Name: isolation of mouse respiratory epithelial cells and exposure to experimental cigarette smoke at air liquid interface
Uploaded: 2011-02-21T17:00:00
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우리는 귀중한 전문 기술 지원 및 박사 Shivraj Tyagi에 대한 Emeka Ifedigbo 감사합니다. 우리는 또한 현미경 도움을위한 하버드 NeuroDiscovery 센터를 주셔서 감사합니다. 이 작품은 힐레어 램, 그리고 AMK 최에게 수여 NIH 보조금, R01 - HL60234, R01 - HL55330, R01 - HL079904에 부여 09PRE2250120 Predoctoral 미국 심장 협회가 일부 지원되었다.

전체 프로토콜은 동물의 조직, 세포 증식에​​ 대한 50-10일, 공기 - 액체 인터페이스에서 세포 차별 화를위한 추가 10-14일에서 세포 isolations 2 일 필요합니다. 추가 하루 세포 노출과 샘플 수확이 필요합니다. 1. 마우스 상피 세포 Tracheobronchial (MTEC)의 분리. 참고 : 모든 절차를 아래에서 설명을 검토한 결과, 브리검 앤드 위민스 병원 / 하버드 메디컬 스쿨 지...

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	<li>You, Y., Richer, E. J., Huang, T., Brody, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+differentiation+of+mouse+tracheal+epithelial+cells:+selection+of+a+proliferative+population.">Growth and differentiation of mouse tracheal epithelial cells: selection of a proliferative population.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 283, L1315-L1320 (2002).</li><li>Davidson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+epithelial+cells:+isolation+and+culture.">Murine epithelial cells: isolation and culture.</a> J. Cyst. Fibros. 2, 59-62 (2004).</li><li>Davidson, D. J., Kilanowski, F. M., Randell, S. H., Sheppard, D. N., Dorin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+primary+culture+model+of+differentiated+murine+tracheal+epithelium.">A primary culture model of differentiated murine tracheal epithelium.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 279, L766-L778 (2000).</li><li>Rabe, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.;+Global+Initiative+for+Chronic+Obstructive+Lung+Disease.+Global+strategy+for+the+diagnosis,+management,+and+prevention+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease:+GOLD+executive+summary.">et al.; Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive pulmonary disease: GOLD executive summary.</a> Am. J Respir. Crit. Care Med. 176, 532-555 (2007).</li><li>Macnee, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease.</a> Clin. Chest Med. 28, 479-513 (2007).</li><li>Tuder, R. M., Yoshida, T., Arap, W., Pasqualini, R., Petrache, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art.+Cellular+and+molecular+mechanisms+of+alveolar+destruction+in+emphysema:+an+evolutionary+perspective.">State of the art. Cellular and molecular mechanisms of alveolar destruction in emphysema: an evolutionary perspective.</a> Proc. Am. Thorac. Soc. 3, 503-510 (2006).</li><li>Yao, H., Rahman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+concepts+on+the+role+of+inflammation+in+COPD+and+lung+cancer.">Current concepts on the role of inflammation in COPD and lung cancer.</a> Curr. Opin. Pharmacol. 9, 375-383 (2009).</li><li>van der Toorn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+irreversibly+modifies+glutathione+in+airway+epithelial+cells.">Cigarette smoke irreversibly modifies glutathione in airway epithelial cells.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 293, L1156-L1162 (2007).</li><li>Slebos, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+localization+and+function+of+heme+oxygenase-1+in+cigarette+smoke-induced+cell+death.">Mitochondrial localization and function of heme oxygenase-1 in cigarette smoke-induced cell death.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 36, 409-417 (2007).</li><li>Kim, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagic+proteins+regulate+cigarette+smoke+induced+apoptosis:+protective+role+of+heme+oxygenase-1.">Autophagic proteins regulate cigarette smoke induced apoptosis: protective role of heme oxygenase-1.</a> Autophagy. 4, 887-895 (2008).</li><li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Egr-1+regulates+autophagy+in+cigarette+smoke-induced+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Egr-1 regulates autophagy in cigarette smoke-induced chronic obstructive pulmonary disease.</a> PLoS ONE. 3, e3316-e3316 (2008).</li><li>Okuwa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+micronucleus+assay+for+cigarette+smoke+using+a+whole+smoke+exposure+system:+A+comparison+of+smoking+regimens.">In vitro micronucleus assay for cigarette smoke using a whole smoke exposure system: A comparison of smoking regimens.</a> Exp Toxicol Pathol. , (2009).</li><li>St-Laurent, J., Proulx, L. I., Boulet, L. P., Bissonnette, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+two+in+vitro+models+of+cigarette+smoke+exposure.">Comparison of two in vitro models of cigarette smoke exposure.</a> Inhal. Toxicol. 21, 1148-1153 (2009).</li><li>Watson, A. M., Benton, A. S., Rose, M. C., Freishtat, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+alters+tissue+inhibitor+of+metalloproteinase+1+and+matrix+metalloproteinase+9+levels+in+the+basolateral+secretions+of+human+asthmatic+bronchial+epithelium+in+vitro.">Cigarette smoke alters tissue inhibitor of metalloproteinase 1 and matrix metalloproteinase 9 levels in the basolateral secretions of human asthmatic bronchial epithelium in vitro.</a> J Investig. Med. 58, 725-729 (2010).</li><li>Rennard, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cigarette+smoke+in+research.">Cigarette smoke in research.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 479-480 (2004).</li><li>Shapiro, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smoke+gets+in+your+cells.">Smoke gets in your cells.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 481-482 (2004).</li></ol>

