Name: passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens
Uploaded: 2011-02-14T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens at JoVE.com

1. Tillväxten av H. Capsulatum <ol><li> Förbered en biosäkerhet skåp för arbetet med svampen genom att rengöra skåpet med 10% blekmedel följt av 20 min UV-strålning. H. capsulatum i jästen fas kräver biosäkerhetsnivå (BSL) II praxis, medan formen form kräver BSLIII. Använd jäst form i följande steg. </li><li> Nästa förbereda en 15 ml koniska rör med 5 ml PBS. Harvest en koloni av H. capsulatum (stam Hc ATCC G217B) från en BHI blod agarplatta [gl...

<ol>
	<li>Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+based+ELISAs+for+cryptococcal+polysaccharide.">Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide.</a> J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).</li><li>Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+to+heat+shock+protein+60+alter+the+pathogenesis+of+Histoplasma+capsulatum.+Infect+Immun+77.">Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77.</a> , 1357-1367 (2009).</li><li>Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+function+and+molecular+mapping+of+M+antigen+in+yeast+phase+of+Histoplasma+capsulatum.">Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum.</a> PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).</li><li>Nosanchuk, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+antibodies+and+endemic+dimorphic+fungi.">Protective antibodies and endemic dimorphic fungi.</a> Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &amp;amp, G. S., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+a+cell+surface+histone-like+protein+protect+against+Histoplasma+capsulatum.">Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum.</a> J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).</li><li>Smith, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+laboratory+animals+to+some+injectable+anaesthetics.">Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics.</a> Lab Anim. 27, 30-39 (1993).</li></ol>

Protokollet presenteras här visar att MAB till H. capsulatum kan ändra loppet av experimentella murina histoplasmos. MAbs till antigener på cellytan av patogener kan ändra den komplicerade dynamiken som uppstår under samspelet mellan värd och patogen. Denna studie konstaterar att MAbs medla skydd i en mus modell av dödliga histoplasmos när det injiceras intraperitonealt, och det antyder kandidat proteiner för utvecklingen av vaccin, såsom H2B, M antigen (yta katalas) (3) och Hsp60. In vivo minskad til...

<table border="1"><tbody><tr><th> Namn på material </th><th> Företag </th></tr><tr><td> Biologisk säkerhetsbänk (BSL2) </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml koniska rör </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> HAM F-12 medelstora </td><td> Gibco </td></tr><tr><td> 37 ° C shaker </td><td></td></tr><tr><td> Vortex </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml koniska rör </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> 26G1 / 2 nål </td><td> BD </td></tr><tr><td> 10 ml spruta </td><td> BD </td></tr><tr><td> 250 ml kolvar </td><td></td></tr><tr><td> FPLC (Fast protein vätskekromatografi) system </td><td> GE Helthcare </td></tr><tr><td> ELISA-läsare </td><td> Biotek </td></tr><tr><td> Anestesi (ketamin och xylazin) </td><td></td></tr><tr><td> Kolumn står </td><td></td></tr><tr><td> Nylon sträng </td><td></td></tr><tr><td> Värmelampa </td><td></td></tr><tr><td> 70μm cell silar </td><td> Falcon, BD </td></tr><tr><td> BHI agarplattor </td><td> Gibco </td></tr></tbody></table>

passive administration of monoclonal antibodies against h. capsulatum and others fungal pathogens

Syftet med användningen av denna metod är 1) att avancera vår förmåga att skydda enskilda med antikroppar eller vaccin för att förebygga eller behandla histoplasmos orsakas av svampen histoplasma capsulatum och 2) att undersöka betydelsen av virulensfaktorer som mål för behandling. För att generera MAbs, möss är vaccinerade, är immunsvaret bedömas med en fast fas ELISA system som utvecklats i vårt laboratorium, och de bästa responder möss väljs för isolering av splenocytes för fusion med hybridom celler. C57BL / 6 möss har i stor utsträckning använts för att studera H. capsulatum patogenes och ge den bästa modellen för att erhålla de nödvändiga uppgifterna. För att bedöma den roll som MAbs i infektionen, möss är intraperitonealt administreras med antingen mAb till H. capsulatum eller isotyp matchad kontrollgrupp MAB och sedan smittade av antingen intravenöst (iv), intraperitoneal (ip) eller intranasal (i) rutter. I den vetenskapliga litteraturen, bygger effekten av MAbs mot svampinfektioner i möss på mortalitet som en slutpunkt, i samband med enheter koloni formin (CFU) bedömningar vid tidigare tidpunkter. Överlevnad (tid till dödsfall) studier är nödvändiga som de bäst representerar mänskliga sjukdomar. Således skulle effekten av våra insatser inte tillräckligt fastställas utan överlevnadskurvorna. Detta gäller även för att fastställa effekten av vaccinet eller testning av mutanter för virulens. Med histoplasmos, mössen ofta gå från att vara energisk för att döda under flera timmar. Kapaciteten i en intervention som administrationen av en mAb kan initialt skydda ett djur från sjukdomen, men sjukdomen kan återfall som inte skulle realiseras i korta CFU experiment. Förutom överlevnad och svamp analyser börda undersöker vi inflammatoriska svar på infektion (histologi, cell-rekrytering, cytokin svar). För överlevnad / tid till död experiment, är de möss som blivit infekterade och kontrolleras minst två gånger dagligen för tecken på sjuklighet. För att bedöma svamp börda, histopatologi och svar cytokin, är de möss euthanized vid olika tidpunkter efter infektion. Djurförsök utförs enligt riktlinjerna för Institute for Animal Studier av Albert Einstein College of Medicine.

Watch this Scientific Journal Video about Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens at JoVE.com

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

C57BL / 6 möss har använts för att studera Hc patogenes och ge den bästa modellen. Vi undersöker de potentiella fördelarna av humorala immuniteten mot denna svamp och genererade flera MAbs [till histon H2B och ett heat shock 60kDa protein] som vi testade för deras skyddseffekt efter intraperitoneal administrering.

Passiv Administrering av monoklonala antikroppar mot H. capsulatum M.fl. svamppatogener

The purpose of the use of this methodology is 1) to advance our capacity to protect individuals with antibody or vaccine for preventing or treating ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Passive Administration of Monoclonal Antibodies Against H. capsulatum and Others Fungal Pathogens

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

Kvantitativa analyser av alla influensa typ A Viral Hemagglutinins och neuroaminidaser använda Universal antikroppar i enkla mätmetoder Slot Blot

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

Infektion av zebrafiskembryon med intracellulära mängden sjukdomsalstrande bakterier

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

Bedöma Antifungal aktivitet av isolerat alveolära makrofager av konfokalmikroskopi

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistisk Transformation av en fluorescerande taggade gen i Opportunistic svamppatogen<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

The basidiomycete Cryptococcus neoformans, an invasive opportunistic pathogen of the central nervous system, is the most frequent cause of fungal ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

Framställning av rekombinant human IgG monoklonala antikroppar från Immortaliserade Sorterat B-celler

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

Generering av murina monoklonala antikroppar genom hybridomteknik

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

En robust Lunginflammation Model Immunokompetenta Gnagare att utvärdera Antibakteriell effekt mot<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; eller<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Generation av Escape varianter av neutraliserande influensa Virus monoklonala antikroppar

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Generation av diskriminerande humana monoklonala antikroppar från sällsynta Antigen-specifika B-celler som cirkulerar i blodet

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

Generation av monoklonala antikroppar mot naturliga produkter

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...