Name: orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents
Uploaded: 2011-03-07T13:30:00
Duration: 7 min 10 s
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Ce travail a été soutenu par l&#39;Institut national des maladies neurologiques et des maladies (R01 NS048353 à SLC), l&#39;Institut national du cancer (R01 CA122804 à SLC, R01 CA134773 à Kevin A. Roth et SLC et CA13148-35 à KRZ) et le ministère de Défense (X81XWH-09-1-0086 à SLC). Fonds de soutien au fonctionnement du Centre UAB Comprehensive Cancer animale installation imagerie du petit partagés ont été fournis par un Core Support NCI subvention (P30 CA13148-35; E. Partridge, PI). Nous remercions l&#39;Alabama Neuroscience Blueprint centre-ville (P30 NS57098) et l&#39;UAB Neuroscience centre-ville (P30 NS47466) pour leur aide. Le contenu est uniquement la responsabilité de leurs auteurs et ne représentent pas nécessairement les vues officielles de l&#39;Institut National de la Santé ou le ministère de la Défense.

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La méthode détaillée orthotopique xénogreffe présenté ici est celui que nous avons développés en utilisant des cellules MPNST ST88-14, une ligne qui est largement utilisé dans les études de ces NF1 associée tumeurs des gaines nerveuses périphériques. Toutefois, cette méthodologie est facilement adaptable pour des études précliniques avec d&#39;autres lignées cellulaires MPNST. Par exemple, nous avons également procédé orthotopique xénogreffe avec STS-26T 10 cellules, une ligne dérivée d&#39;une sporadique MPNST et T265-2c 11 cellules, qui sont issus d&#39;un MPNST NF1-associé, avec un succès similaire à celui observé avec ST88 -14 cellules. Cela dit, nous notons que les conditions exactes que nous décrivons ici pour orthotopique xénogreffe de cellules ST88-14 ne peuvent pas être directement adopté pour le greffage de lignes MPNST autres. Au lieu de cela, les paramètres clés de la méthodologie doit être déterminé empiriquement pour chaque lignée cellulaire. Ces paramètres incluent le nombre de cellules greffées MPNST d&#39;abord, le temps alloué pour le développement du greffon et, dans une moindre mesure, le volume dans lequel les cellules tumorales sont injectées. Pour établir ces paramètres pour une nouvelle ligne, nous greffons des groupes de souris (5 souris par groupe) avec 10 3 à 5 x 10 6 cellules tumorales, en vérifiant deux concentrations de cellules pour chaque ordre de grandeur (c&#39;est à dire, 10 3 cellules, 5 x 10 3 cellules, 10 4 cellules, 5 x 10 4 cellules, etc.) Plus grand nombre de cellules tumorales (&gt; 10 6) doit être injecté dans un volume plus important, nous avons constaté que jusqu&#39;à 5 ml peuvent être injectés sans perte de cellules du nerf greffé. Nous avons également constaté que pas plus de 5 x 10 6 cellules tumorales par 5 ml de volume peut être injecté sous forme de suspensions denses de plus en plus enclins à cisaillement qui tue les cellules tumorales. Nous suivons ces souris au moins jusqu&#39;à trois animaux au sein de chaque groupe ont des tumeurs palpables, à quel point nous résilions ce groupe et d&#39;examiner le nerf histologiquement pour confirmer la croissance du greffon. Évidemment, le temps nécessaire pour atteindre ce point sera différent, selon le nombre de cellules injectées, en général, nous cherchons une concentration de cellules qui atteindra maximale permise croissance tumorale dans les 30-60 jours. Une croissance plus rapide, il peut être difficile à atteindre des concentrations thérapeutiques efficaces avant la résiliation de l&#39;expérience et / ou empêcher la collecte de suffisamment de points de données d&#39;imagerie par bioluminescence au cours des expériences. Un cours de temps plus de 60 jours rend le réglage des paramètres expérimentaux lourds et prolonge inutilement la durée de l&#39;expérimentation prévue. Enfin, nous aimerions aussi noter que nous avons utilisé cette méthodologie orthotopique xénogreffe avec ST88-14 cellules greffées à des souris NIH III pour démontrer l&#39;efficacité thérapeutique du tamoxifène 6. Une description détaillée des méthodes que nous utilisons pour évaluer systématiquement les effets des agents thérapeutiques candidats sur des xénogreffes orthotopique peuvent être trouvés dans ce manuscrit. Il a également été démontré que les cellules neurofibrome peut être avec succès greffé dans des nerfs périphériques 12, ce qui suggère que, avec les adaptations, les procédures décrites dans ce protocole peut être utilisé pour effectuer des essais précliniques avec des agents thérapeutiques candidats dirigée contre neurofibromes.