마우스 tracheal 상피 세포의 격리를 나타내는 프로토콜 1. 당신이 외의 프로토콜에서 적응하고, 다른 수정 2-3. 것입니다 어떤 프로토콜 설명 셀 isolations와 마찬가지로 가장 중요한 부분은 엄격한 무균 기술을 사용하여 세균이나 곰팡이 병원균의 오염을 방지하는 것입니다. 두 번째 중요한 단계는 fibroblast의 tracheas주의 절개로 피할 수있는 문화의 오염, 그리고 1.19 단계?...

* 흡연 기계는 맞춤 설계 및 가공 14 &quot;x14&quot;x20 &quot;이중 chambered 물을 외피 가벼운 틴트 확실하게 증명 1 / 2&quot;온도 조절, 수위 센서와 함께 담배 연기 노출을위한 두꺼운 폴리 카보 네이트 Lexan 챔버 시스템을 차단 제어됩니다. 단위 퍼핑 / 금연 담배가 속도를 피고 변수 담배 설치됩니다. 장치가 사용되면, 그것은 온도, 습도 및 이산화탄소가 시스템으로 제어되는 의미에서 보육을 모방한 것이었 지요. 시스템이 포함되어 있습니다 (I) 조직 배양 실험을위한 통제된 환경을 유지 맞춤형 듀얼 챔버 / 물 외피 단위. (II) 디지털 헤비 듀티, 수위 센서 및 온도 제어 펌프를 피고로 (III) 흡연 단위로 고정밀 이중 펌프 물 온도 순환 장치 시스템입니다. 인라인 (IV) 펌프 사이클 센서 제어 속도 자전거 타는 사람 (IV) 스테인레스 스틸 고정밀 필터 홀더. (V) 분리 뚜껑은을 위해 괄호와 함께 2분의 11 &quot;크기의 축 균일의 담배 연기 혼합 팬. (VI) 물의 순환 장치 장착 브래킷과 중간 크기의 물 목욕. (VII) A 1 / 2 &#39;두께 플렉시 글라스 트레이 장착 담배 가루 수집기 낸 펌프 및 홀더. 설명한대로이 기계는 그러한 TSE 시스템 (에서 제공하는 종류와 유사한 상용 - 흡연 가능한 기계로 대체 수 있습니다 <a href="http://www.tse-systems.com">www.tse - systems.com</a> ).

isolation of mouse respiratory epithelial cells and exposure to experimental cigarette smoke at air liquid interface

