Name: orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents
Uploaded: 2011-03-07T13:30:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents at JoVE.c

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי למחלות נוירולוגיות ושבץ (R01 NS048353 כדי SLC), המכון הלאומי לסרטן (R01 CA122804 כדי SLC, R01 CA134773 לקווין א רוט SLC ו CA13148-35 ל KRZ) ואת המחלקה ההגנה (X81XWH-09-1-0086 ל SLC). קרנות התומכות פעולה של מקיף במרכז לחקר הסרטן UAB במתקן הדמיה קטנים בעלי חיים משותפים סופקו על ידי Core NCI להעניק תמיכה (P30 CA13148-35; א פרטרידג&#39;, PI). אנו מודים Neuroscience אלבמה Blueprint Core Center (P30 NS57098) ואת Neuroscience UAB Core Center (P30 NS47466) על עזרתם. התוכן הוא באחריות הבלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצגים את הדעות הרשמיות של מכון הבריאות הלאומי או משרד ההגנה.

<ol>
	<li>Rosenberg, M. P., Bortner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+transgenic+and+knockout+animal+models+should+be+used+(for+drug+efficacy+studies+in+cancer).">Why transgenic and knockout animal models should be used (for drug efficacy studies in cancer).</a> Cancer Met. Rev. 17, 295-299 (1999).</li><li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice.">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Met. Rev. 17, 279-284 (1999).</li><li>Carroll, S. L., Ratner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+does+the+Schwann+cell+lineage+form+tumors+in+NF1?.">How does the Schwann cell lineage form tumors in NF1?.</a> Glia. 56, 1590-1605 (2008).</li><li>Woodruff, J. M., Kourea, H. P., Louis, D. N., Scheithauer, B. W., Kleihues, P., Cavenee, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pathology and Genetics of Tumours of the Nervous System. , 172-174 (2000).</li><li>DeClue, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+expression+in+neurofibromatosis+type+1-related+tumors+and+NF1+animal+models.">Epidermal growth factor receptor expression in neurofibromatosis type 1-related tumors and NF1 animal models.</a> J. Clin. Invest. 105, 1233-1241 (2000).</li><li>Byer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tamoxifen+inhibits+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+growth+via+an+estrogen+receptor-independent+mechanism.">Tamoxifen inhibits malignant peripheral nerve sheath tumor growth via an estrogen receptor-independent mechanism.</a> Neuro-Oncology. , (2010).</li><li>Zinn, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+in+small+animals.">Noninvasive bioluminescence imaging in small animals.</a> ILAR J. 49, 103-115 (2008).</li><li>Wu, J. C., Sundaresan, G., Iyer, M., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+optical+imaging+of+firefly+luciferase+reporter+gene+expression+in+skeletal+muscles+of+living+mice.">Noninvasive optical imaging of firefly luciferase reporter gene expression in skeletal muscles of living mice.</a> Mol. Therapy. 4, 297-306 (2001).</li><li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis.">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol. Biol. 292, 285-296 (2005).</li><li>Dahlberg, W. K., Little, J. B., Fletcher, J. A., Suit, H. D., Okunieff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiosensitivity+in+vitro+of+human+soft+tissue+sarcoma+cell+lines+and+skin+fibroblasts+derived+from+the+same+patients.">Radiosensitivity in vitro of human soft tissue sarcoma cell lines and skin fibroblasts derived from the same patients.</a> Int. J. Radiat. Biol. 63, 191-198 (1993).</li><li>Badache, A., DeVries, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibrosarcoma-derived+Schwann+cells+overexpress+platelet-derived+growth+factor+(PDGF)+receptors+and+are+induced+to+proliferate+by+PDGF.">Neurofibrosarcoma-derived Schwann cells overexpress platelet-derived growth factor (PDGF) receptors and are induced to proliferate by PDGF.</a> BB. J. Cell. Physiol. 177, 334-342 (1998).</li><li>Muir, D., Neubauer, D., Lim, I. T., Yachnis, A. T., Wallace, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumorigenic+properties+of+neurofibromin-deficient+neurofibroma+Schwann+cells.">Tumorigenic properties of neurofibromin-deficient neurofibroma Schwann cells.</a> Am. J. Pathol. 158, 501-513 (2001).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

