Name: passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens
Uploaded: 2011-02-14T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens at JoVE.com

1. Groei van H. Capsulatum <ol><li> Bereid een bioveiligheid kast voor het werken met de schimmel door het schoonmaken van de kast met 10% bleekmiddel, gevolgd door 20 minuten UV-straling. H. capsulatum in de gist fase vereist Biosafety level (BSL) II praktijken, terwijl de schimmel vorm vereist BSLIII. Gebruik van gist vorm in de volgende stappen. </li><li> Volgende bereiden een 15 ml conische buis met 5 ml PBS. Oogst een kolonie van H. capsulatum (stam Hc ATCC G21...

<ol>
	<li>Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+based+ELISAs+for+cryptococcal+polysaccharide.">Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide.</a> J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).</li><li>Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+to+heat+shock+protein+60+alter+the+pathogenesis+of+Histoplasma+capsulatum.+Infect+Immun+77.">Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77.</a> , 1357-1367 (2009).</li><li>Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+function+and+molecular+mapping+of+M+antigen+in+yeast+phase+of+Histoplasma+capsulatum.">Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum.</a> PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).</li><li>Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+antibodies+and+endemic+dimorphic+fungi.">Protective antibodies and endemic dimorphic fungi.</a> Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &amp;amp, G. S., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Smith, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+laboratory+animals+to+some+injectable+anaesthetics.">Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics.</a> Lab Anim. 27, 30-39 (1993).</li></ol>

Het protocol hier gepresenteerde laat zien dat mAb&#39;s te H. capsulatum kunt de loop van de experimentele muizen histoplasmose. MAbs aan het celoppervlak antigenen van ziekteverwekkers kunt de complexe dynamiek die zich voordoen tijdens het samenspel tussen een host en een ziekteverwekker. Deze studie stelt vast dat mAbs bescherming in een muizenmodel van dodelijke histoplasmose bemiddelen bij het intraperitoneaal geïnjecteerd, en het suggereert de kandidaat-eiwitten voor de ontwikkeling van vaccins, zoals H...

<table border="1"><tbody><tr><th> Stofnaam </th><th> Vennootschap </th></tr><tr><td> Biologische veiligheid kast (BSL2) </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml conische buizen </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> HAM F-12 medium </td><td> Gibco </td></tr><tr><td> 37 ° C shaker </td><td></td></tr><tr><td> Draaikolk </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml conische buizen </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> 26G1 / 2 naald </td><td> BD </td></tr><tr><td> 10 ml spuit </td><td> BD </td></tr><tr><td> 250 ml flesjes </td><td></td></tr><tr><td> FPLC (Fast eiwit vloeistofchromatografie) systeem </td><td> GE Helthcare </td></tr><tr><td> ELISA-lezer </td><td> BioTek </td></tr><tr><td> Anesthesie (ketamine en xylazine) </td><td></td></tr><tr><td> Kolom staat </td><td></td></tr><tr><td> Nylon snaar </td><td></td></tr><tr><td> Warmtelamp </td><td></td></tr><tr><td> 70μm cel filters </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> BHI agarplaten </td><td> Gibco </td></tr></tbody></table>

passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens

Het doel van het gebruik van deze methodiek is 1) om onze capaciteit verder te gaan naar personen met een antilichaam of vaccin voor het voorkomen of behandelen histoplasmose veroorzaakt door de schimmel Histoplasma capsulatum en 2) de rol van virulentiefactoren te onderzoeken als doelwit voor de therapie te beschermen. Voor het genereren van mAb&#39;s, muizen geïmmuniseerd, worden de immuunreacties beoordeeld met behulp van een vaste fase ELISA-systeem ontwikkeld in ons laboratorium, en de beste responder muizen zijn geselecteerd voor het isoleren van splenocyten voor de fusie met hybridoma cellen. C57BL / 6 muizen zijn uitgebreid gebruikt om de H. studie capsulatum pathogenese en bieden het beste model voor het verkrijgen van de vereiste gegevens. Om de rol van de mAbs in infectie te beoordelen, muizen intraperitoneaal toegediend met mAb aan H. capsulatum of isotype gematchte controle mAb en vervolgens geïnfecteerd door een intraveneuze (iv), intraperitoneale (ip) of intranasaal (in) routes. In de wetenschappelijke literatuur, werkzaamheid van mAbs voor schimmelinfecties in muizen is gebaseerd op de sterfte als een eindpunt, in combinatie met kolonie formin eenheden (CFU) taxaties op eerdere tijdstippen. Overleving (tijd tot overlijden) studies zijn nodig omdat zij het best vertegenwoordigen menselijke ziekten. Zo zou doeltreffendheid van onze interventie niet afdoende worden vastgesteld zonder overlevingscurven. Dit geldt ook voor het vaststellen van de werkzaamheid van het vaccin of het testen van de mutanten voor de virulentie. Met histoplasmose, de muizen gaan vaak van die energieke om dode gedurende een aantal uren. De capaciteit van een interventie, zoals het toedienen van een mAb kan een dier in eerste instantie te beschermen tegen ziekte, maar de ziekte kan terugvallen, die niet zou worden gerealiseerd op korte CFU experimenten. In aanvulling op de overleving en schimmels last testen, onderzoeken we de inflammatoire respons op infectie (histologie, cellulair werving en selectie, cytokine responsen). Om te overleven / tijd om dood experimenten, zijn de muizen geïnfecteerd en gecontroleerd minstens tweemaal per dag op tekenen van ziekelijkheid. Voor de beoordeling van schimmel last, histopathologie, en cytokine respons, zijn de muizen gedood op verschillende tijdstippen na infectie. Dierproeven worden uitgevoerd volgens de richtlijnen van het Institute for Animal Studies van de Albert Einstein College of Medicine.

Watch this Scientific Journal Video about Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens at JoVE.com

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

C57BL / 6 muizen werden gebruikt om Hc pathogenese bestuderen en het beste model te bieden. We zijn het verkennen van de potentiële voordelen van humorale immuniteit tegen deze schimmel en genereerde verschillende mAb&#39;s [om histon H2B en een heat shock protein 60kDa] die we getest op hun beschermende werking na intraperitoneale toediening.

Passieve Toediening van monoklonale antilichamen tegen H. capsulatum Ea schimmels

The purpose of the use of this methodology is 1) to advance our capacity to protect individuals with antibody or vaccine for preventing or treating ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

Kwantitatieve analyses van alle Influenza A Virale Hemagglutinins en neuraminidases gebruik van Universal Antistoffen Type in de eenvoudige Slot Blot Assays

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

Infectie van zebravis embryo&#39;s met intracellulaire bacteriële pathogenen

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

Evaluatie anti-schimmel activiteit van geïsoleerde alveolaire macrofagen door confocale microscopie

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistische Transformatie van een TL Tagged Gene in de Opportunistische schimmelpathogeen<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

The basidiomycete Cryptococcus neoformans, an invasive opportunistic pathogen of the central nervous system, is the most frequent cause of fungal ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

Generering van recombinant humaan IgG Monoclonal Antibodies uit Onsterfelijk gesorteerde B Cells

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

Genereren van monoklonale muizenantilichamen door Hybridoma Technology

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

Een robuuste Longontsteking Model in Immunocompetente Knaagdieren om Antibacteriële Werkzaamheid Evalueer tegen<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; of<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Generatie van Escape varianten van het Influenza Virus monoklonale antistoffen neutraliseren

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Generatie van discriminatoire menselijke monoklonale antistoffen uit zeldzame antigeen-specifieke B-cellen in bloed circuleert

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

Generatie van monoklonale antistoffen tegen natuurlijke producten

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...