폐 상피 세포는 호흡 생쥐의 넓이와 차별 호흡기 상피의 모델로 공기 - 액체 인터페이스 (ALI)에서 양식에서 격리 수 있습니다. 프로토콜은 CS에 노출되는 상피 세포의 반응을 연구하기 위해 주류 담배 연기 (CS) 이러한 세포를 분리하고 노출에 대해 설명합니다. 마우스 기관, 공기 - 액체 인터페이스 (ALI)로 완벽하게 차별화된 상피 세포에서 이러한 세포의 culturing, 문화에서 이러한 세포 보정 주류 CS의 배달에서기도 상피 세포의 분리 : 프로토콜은 세 부분으로 구성되어 있습니다. 알리 문화 시스템은보다 밀접하게 일반 액체 문화 시스템보다 생리 설정을 닮은 그 조건 하에서 호흡기 상피 조직의 문화 수 있습니다. CS 노출하는 분자 및 폐 세포 반응의 연구는 인간의 건강에 대한 환경 대기 오염의 영향을 이해의 중요한 구성 요소입니다. 이 분야에서 연구 결과는 궁극적으로 만성 폐쇄 폐 질환 (COPD), 주요 글로벌 건강 문제를 나타내는 다른 담배 관련 질병의 병인을 이해하는 방향으로 기여할 수 있습니다.

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Isolation of Mouse Respiratory Epithelial Cells and Exposure to Experimental Cigarette Smoke at Air Liquid Interface

폐 상피 세포는 생쥐의 호흡기로부터 격리하고 차별 호흡기 상피의 모델로 공기 - 액체 인터페이스에서 교양 수 있습니다. 프로토콜이 환경 독소에 분자 반응을 연구하기 위해, culturing를 분리하고 주류 담배 연기 이러한 세포를 노출에 대해 설명합니다.

에어 리퀴드 인터페이스에서 마우스 호흡기 상피 세포 및 실험 담배 연기에 노출의 분리

Pulmonary epithelial cells can be isolated from the respiratory tract of mice and cultured at air-liquid interface (ALI) as a model of differentiated ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Human Pneumococcal Carriage

실험 인간 폐렴의 운송

Experimental human pneumococcal carriage (EHPC) is scientifically important because nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae is both the major ...

연구

의학

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

분리, 냉동 보존 및 문화 임상 응용 프로그램에 대한 인간 양막 상피 세포

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

담배 연기에 노출 된 마우스의 폐 폐기종 및 작은기도 리모델링 자동 측정

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Isolation and Culture Expansion of Tumor-specific Endothelial Cells

종양 특이 내피 세포의 분리 및 문화 확장

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model ...

Comparing the Effects of Electronic Cigarette Vapor and Cigarette Smoke in a Novel In Vivo Exposure System

Comparing the Effects of Electronic Cigarette Vapor and Cigarette Smoke in a Novel In Vivo Exposure System

전자 담배와 담배 연기의 효과 비교<em&gt; In Vivo</em&gt; 노출 시스템

Electronic cigarettes (E-cigarettes) are being widely used, and growing in popularity. It is estimated that more than 9 million adults use them regularly. ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

반복된 오존 노출에 의해 쥐에 만성 폐쇄성 폐 질환 모델의 생성

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

공기-액체 인터페이스에서 재배된 인간 폐 세포를 노출하여 공기 중 입자의 급성 흡입 독성 평가

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

건조에 노출 된 후 인간 각막 상피 세포의 대사 활동에 인공 눈물 제형의 효과

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

수면 의 아름다움 트랜스포슨 - 전염 인간 망막 안료 상피 세포에서 산화 스트레스의 유도 및 분석

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 ...

Isolation and Profiling of Human Primary Mesenteric Arterial Endothelial Cells at the Transcriptome Level

전사체 수준에서 인간 일차 장간막 동맥 내피 세포의 분리 및 프로파일링

Endothelial cells (ECs) are crucial for vascular and whole-body function through their dynamic response to environmental cues. Elucidating the ...