Name: passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens
Uploaded: 2011-02-14T17:00:00
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1. Crescimento de H. Capsulatum <ol><li> Prepare um gabinete de biossegurança para o trabalho com o fungo com a limpeza do gabinete com lixívia a 10%, seguido por 20 min de irradiação UV. H. capsulatum na fase leveduriforme Biossegurança exige nível práticas (BSL) II, enquanto a forma de moldes requer BSLIII. Use o formulário de leveduras nas etapas seguintes. </li><li> Em seguida preparar um tubo cônico de 15 ml com 5 ml de PBS. Colheita uma colônia de <em...

<ol>
	<li>Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+based+ELISAs+for+cryptococcal+polysaccharide.">Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide.</a> J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).</li><li>Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+to+heat+shock+protein+60+alter+the+pathogenesis+of+Histoplasma+capsulatum.+Infect+Immun+77.">Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77.</a> , 1357-1367 (2009).</li><li>Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+function+and+molecular+mapping+of+M+antigen+in+yeast+phase+of+Histoplasma+capsulatum.">Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum.</a> PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).</li><li>Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+antibodies+and+endemic+dimorphic+fungi.">Protective antibodies and endemic dimorphic fungi.</a> Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &amp;amp, G. S., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Smith, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+laboratory+animals+to+some+injectable+anaesthetics.">Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics.</a> Lab Anim. 27, 30-39 (1993).</li></ol>

O protocolo aqui apresentado demonstra que mAb de H. capsulatum pode modificar o curso de histoplasmose murina experimental. MAbs aos antígenos de superfície celular de patógenos pode modificar a dinâmica complexa que ocorrem durante a interação entre um host e um patógeno. Este estudo estabelece que mAbs mediar proteção em um modelo murino de histoplasmose letal quando injetada por via intraperitoneal, e sugere proteínas candidato para o desenvolvimento de vacinas, como H2B, M antígeno (superfície ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome de Material </th><th> Companhia </th></tr><tr><td> Cabines de segurança biológica (BSL2) </td><td></td></tr><tr><td> 15 mL tubos cônicos </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> HAM médio F-12 </td><td> Gibco </td></tr><tr><td> 37 ° C shaker </td><td></td></tr><tr><td> Vórtice </td><td></td></tr><tr><td> 50 mL tubos cônicos </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> 26G1 / 2 agulha </td><td> BD </td></tr><tr><td> Seringa de 10 mL </td><td> BD </td></tr><tr><td> Balões de 250 ml </td><td></td></tr><tr><td> FPLC sistema (cromatografia líquida de rápida proteína) </td><td> GE Helthcare </td></tr><tr><td> Leitor de ELISA </td><td> Biotek </td></tr><tr><td> Anestesia (ketamina e xilazina) </td><td></td></tr><tr><td> Coluna está </td><td></td></tr><tr><td> Corda de nylon </td><td></td></tr><tr><td> Lâmpada de calor </td><td></td></tr><tr><td> 70μm filtros celular </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> Agar placas BHI </td><td> Gibco </td></tr></tbody></table>

passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens

O objetivo do uso desta metodologia é 1) para avançar a nossa capacidade de proteger os indivíduos com anticorpo ou vacina para prevenir ou tratar histoplasmose causada pelo fungo Histoplasma capsulatum e 2) para examinar o papel de fatores de virulência como alvo para a terapia. Para gerar mAbs, os camundongos são imunizados, as respostas imunes são avaliados através de um sistema de ELISA em fase sólida desenvolvido em nosso laboratório, ea melhor resposta ratos são selecionados para isolamento de esplenócitos para a fusão com células de hibridoma. Camundongos C57BL / 6 têm sido amplamente utilizados para estudar H. patogênese capsulatum e fornecer o melhor modelo para a obtenção dos dados necessários. A fim de avaliar o papel do mAbs em infecção, os ratos são administrados por via intraperitoneal com um mAb para H. capsulatum ou combinados isotipo controle mAb e infectados por um ou outro intravenosa (iv), intraperitoneal (ip), ou intranasal (in) rotas. Na literatura científica, a eficácia de mAbs para infecções fúngicas em camundongos depende de mortalidade como um ponto final, em conjunto com unidades formadoras de colónias formin (CFU) avaliações em momentos anteriores. Sobrevida (tempo de morte) são necessários estudos em que melhor representam a doença humana. Assim, a eficácia da nossa intervenção não ser adequadamente estabelecida sem curvas de sobrevivência. Isto também é verdade para estabelecer a eficácia da vacina ou teste de mutantes para a virulência. Com histoplasmose, os ratos vão frequentemente de ser energético para mortos durante várias horas. A capacidade de uma intervenção como a administração de um mAb podem, inicialmente, proteger um animal de doença, mas a doença pode recaída que não seria realizado em experimentos de curta UFC. Além de sobrevivência e ensaios de carga fúngica, examinamos as respostas inflamatórias à infecção (histologia, recrutamento celular, as respostas de citocinas). Para a sobrevivência / hora para experiências de morte, os camundongos são infectados e monitoradas pelo menos duas vezes por dia para sinais de morbidade. Para avaliar a carga fúngica, histopatologia, e as respostas de citocinas, os ratos são sacrificados em vários momentos após a infecção. Experiências com animais são realizadas de acordo com as diretrizes do Instituto de Estudos Animal do Albert Einstein College of Medicine.

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Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

Camundongos C57BL / 6 foram usados ​​para estudar a patogênese Hc e fornecer o melhor modelo. Estamos explorando os benefícios potenciais da imunidade humoral contra este fungo e gerou várias mAbs [a histona H2B e um calor 60kDa proteína de choque] que testamos para sua eficácia protectora após a administração intraperitoneal.

Administração passiva de anticorpos monoclonais contra H. capsulatum E outros patógenos fúngicos

The purpose of the use of this methodology is 1) to advance our capacity to protect individuals with antibody or vaccine for preventing or treating ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

Análise quantitativa de todos Influenza Tipo A Hemaglutininas Virais e neuraminidases usando anticorpos Universal em Ensaios Blot simples slot

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Imunologia e Infecção

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

A infecção de embriões de zebrafish com patógenos bacterianos intracelulares

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

Avaliar a atividade anti-fúngica isolada de macrófagos alveolares por microscopia confocal

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Transformação Biolistic de uma fluorescente Tagged Gene para o oportunista fúngica Pathogen<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

The basidiomycete Cryptococcus neoformans, an invasive opportunistic pathogen of the central nervous system, is the most frequent cause of fungal ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

Geração de IgG Humana Recombinante de Anticorpos Monoclonais As células seleccionadas a partir de B imortalizadas

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

Geração de anticorpos monoclonais murinos pelo hibridoma Tecnologia

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

Um Modelo Pneumonia robusta em imunocompetentes Roedores para avaliar antibacteriano Eficácia contra<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; ou<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Geração de variantes de fuga de neutralizar os anticorpos monoclonais de vírus da gripe

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Geração dos anticorpos monoclonais humanos discriminativa de rara B antígeno-específicas células circulantes no sangue

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

Geração de anticorpos monoclonais contra produtos naturais

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...