השיטה מפורט xenografting orthotopic המוצג כאן הוא אחד שפיתחנו באמצעות ST88-14 תאים MPNST, קו שנמצא בשימוש נרחב במחקרים אלה NF1 הקשורים גידולים מעטפת העצב ההיקפיים. עם זאת, מתודולוגיה זו ניתנת להתאמה בקלות מחקרים פרה עם שורות תאים אחרים MPNST. למשל, יש לנו גם ביצע orthotopic xenografting עם STS-26T 10 תאים, קו נגזר MPNST לסירוגין המתרחשים T265 ו-2c 11 תאים, אשר נגזרות MPNST NF1 הקשורים, עם הצלחה דומה לזו שראינו עם ST88 -14 תאים. אחרי שאמרתי את זה, היינו מציינים כי התנאים המדויקים אנו מתארים כאן orthotopic xenografting של ST88-14 תאים לא ניתן לאמץ ישירות עבור השתלת קווי MPNST אחרים. במקום זאת, הפרמטרים העיקריים של המתודולוגיה צריכה להיקבע באופן אמפירי לכל שורה התא. פרמטרים אלה כוללים את מספר התאים MPNST מורכבים בתחילה, את הזמן המותר עבור פיתוח שוחד, ובמידה פחותה, נפח שבו תאים את הגידול מוזרקים. כדי לבסס את הפרמטרים הללו עבור קו חדש, אנחנו קבוצות שתל של עכברים (5 עכברים בכל קבוצה) עם 03-05 אוקטובר x 10 6 תאים סרטניים, בדיקת שני ריכוזי של תאים עבור כל הזמנה של גודל (כלומר, 10 3 תאים, 5 x 10 3 תאים, 4 תאים 10, 5 x 10 4 תאים וכו &#39;). מספרים גדולים של תאים סרטניים (&gt; 10 6) חייב להיות מוזרק בנפח גדול יותר, מצאנו כי עד 5 מ&quot;ל ניתן להזריק ללא אובדן תאים העצב מורכבים. מצאנו גם כי לא יותר מ 5 x 10 6 תאים סרטניים לכל נפח 5 מ&quot;ל ניתן להזריק כמו המתלים נוטה להיות צפוף יותר ויותר גזירה אשר הורג את התאים הסרטניים. אנו בצע את העכברים עד לפחות שלוש חיות בתוך כל קבוצה יש גידולים מוחשית, ובנקודה זו אנו לסיים כי הקבוצה ולבחון את העצב בהיסטולוגיה לאשר צמיחה השתל. כמובן, הזמן הנדרש כדי להגיע לנקודה זו יהיה שונה, תלוי במספר התאים מוזרקים, באופן כללי, אנו מחפשים ריכוז של תאים יגיע הגידול המרבי המותר צמיחה בתוך 30-60 ימים. צמיחה מהירה יותר יכול לעשות את זה קשה להשיג ריכוזי טיפולית יעילה לפני תום הניסוי ו / או למנוע את איסוף datapoints הדמיה מספקת פליטת אור במהלך הניסויים. כמובן זמן רב יותר מאשר 60 ימים עושה התאמת הפרמטרים ניסיוני מסורבל ושלא לצורך מאריכה את משך הניסוי המתוכנן. לבסוף, היינו גם לציין כי השתמשנו במתודולוגיה זו xenografting orthotopic עם ST88-14 תאים מורכבים לעכברים NIH השלישי כדי להדגים את היעילות הטיפולית של טמוקסיפן 6. תיאור מפורט של שיטות אנו משתמשים באופן שגרתי כדי להעריך את ההשפעות של סוכני מועמד טיפולית על xenografts orthotopic ניתן למצוא את כתב היד הזה. כמו כן הוכח כי תאי neurofibroma יכול להיות מורכבים בהצלחה העצבים ההיקפית 12, דבר המצביע על כך, עם שינויים, הנהלים המפורטים בפרוטוקול זה יכול לשמש כדי לבצע ניסויים פרה עם סוכנים מועמד טיפולית מכוונת נגד neurofibromas.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Foxchase outbred SCID mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River </td>
<td>#236</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NIH III mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Taconic </td>
<td>#NIHBNX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NOD-SCID&gamma; mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson Laboratories </td>
<td>#005557</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Stripper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>25-056-cl</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vetbond surgical glue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>3M</td>
<td>1469SB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hamilton syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#80030</td>
<td>10 &mu;L volume</td>
</tr>
<tr>
<td>Hamilton syringe needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#7803-05</td>
<td>33 Ga., 0.5 inch, PT4 (custom made)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ear tags</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>National Band and Ear Tag Co.</td>
<td>1005-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ophthalmic ointment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dechra</td>
<td>NDC 17033-211-38</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents

אמנם מסכי במבחנה חיוניים לזיהוי ראשוני של סוכני מועמד טיפולית, הערכה קפדנית של היכולת של התרופה לעכב את צמיחת הגידול חייב להתבצע במודל חיה מתאים. סוג של מודל החיה, כי הוא הטוב ביותר למטרה זו היא נושא לדיון אינטנסיבי. הראיות עולה כי חלק בניסויים פרה בחינת השפעות התרופה על גידולים שמקורם העכברים הטרנסגניים הם חזוי יותר של התוצאה הקלינית 1 ולכן סוכני מועמד טיפולית נבחנים לעתים קרובות במודלים אלו. למרבה הצער, מודלים מהונדס אינם זמינים עבור סוגי גידולים רבים. בנוסף, מודלים מהונדס לעתים קרובות יש מגבלות אחרות, כגון חששות באשר לאופן היטב את הגידול מודלים העכבר מקבילו האנושי שלה, penetrance חלקית של הפנוטיפ הגידול וחוסר יכולת לחזות מתי יהיה לפתח גידולים. כתוצאה מכך, חוקרים רבים משתמשים במודלים xenograft (תאים סרטניים אנושיים מורכבים לעכברים immunodeficient) עבור ניסויים פרה אם מתאים מודלים גידול מהונדס אינם זמינים. גם אם מודלים מהונדס זמינים, הם לעתים קרובות שותפות עם מודלים xenograft כפי שהאחרון להקל נחישות מהירה של טווחי טיפולית. יתר על כן, שותפות זו מאפשרת השוואה של היעילות של הסוכן בגידולים מהונדס ואמיתי תאים סרטניים אנושיים. מבחינה היסטורית, xenografting פעמים רבות שבוצעו על ידי הזרקת תאים סרטניים תת עורי (xenografts חוץ רחמי). טכניקה זו היא המהירה לשחזור, זול יחסית ומאפשר quantitation רציפה של הגידול בתקופה הטיפולי 2. עם זאת, את המרחב התת עורית לא microenvironment נורמלי ביותר שאתות ולכן התוצאות שהושגו עם xenografting חוץ רחמי יכול להיות מטעה בשל גורמים כגון היעדרות של הביטוי איבר ספציפי של רקמת המארח גנים סרטניים. יש ובכך היה מומלץ מאוד מחקרים השתלת חוץ רחמי יוחלף או כהשלמה מחקרים בהם תאים סרטניים אנושיים הם מורכבים לרקמת מוצאם (xenografting orthotopic) 2. לרוע המזל, יישום המלצה זו סוכלה לעתים קרובות על ידי העובדה מתודולוגיות xenografting orthotopic טרם פותחו עבור סוגי גידולים רבים. ממאירה היקפי נדן עצב גידולים (MPNSTs) הם סרקומות אגרסיבי המתרחשות לסירוגין או בשיתוף עם נוירופיברומטוזיס סוג 1 ו - 3 בדרך כלל להתעורר עצב השת 4. כאן אנו מתארים שיטה פשוטה מבחינה טכנית שבה גחלילית בלוציפראז-tagged תאים MPNST האדם xenografted orthopically לתוך עצב השת של עכברים immunodeficient. הגישה שלנו כדי להעריך את ההצלחה של ההליך השתלת בחיות הפרט אקראיות בלתי משוחד הבאים לקבוצות המחקר נדון גם.

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents at JoVE.c

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

שיטה אמינה עבור השתלת בלוציפראז-מתויג האדם ממאיר עצב היקפי נדן תאים סרטניים לתוך עצב השת של עכברים immunodeficient מתואר. השימוש הדמיה פליטת אור להפגין הקמת התקין של שתלי וקריטריונים גידול של הפרדה אקראית של בעלי חיים לקבוצות המחקר נדונות גם.

Orthotopic Xenografting של האדם בלוציפראז-Tagged ממאירה היקפיים נדן בתאי העצב גידול של In vivo בדיקה של סוכני המועמד טיפולית

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Delivery of Therapeutic Agents Through Intracerebroventricular (ICV) and Intravenous (IV) Injection in Mice

Delivery of Therapeutic Agents Through Intracerebroventricular ICV and Intravenous IV Injection in Mice

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

Despite the protective role that blood brain barrier plays in shielding the brain, it limits the access to the central nervous system (CNS) which most ...

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

מיים מודלים של הדמיה חיה של תאים 4D גידול: אינטראקציות microenvironment המשפיעים ממאירה התקדמות

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

רומן ברזולוציה גבוהה<em&gt; בvivo</em&gt; טכניקת הדמיה כדי לחקור את התגובה דינמית של מבנים תוך גולגולתי לצמיחה גידול וTherapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

הזרקת orthotopic של תאי סרטן השד לחלב שומן Pad של עכברים לחקר התפתחות גידול.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Testing the Efficacy of Pharmacological Agents in a Pericardial Target Delivery Model in the Swine

בדיקת יעילותם של סוכני פרמקולוגיים במודל אספקת קרום לב יעד של החזירים

To date, many pharmacological agents used to treat or prevent arrhythmias in open-heart cases create undesired systemic side effects. For example, ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

TRUE Gene Silencing: Screening of a Heptamer-type Small Guide RNA Library for Potential Cancer Therapeutic Agents

ג&#39;ין השתקה נכונה: הקרנת ספריית RNA מדריך Heptamer מסוג Small בתרופות סרטן פוטנציאליות

TRUE gene silencing (termed after tRNase ZL-utilizing efficacious gene silencing) is one of the RNA-directed gene silencing technologies, which utilizes ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

דור של Microtumors שימוש 3D אדם Biogel תרבות מערכת תאי Glioblastoma נגזרות חולות להרכבת פרופיל Kinomic ובדיקת תגובה לתרופה

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...