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Foxchase outbred SCID mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River </td>
<td>#236</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NIH III mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Taconic </td>
<td>#NIHBNX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NOD-SCID&gamma; mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson Laboratories </td>
<td>#005557</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Stripper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>25-056-cl</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vetbond surgical glue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>3M</td>
<td>1469SB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hamilton syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#80030</td>
<td>10 &mu;L volume</td>
</tr>
<tr>
<td>Hamilton syringe needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#7803-05</td>
<td>33 Ga., 0.5 inch, PT4 (custom made)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ear tags</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>National Band and Ear Tag Co.</td>
<td>1005-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ophthalmic ointment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dechra</td>
<td>NDC 17033-211-38</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents

Bien que dans les écrans vitro sont essentiels pour l&#39;identification initiale des agents thérapeutiques candidats, une évaluation rigoureuse de la capacité du médicament à inhiber la croissance tumorale doivent être effectuées dans un modèle animal approprié. Le type de modèle animal qui convient le mieux à cette fin est un sujet de discussion intense. Certaines preuves indiquent que des essais précliniques portant sur ​​les effets des médicaments sur les tumeurs provenant de souris transgéniques sont plus prédictifs de l&#39;issue clinique 1 et donc agents thérapeutiques candidats sont souvent testés dans ces modèles. Malheureusement, les modèles transgéniques ne sont pas disponibles pour de nombreux types de tumeurs. En outre, les modèles transgéniques ont souvent d&#39;autres limitations telles que des préoccupations quant à la façon dont les modèles tumoraux de souris son homologue humain, une pénétrance incomplète du phénotype tumoral et une incapacité à prédire quand les tumeurs se développent. En conséquence, de nombreux chercheurs utilisent des modèles de xénogreffe (cellules tumorales humaines greffées dans des souris immunodéficientes) pour des essais précliniques, le cas échéant des modèles tumoraux transgéniques ne sont pas disponibles. Même si les modèles transgéniques sont disponibles, ils sont souvent en partenariat avec des modèles de xénogreffe comme la dernière de faciliter la détermination rapide des gammes thérapeutiques. En outre, ce partenariat permet une comparaison de l&#39;efficacité de l&#39;agent dans les tumeurs transgéniques et authentique des cellules tumorales humaines. Historiquement, xénogreffe a souvent été effectué en injectant les cellules tumorales par voie sous cutanée (xénogreffes ectopiques). Cette technique est rapide et reproductible, relativement peu coûteux et permet la quantification de la croissance tumorale en continu pendant la période thérapeutique 2. Toutefois, l&#39;espace sous-cutané n&#39;est pas le microenvironnement normale pour la plupart des tumeurs et donc les résultats obtenus avec xénogreffe ectopique peut être trompeuse en raison de facteurs tels que l&#39;absence d&#39;organe de l&#39;expression spécifique du tissu hôte et des gènes tumoraux. Il a ainsi été fortement recommandé que les études de la greffe ectopique être remplacées ou complétées par des études dans lesquelles des cellules tumorales humaines sont greffés dans leur tissu d&#39;origine (xénogreffe orthotopique) 2. Malheureusement, la mise en œuvre de cette recommandation est souvent contrarié par le fait que les méthodologies xénogreffe orthotopique n&#39;ont pas encore été développé pour de nombreux types de tumeurs. Malignes tumeurs des gaines nerveuses périphériques (MPNSTs) sont des sarcomes très agressif qui se produisent sporadiquement ou en association avec une neurofibromatose de type 1 3 et le plus souvent se poser dans le nerf sciatique 4. Nous décrivons ici une méthode techniquement simple dans lequel la luciférase de luciole-taggés cellules humaines sont MPNST orthopically xénogreffées dans le nerf sciatique de souris immunodéficientes. Notre approche visant à évaluer le succès de la procédure de greffe chez des animaux individuels et ultérieures de randomisation non biaisée en groupes d&#39;étude est également discuté.

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Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

Une méthode pour greffer de manière fiable la luciférase taggés humaines malignes des cellules nerveuses périphériques gaine de la tumeur dans le nerf sciatique de souris immunodéficientes est décrite. L&#39;utilisation de l&#39;imagerie par bioluminescence pour démontrer établissement correct des greffes tumorales et les critères de la ségrégation aléatoire des animaux dans des groupes d&#39;étude sont également discutées.

Orthotopique xénogreffe de l&#39;homme-luciférase Tagged malin cellules nerveuses périphériques tumeur Gaine pour In vivo Test d&#39;agents thérapeutiques candidats

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to ...

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Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

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