Name: orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents
Uploaded: 2011-03-07T13:30:00
Duration: 7 min 10 s
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इस काम मस्तिष्क संबंधी रोग और स्ट्रोक के राष्ट्रीय संस्थान (R01 एसएलसी NS048353), राष्ट्रीय कैंसर संस्थान के द्वारा विभाग (एसएलसी के लिए R01 CA122804, R01 CA134773 केविन ए Roth और एसएलसी और KRZ के लिए CA13148-35 के लिए) समर्थित किया गया रक्षा (एसएलसी के लिए X81XWH-09-1-0086). UAB व्यापक कैंसर केंद्र छोटे पशु इमेजिंग साझा सुविधा के संचालन के समर्थन में फंड एक NCI कोर सहायता अनुदान (ई. तीतर, पीआई p30 CA13148-35) द्वारा उपलब्ध कराए गए. हम अलबामा न्यूरोसाइंस खाका कोर केन्द्र (p30 NS57098) और UAB उनकी सहायता के लिए तंत्रिका विज्ञान कोर केन्द्र (p30 NS47466) धन्यवाद. सामग्री केवल लेखकों की ज़िम्मेदारी है और करता है स्वास्थ्य या रक्षा विभाग के राष्ट्रीय संस्थानों के अधिकारी विचार जरूरी नहीं प्रतिनिधित्व करते हैं.

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ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

