello stress ossidativo nelle cellule epiteliali del pigmento retinico umano trasforato dalla bella addormentata nel bosco

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 ...

Isolation and Profiling of Human Primary Mesenteric Arterial Endothelial Cells at the Transcriptome Level

Isolamento e profilazione delle cellule endoteliali arteriose mesenteriche primarie umane a livello di trascrittoma

Endothelial cells (ECs) are crucial for vascular and whole-body function through their dynamic response to environmental cues. Elucidating the ...