Name: passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens
Uploaded: 2011-02-14T17:00:00
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1. Wachstum von H. Capsulatum <ol><li> Bereiten Sie eine Biosicherheitswerkbank für die Arbeit mit dem Pilz durch die Reinigung der Schrank mit 10% Bleichmittel durch 20 min UV-Bestrahlung gefolgt. H. capsulatum in der Hefe Phase erfordert Biosafety Level (BSL) II Praktiken, während die Form Form erfordert BSLIII. Verwenden Sie Hefe Form in den folgenden Schritten. </li><li> Nächste bereiten ein 15 ml konische Röhrchen mit 5 ml PBS. Ernte eine Kolonie von H. capsulatum (...

<ol>
	<li>Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+based+ELISAs+for+cryptococcal+polysaccharide.">Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide.</a> J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).</li><li>Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+to+heat+shock+protein+60+alter+the+pathogenesis+of+Histoplasma+capsulatum.+Infect+Immun+77.">Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77.</a> , 1357-1367 (2009).</li><li>Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+function+and+molecular+mapping+of+M+antigen+in+yeast+phase+of+Histoplasma+capsulatum.">Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum.</a> PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).</li><li>Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+antibodies+and+endemic+dimorphic+fungi.">Protective antibodies and endemic dimorphic fungi.</a> Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &amp;amp, G. S., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Smith, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+laboratory+animals+to+some+injectable+anaesthetics.">Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics.</a> Lab Anim. 27, 30-39 (1993).</li></ol>

Das Protokoll hier vorgestellten zeigt, dass mAb an H. ist capsulatum ändern können Laufe der experimentellen murinen Histoplasmose. MAbs zu Zelloberflächenantigene von Krankheitserregern können die komplexe Dynamik, die während des Zusammenspiels zwischen einem Host und einem Erreger auftreten. Diese Studie stellt fest, dass mAbs Schutz in einem Mausmodell der tödlichen Histoplasmose vermitteln, wenn intraperitoneal, und es schlägt Kandidaten-Proteine ​​für die Entwicklung von Impfstoffen,...

<table border="1"><tbody><tr><th> Bezeichnung des Gutes </th><th> Firma </th></tr><tr><td> Biologische Sicherheitswerkbank (BSL2) </td><td></td></tr><tr><td> 15 mL konischen Rohren </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> HAM F-12-Medium </td><td> Gibco </td></tr><tr><td> 37 ° C Schüttler </td><td></td></tr><tr><td> Wirbel </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml konische Röhrchen </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> 26G1 / 2 Nadel </td><td> BD </td></tr><tr><td> 10 mL Spritze </td><td> BD </td></tr><tr><td> 250 ml Flaschen </td><td></td></tr><tr><td> FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography)-System </td><td> GE Helthcare </td></tr><tr><td> ELISA-Reader </td><td> BioTek </td></tr><tr><td> Anästhesie (Ketamin und Xylazin) </td><td></td></tr><tr><td> Spalte steht </td><td></td></tr><tr><td> Nylon-String </td><td></td></tr><tr><td> Wärmelampe </td><td></td></tr><tr><td> 70μm Zelle Siebe </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> BHI-Agar-Platten </td><td> Gibco </td></tr></tbody></table>

passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens

Der Zweck der Anwendung dieser Methodik ist 1) unsere Fähigkeit voraus, um Menschen mit Antikörper oder Impfstoff zur Vorbeugung oder Behandlung Histoplasmose durch den Pilz Histoplasma capsulatum und 2) die Rolle der Virulenzfaktoren als Ziel für eine Therapie zu untersuchen schützen. Zur Erzeugung von mAbs, Mäuse immunisiert sind, sind die Immunreaktionen anhand einer Festphasen-ELISA-System in unserem Labor entwickelt und die besten Responder-Mäuse sind für die Isolierung von Milzzellen für die Fusion mit Hybridomzellen ausgewählt. C57BL / 6 Mäuse wurden ausgiebig verwendet, um H.-Studie capsulatum Pathogenese und bieten das beste Modell für die Beschaffung der erforderlichen Daten. Um die Rolle der mAbs in Infektion zu beurteilen, werden Mäuse intraperitoneal entweder mit mAb an H. verabreicht capsulatum oder Isotyp Kontroll-mAb und dann infiziert entweder durch intravenöse (iv), intraperitoneal (ip) oder intranasal (in) Routen. In der wissenschaftlichen Literatur setzt Wirksamkeit von mAbs gegen Pilzinfektionen bei Mäusen auf die Mortalität als Endpunkt, in Verbindung mit Kolonie formin Einheiten (KBE) Einschätzungen zu früheren Zeitpunkten. Survival (Zeit bis zum Tod) Studien sind notwendig, da sie am besten repräsentieren menschliche Krankheiten. So würde die Wirksamkeit unserer Maßnahmen nicht ausreichend, ohne Überlebenskurven ermittelt werden. Dies gilt auch für die Errichtung Wirksamkeit des Impfstoffes oder Prüfung von Mutanten für die Virulenz wahr. Mit Histoplasmose, die Mäuse oft als energisch, um tote über mehrere Stunden gehen. Die Kapazität einer Intervention, wie die Verwaltung eines mAb kann anfänglich zu schützen ein Tier aus Krankheit, aber die Krankheit kann Rückfall, die nicht in kurzer CFU Experimente realisiert werden. Zusätzlich zu Überleben und Pilz-Belastung Assays, untersuchen wir die entzündliche Antwort auf eine Infektion (Histologie, zelluläre Rekrutierung, Zytokin-Antworten). Für das Überleben / Zeit bis zum Tod Experimente werden die Mäuse infiziert und beobachtet mindestens zweimal täglich auf Anzeichen von Morbidität. Um zu beurteilen, Pilz-Belastung, Histopathologie und Zytokinreaktionen werden die Mäuse zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Infektion eingeschläfert. Tierversuche sind nach den Richtlinien des Institute for Animal Studies der Albert Einstein College of Medicine durchgeführt.

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Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

C57BL / 6 Mäuse wurden verwendet, um Hc Pathogenese zu studieren und bieten das beste Modell. Wir erforschen die potenziellen Vorteile der humoralen Immunität gegen diesen Pilz erzeugt und mehrere mAbs [zum Histon H2B und ein heat shock protein 60kDa], dass wir für ihre Schutzwirkung nach intraperitonealer Verabreichung getestet.

Passive Verwaltung von monoklonalen Antikörpern gegen H. capsulatum Ua Pilzpathogene

The purpose of the use of this methodology is 1) to advance our capacity to protect individuals with antibody or vaccine for preventing or treating ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

Quantitative Analysen aller Influenza Typ A Viral Hämagglutininen und Neuraminidasen mit Universal Antikörper in Einfache Slot Blot Assays

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

Die Infektion von Zebrafisch-Embryos mit Intrazelluläre bakterielle Krankheitserreger

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

Beurteilung der Anti-Pilz-Aktivität von isolierten Alveolarmakrophagen durch konfokale Mikroskopie

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistischen Transformation einer Leuchtstoff Tagged-Gens in den Opportunistic Pilzpathogenentwicklung<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

The basidiomycete Cryptococcus neoformans, an invasive opportunistic pathogen of the central nervous system, is the most frequent cause of fungal ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

Erzeugung von rekombinanten humanen IgG monoklonalen Antikörpern aus Immortalisierte Sortiert B Cells

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridomtechnologie

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

A Robust Pneumonia Modell in intaktem Immunsystem Nagetiere zur Bewertung antibakterieller Wirksamkeit gegen<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; oder<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Generation von Escape Varianten des Influenza-Virus Monoclonal Antikörper neutralisieren

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Generation von diskriminierendem menschlichen monoklonalen Antikörpern aus seltenen Antigen-spezifische B-Zellen im Blut zirkulierenden

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

Generierung von monoklonalen Antikörpern gegen Naturprodukte

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...