विस्तृत orthotopic xenografting विधि यहाँ प्रस्तुत है कि हम ST88-14 MPNST कोशिकाओं का उपयोग, एक लाइन है जो व्यापक रूप से इन NF1 जुड़े परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर के अध्ययन में प्रयोग किया जाता है विकसित है. हालांकि, इस पद्धति को आसानी से अन्य MPNST सेल लाइनों के साथ preclinical अध्ययन के लिए अनुकूल है. उदाहरण के लिए, हम भी orthotopic प्रदर्शन किया है xenografting अनुसूचित जनजातियों-26T 10 कोशिकाओं, एक कई मायनों घटनेवाला MPNST और T265-2c 11 कोशिकाओं, जो एक NF1 जुड़े MPNST से निकाली गई है से व्युत्पन्न लाइन के साथ करने के लिए इसी तरह की सफलता है कि हम ST88 के साथ मनाया के साथ, -14 कोशिकाओं. कर कहा है कि, हम ध्यान दें कि हम ST88-14 कोशिकाओं के orthotopic xenografting के लिए यहाँ वर्णन सटीक शर्तों को सीधे अन्य MPNST लाइनों की कलम बांधने का काम के लिए नहीं अपनाया जा सकता है. इसके बजाय, पद्धति का मुख्य मापदंडों empirically प्रत्येक कोशिका लाइन के लिए निर्धारित होना चाहिए. इन मानकों MPNST कोशिकाओं की संख्या शुरू grafted, भ्रष्टाचार के विकास और एक हद तक कम करने के लिए, के लिए समय की अनुमति शामिल हैं, जो मात्रा में ट्यूमर कोशिकाओं को इंजेक्ट कर रहे हैं. एक नई लाइन के लिए इन मानकों की स्थापना करने के लिए, हम 10 3 से 5 x 10 6 ट्यूमर कोशिकाओं के साथ चूहों (समूह 5 प्रति चूहों) के भ्रष्टाचार समूहों, परिमाण के प्रत्येक आदेश (यानी, 10 3 कोशिकाओं, 5 एक्स के लिए दो कक्षों की सांद्रता की जाँच 10 3 कोशिकाओं, 10 4 कोशिकाओं, 5 x 10 4 कोशिकाओं, आदि). ट्यूमर कोशिकाओं (&gt; 10 6) की बड़ी संख्या को एक बड़ी मात्रा में इंजेक्शन होना चाहिए, हमने पाया है कि 5 एमएल से grafted तंत्रिका कोशिकाओं की हानि के बिना इंजेक्शन जा सकता है. हम यह भी पाया है कि अधिक से अधिक 5 x 5 एमएल मात्रा प्रति 6 10 ट्यूमर कोशिकाओं के रूप में denser निलंबन तेजी कतरनी जो ट्यूमर कोशिकाओं को मारता के लिए प्रवण हो इंजेक्शन जा सकता है. हम इन चूहों का पालन करें जब तक प्रत्येक समूह के भीतर कम से कम तीन जानवरों स्पर्शनीय ट्यूमर है, जो बिंदु पर हम उस समूह को समाप्त करने और तंत्रिका histologically की जांच करने के लिए भ्रष्टाचार के विकास की पुष्टि है. सामान्य में, हम कोशिकाओं है कि 30-60 दिनों के भीतर अधिक से अधिक स्वीकार्य ट्यूमर के विकास तक पहुँच जाएगा के एक एकाग्रता की मांग कर रहे हैं, जाहिर है, समय तक पहुँचने के लिए इस बिंदु इंजेक्शन कोशिकाओं की संख्या के आधार पर अलग होगा की आवश्यकता है. और अधिक तेजी से विकास कर सकते हैं यह मुश्किल प्रभावी उपचार सांद्रता को प्राप्त करने के लिए प्रयोग और / की समाप्ति के पहले या प्रयोगों के पाठ्यक्रम पर पर्याप्त bioluminescence इमेजिंग datapoints के संग्रह को रोकने के. एक समय बेशक 60 दिनों की तुलना में अब प्रयोगात्मक मापदंडों बोझल समायोजन करता है और अनावश्यक योजना बनाई प्रयोगों की अवधि prolongs है. अंत में, हम भी ध्यान दें कि हम ST88-14 NIH III के चूहों में grafted 6 tamoxifen के उपचारात्मक प्रभाव का प्रदर्शन कोशिकाओं के साथ इस orthotopic xenografting पद्धति का इस्तेमाल किया है. हम नियमित orthotopic xenografts पर उम्मीदवार चिकित्सात्मक एजेंटों के प्रभाव का आकलन करने के लिए उपयोग तरीकों की एक विस्तृत वर्णन है कि पांडुलिपि में पाया जा सकता है. यह भी दिखा दिया गया है कि neurofibroma कोशिकाओं को सफलतापूर्वक परिधीय तंत्रिका 12 में grafted जा सकता है, सुझाव है कि संशोधनों के साथ, इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित प्रक्रियाओं उम्मीदवार चिकित्सकीय neurofibromas के खिलाफ निर्देशित एजेंटों के साथ preclinical परीक्षण प्रदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Foxchase outbred SCID mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River </td>
<td>#236</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NIH III mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Taconic </td>
<td>#NIHBNX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NOD-SCID&gamma; mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson Laboratories </td>
<td>#005557</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Stripper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>25-056-cl</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vetbond surgical glue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>3M</td>
<td>1469SB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hamilton syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#80030</td>
<td>10 &mu;L volume</td>
</tr>
<tr>
<td>Hamilton syringe needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#7803-05</td>
<td>33 Ga., 0.5 inch, PT4 (custom made)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ear tags</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>National Band and Ear Tag Co.</td>
<td>1005-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ophthalmic ointment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dechra</td>
<td>NDC 17033-211-38</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to inhibit tumor growth must be performed in a suitable animal model. The type of animal model that is best for this purpose is a topic of intense discussion. Some evidence indicates that preclinical trials examining drug effects on tumors arising in transgenic mice are more predictive of clinical outcome1and so candidate therapeutic agents are often tested in these models. Unfortunately, transgenic models are not available for many tumor types. Further, transgenic models often have other limitations such as concerns as to how well the mouse tumor models its human counterpart, incomplete penetrance of the tumor phenotype and an inability to predict when tumors will develop.
Consequently, many investigators use xenograft models (human tumor cells grafted into immunodeficient mice) for preclinical trials if appropriate transgenic tumor models are not available. Even if transgenic models are available, they are often partnered with xenograft models as the latter facilitate rapid determination of therapeutic ranges. Further, this partnership allows a comparison of the effectiveness of the agent in transgenic tumors and genuine human tumor cells. Historically, xenografting has often been performed by injecting tumor cells subcutaneously (ectopic xenografts). This technique is rapid and reproducible, relatively inexpensive and allows continuous quantitation of tumor growth during the therapeutic period2. However, the subcutaneous space is not the normal microenvironment for most neoplasms and so results obtained with ectopic xenografting can be misleading due to factors such as an absence of organ-specific expression of host tissue and tumor genes. It has thus been strongly recommended that ectopic grafting studies be replaced or complemented by studies in which human tumor cells are grafted into their tissue of origin (orthotopic xenografting)2. Unfortunately, implementation of this recommendation is often thwarted by the fact that orthotopic xenografting methodologies have not yet been developed for many tumor types.
Malignant peripheral nerve sheath tumors (MPNSTs) are highly aggressive sarcomas that occur sporadically or in association with neurofibromatosis type 13and most commonly arise in the sciatic nerve4. Here we describe a technically straightforward method in which firefly luciferase-tagged human MPNST cells are orthopically xenografted into the sciatic nerve of immunodeficient mice. Our approach to assessing the success of the grafting procedure in individual animals and subsequent non-biased randomization into study groups is also discussed.

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Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

मज़बूती से immunodeficient चूहों के sciatic तंत्रिका luciferase टैग मानव घातक परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर कोशिकाओं में कलम बांधने का काम के लिए एक विधि का वर्णन है. bioluminescence इमेजिंग के प्रयोग के अध्ययन समूहों में पशुओं के यादृच्छिक अलगाव के लिए ट्यूमर और grafts के मापदंड के समुचित स्थापना का प्रदर्शन भी चर्चा कर रहे हैं.

के लिए मानव luciferase टैग घातक परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर कोशिकाओं के Orthotopic Xenografting Vivo में</emउम्मीदवार चिकित्सीय एजेंटों के> परीक्षण

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

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We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

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के लिए मानव luciferase टैग घातक परिधीय तंत्रिका म्यान ट्यूमर कोशिकाओं के Orthotopic Xenografting Vivo में परीक्षण