Name: passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens
Uploaded: 2011-02-14T17:00:00
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1。 H.の成長Capsulatum <ol><li> 20分の紫外線照射で10％の漂白剤でキャビネットをクリーニングして菌を使用のためのバイオセーフティキャビネットを準備します。H.金型のフォームがBSLIIIを必要としながら酵母の段階でcapsulatumは 、 バイオセーフティレベル（BSL）IIの実践が必要です。次の手順で、酵母のフォームを使用してください。 </li><li>次にPBS 5 ml...

<ol>
	<li>Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+based+ELISAs+for+cryptococcal+polysaccharide.">Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide.</a> J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).</li><li>Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+to+heat+shock+protein+60+alter+the+pathogenesis+of+Histoplasma+capsulatum.+Infect+Immun+77.">Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77.</a> , 1357-1367 (2009).</li><li>Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+function+and+molecular+mapping+of+M+antigen+in+yeast+phase+of+Histoplasma+capsulatum.">Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum.</a> PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).</li><li>Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+antibodies+and+endemic+dimorphic+fungi.">Protective antibodies and endemic dimorphic fungi.</a> Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &amp;amp, G. S., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Smith, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+laboratory+animals+to+some+injectable+anaesthetics.">Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics.</a> Lab Anim. 27, 30-39 (1993).</li></ol>

ここで紹介するプロトコールは、モノクローナル抗体がH.するということを示していますcapsulatumは、実験マウスヒストプラズマ症のコースを変更することができます。病原体の細胞表面抗原に対するモノクローナル抗体は、宿主と病原体の相互作用中に発生する複雑なダイナミクスを変更することができます。本研究では、腹腔内注射したときmAbが致死ヒストプラズマ症のマウ?...

<table border="1"><tbody><tr><th>マテリアルの名前</th><th>会社</th></tr><tr><td>生物学的安全キャビネット（BSL2） </td><td></td></tr><tr><td> 15 mLコニカルチューブ</td><td>ファルコン、BD </td></tr><tr><td> HAM F - 12培地</td><td>ギブコ</td></tr><tr><td> 37℃シェーカー</td><td></td></tr><tr><td>渦</td><td></td></tr><tr><td> 50 mLコニカルチューブ</td><td>ファルコン、BD </td></tr><tr><td> 26G1 / 2針</td><td> BD </td></tr><tr><td> 10 mLの注射器</td><td> BD </td></tr><tr><td> 250mLのフラスコ</td><td></td></tr><tr><td> FPLC（ 高速タンパク質液体クロマトグラフィー ）システム</td><td> GE Helthcare </td></tr><tr><td> ELISAリーダー</td><td> BioTekの</td></tr><tr><td>麻酔（ケタミンおよびキシラジン） </td><td></td></tr><tr><td>カラムスタンド</td><td></td></tr><tr><td>ナイロンストリング</td><td></td></tr><tr><td>熱ランプ</td><td></td></tr><tr><td> 70μmセルストレーナー</td><td>ファルコン、BD </td></tr><tr><td> BHI寒天プレート</td><td>ギブコ</td></tr></tbody></table>

passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens

この方法論の利用目的は、抗体または真菌ヒストプラスマカプスラーツム 、2）治療の標的として、病原性因子の役割を検討することによって引き起こされるヒストプラズマ症を予防または治療用ワクチンを持つ個人を保護するために私たちの能力を前進させる）1です。モノクローナル抗体を生成するには、マウスを免疫し、免疫応答は、私たちの研究室で開発された固相ELISAシステムを用いて評価され、最高の応答者のマウスハイブリドーマ細胞との融合の脾細胞の単離のために選択されています。 C57BL / 6マウスは広範囲にH.を研究するために使用されているcapsulatum病因と必要なデータを取得するための最良のモデルを提供しています。感染症におけるモノクローナル抗体の役割を評価するためには、マウス腹腔内には、H.するモノクローナル抗体のいずれかで投与されていますcapsulatumまたはアイソタイプは、静脈内（IV）、腹腔内（ip）、または鼻腔内（の）路線で対照mAbを一致して感染する。科学文献では、マウスの真菌感染症に対するモノクローナル抗体の有効性は、以前の時点でコロニーのforminユニット（CFU）の評価と組み合わせて、エンドポイントとして死亡率に依存しています。彼らは最高の人間の病気を表すように生存（死亡までの時間）の研究が必要である。したがって、我々の介入の有効性は十分に生存曲線なしで確立されませんでした。これは、ワクチンや病原性変異体のテストの有効性を確立する場合も同様です。ヒストプラスマ症で、マウスは、しばしば数時間以上の死者への精力的であることから行く。そのような抗体の投与等の介入の容量は最初に病気から動物を保護することがありますが、病気が短いCFUの実験で再発を実現できないということができる。生存と真菌負担アッセイに加えて、我々は感染症（組織、細胞の採用、サイトカイン応答）に炎症反応を調べる。生存/死の実験に時間のために、マウスは罹患率の兆候を少なくとも1日2回感染して監視されます。真菌の負担、組織病理学、およびサイトカイン応答を評価するために、マウスは感染後の様々な時点で安楽死されています。動物実験は医学のアルバートアインシュタイン大学の動物学研究所のガイドラインにしたがって実行されます。

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Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

C57BL / 6マウスがHcの病因を研究し、最適なモデルを提供するために使用されています。我々は、この菌に対する体液性免疫の潜在的な利点を模索し、[ヒストンH2Bと熱ショック蛋白質の60kDaへ]いくつかのモノクローナル抗体を生成している我々は腹腔内投与後、その予防効果を試験すること。

に対するモノクローナル抗体の受動的な管理 H. capsulatumとその他の真菌病原体

The purpose of the use of this methodology is 1) to advance our capacity to protect individuals with antibody or vaccine for preventing or treating ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

すべてのインフルエンザA型の定量的な分析シンプルなスロットブロットアッセイでユニバーサル抗体を用いたウイルスHemagglutininsとノイラミニダーゼ

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

細胞内細菌性病原体を持つゼブラフィッシュ胚の感染

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

共焦点顕微鏡による絶縁型肺胞マクロファージの抗真菌活性を評価する

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

日和見菌病原体への蛍光タグ付き遺伝子のバイオリスティック変容<em&gt;クリプトコックス·ネオフォルマンス</em

The basidiomycete Cryptococcus neoformans, an invasive opportunistic pathogen of the central nervous system, is the most frequent cause of fungal ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

不死化ソートB細胞からの組換えヒトIgGモノクローナル抗体の作製

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

ハイブリドーマ技術によってマウスモノクローナル抗体の作製

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

免疫担当げっ歯類で堅牢な肺炎モデルはに対して抗菌有効性を評価するために<i&gt; S。ニューモニエ</i&gt;、<i&gt; H。インフルエンザ</i&gt;、<i&gt; K。ニューモニエ</i&gt;、<em&gt; P。緑膿菌</em&gt;または<em&gt; A。バウマニ</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

エスケープ中和抗体でインフルエンザ ウイルスの亜種の世代

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

まれな抗原特異的 B 細胞血液の循環から弁別に対するモノクローナル抗体の生成

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

天然物に対するモノクローナル抗体の作製

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...