Name: passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens
Uploaded: 2011-02-14T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens at JoVE.com

1. La crescita di H. Capsulatum <ol><li> Preparare un armadio di biosicurezza per lavorare con il fungo pulendo l&#39;armadio con candeggina al 10% seguiti da 20 min irradiazione UV. H. capsulatum in fase di lievito richiede biosicurezza livello (BSL) pratiche II, mentre la forma dello stampo richiede BSLIII. Utilizza il form lievito nei seguenti passi. </li><li> Avanti preparare un tubo da 15 ml con 5 ml di PBS. Raccolta una colonia di H. capsulatum (ceppo ATCC Hc ...

<ol>
	<li>Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+based+ELISAs+for+cryptococcal+polysaccharide.">Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide.</a> J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).</li><li>Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+to+heat+shock+protein+60+alter+the+pathogenesis+of+Histoplasma+capsulatum.+Infect+Immun+77.">Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77.</a> , 1357-1367 (2009).</li><li>Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+function+and+molecular+mapping+of+M+antigen+in+yeast+phase+of+Histoplasma+capsulatum.">Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum.</a> PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).</li><li>Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+antibodies+and+endemic+dimorphic+fungi.">Protective antibodies and endemic dimorphic fungi.</a> Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &amp;amp, G. S., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Smith, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+laboratory+animals+to+some+injectable+anaesthetics.">Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics.</a> Lab Anim. 27, 30-39 (1993).</li></ol>

Il protocollo presentato qui dimostra che mAb di H. capsulatum può modificare il corso di sperimentale istoplasmosi murini. MAbs di antigeni di superficie di patogeni possono modificare le complesse dinamiche che si verificano durante l&#39;interazione tra un host e un agente patogeno. Questo studio stabilisce che mAbs mediare protezione in un modello murino di istoplasmosi letale quando iniettato per via intraperitoneale, e suggerisce proteine ​​candidate per lo sviluppo del vaccino, come H2B, antigene M ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome del materiale </th><th> Azienda </th></tr><tr><td> Cappa di sicurezza biologica (BSL2) </td><td></td></tr><tr><td> Provette da 15 ml </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> HAM F-12 di media </td><td> Gibco </td></tr><tr><td> 37 ° C agitatore </td><td></td></tr><tr><td> Vortice </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml provette coniche </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> 26G1 / 2 aghi </td><td> BD </td></tr><tr><td> Siringa da 10 ml </td><td> BD </td></tr><tr><td> 250 mL fiaschi </td><td></td></tr><tr><td> FPLC (Fast cromatografia liquida proteina) del sistema </td><td> GE Helthcare </td></tr><tr><td> Lettore ELISA </td><td> Biotek </td></tr><tr><td> Anestesia (ketamina e xilazina) </td><td></td></tr><tr><td> Colonna sta </td><td></td></tr><tr><td> Nylon string </td><td></td></tr><tr><td> Calore lampada </td><td></td></tr><tr><td> Filtri cellule 70μm </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> BHI piastre di agar </td><td> Gibco </td></tr></tbody></table>

passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens

Lo scopo l&#39;uso di questa metodologia è 1) per avanzare la nostra capacità di proteggere le persone con anticorpi o vaccini per prevenire o curare l&#39;istoplasmosi causata dal fungo Histoplasma capsulatum e 2) per esaminare il ruolo dei fattori di virulenza come bersaglio per la terapia. Per generare anticorpi monoclonali, i topi sono immunizzati, le risposte immunitarie sono valutati mediante un solido sistema di fase ELISA sviluppato nel nostro laboratorio, e la migliore topi risponditore vengono selezionati per l&#39;isolamento di splenociti per la fusione con cellule ibridomi. Topi C57BL / 6 sono stati ampiamente utilizzati per studiare H. patogenesi capsulatum e fornire il miglior modello per ottenere i dati richiesti. Al fine di valutare il ruolo del mAbs in infezione, i topi sono intraperitoneale somministrato sia con mAb a H. capsulatum o isotipo controllo di pari mAb e poi infettato da entrambi per via endovenosa (ev), intraperitoneale (ip), o intranasale (in) percorsi. Nella letteratura scientifica, l&#39;efficacia di anticorpi monoclonali per le infezioni fungine nei topi si basa sulla mortalità come un punto finale, in collaborazione con le unità Formin colonia (CFU) valutazioni in momenti precedenti. Sopravvivenza (tempo al decesso) studi sono necessari in quanto rappresentano al meglio la malattia umana. Quindi, l&#39;efficacia del nostro intervento non sarebbe adeguatamente essere stabilito senza curve di sopravvivenza. Questo vale anche per stabilire l&#39;efficacia del vaccino o test di mutanti per la virulenza. Con istoplasmosi, i topi vanno spesso ad essere energici per morto diverse ore. La capacità di un intervento, come la somministrazione di un mAb inizialmente può proteggere un animale dalla malattia, ma la malattia può ricaduta che non potrebbero essere realizzati in breve esperimenti CFU. Oltre a saggi di sopravvivenza e carica fungina, esaminiamo la risposta infiammatoria all&#39;infezione (istologia, reclutamento cellulare, le risposte citochine). Per la sopravvivenza / ora per esperimenti di morte, i topi sono infettati e controllati almeno due volte al giorno per i segni di morbilità. Per valutare la carica fungina, istopatologia, e le risposte delle citochine, i topi sono l&#39;eutanasia in vari momenti dopo l&#39;infezione. Gli esperimenti sugli animali vengono eseguiti secondo le linee guida dell&#39;Istituto per gli studi sugli animali dell&#39;Albert Einstein College of Medicine.

Watch this Scientific Journal Video about Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens at JoVE.com

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

Topi C57BL / 6 sono stati utilizzati per studiare la patogenesi Hc e fornire il modello migliore. Stiamo esplorando i potenziali benefici dell&#39;immunità umorale contro questo fungo e ha generato anticorpi monoclonali diversi [di istone H2B e 60kDa Heat Shock Protein] che abbiamo testato per la loro efficacia protettiva dopo la somministrazione intraperitoneale.

Amministrazione passivo di anticorpi monoclonali contro H. capsulatum E altri patogeni fungini

The purpose of the use of this methodology is 1) to advance our capacity to protect individuals with antibody or vaccine for preventing or treating ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

Analisi quantitativa di tutti influenza di tipo A Hemagglutinins e neuraminidasi virale utilizzando anticorpi Universale di saggi semplice Slot Blot

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

L&#39;infezione di embrioni di zebrafish con batteri patogeni intracellulari

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

Valutare l&#39;attività anti-fungina isolato Alveolar macrofagi dal Microscopia confocale

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Trasformazione Biolistic di una fluorescente Tagged Gene nel Opportunistic Fungal patogeni<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

The basidiomycete Cryptococcus neoformans, an invasive opportunistic pathogen of the central nervous system, is the most frequent cause of fungal ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

Generazione di ricombinante umano IgG anticorpi monoclonali da immortalizzate cellule ordinati B

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

Generazione di Murine anticorpi monoclonali da ibridomi Tecnologia

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

Una polmonite Modello robusto in immunocompetenti roditori per valutare antibatterico efficacia contro<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; o<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Generazione di varianti di fuga di neutralizzare l'Influenza Virus anticorpi monoclonali

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Generazione di anticorpi monoclonali umani discriminante da rari B antigene-specifiche cellule circolanti nel sangue

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

Generazione di anticorpi monoclonali contro prodotti naturali

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...