Name: orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents
Uploaded: 2011-03-07T13:30:00
Duration: 7 min 10 s
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이 작품은과과 (케빈 A. 로스와 SLC와 KRZ에 CA13148 - 35 SLC에 R01 CA122804, R01 CA134773) 신경계 질환과 뇌졸중의 국립 연구소 (SLC에 R01 NS048353), 국립 암 연구소에 의해 지원되었다 국방 (SLC에 X81XWH - 09 - 1-0086). UAB 종합 암 센터 스몰 애니멀 영상 공유 시설의 운영을 지원하는 자금은 NCI 코어 지원 교부금 (; E. 파트, PI P30 CA13148 - 35)에 의해 제공되었다. 우리는 알라바마 신경 과학 청사진 코어 센터 (P30 NS57098)과 도움을 UAB 신경 과학 코어 센터 (P30 NS47466)를 주셔서 감사합니다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 건강이나 국방부의 국립 연구소의 공식 견해를 대변하지 않습니다.

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관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

여기에 제시 자세한 orthotopic xenografting 방법은 우리가 널리 이러한 NF1 - 관련 주변 신경 칼집의 종양 연구에 사용되는 라인을 ST88 - 14 MPNST 전지를 사용하여 개발된 것이 하나이다. 그러나,이 방법은 다른 MPNST 셀 라인 잠복기 연구 쉽게 적응할 수 있습니다. 예를 들어, 우리는 우리가 ST88과 관찰과 비슷한 성공, STS - 26T 10 세포, NF1 - 관련 MPNST에서 파생됩니다 산발적으로 발생 MPNST 및 T265 - 2C 11 세포에서 파생된 라인 xenografting orthotopic 수행한 -14 세포. , 우리가 ST88 - 14 세포 xenografting orthotopic 여기 설명하는 정확한 조건이 직접 다른 MPNST 라인의 접목을 위해 채택 수 없습니다 갖는 것이라고 말했다. 대신, 방법론의 핵심 매개 변수는 경험적으로 각 세포주에 대한 결정되어야합니다. 이러한 매개 변수가 처음 이식할 MPNST 세포의 수, 낮은 정도 이식 개발과, 허용 시간을 포함, 볼륨이있는 종양 세포가 주입됩니다. 새로운 라인에 대한 이러한 매개 변수를 설정하기 위해, 우리 10월 3일부터 5일까지 X 10 6 종양 세포와 생쥐 (그룹 당 5 생쥐)의 그라 프트 그룹, 진도의 각 순서 (즉, 10 3 셀, 5 x는 세포의 두 농도를 확인 10 3 셀, 10 4 셀, 5 X 10 4 세포 등). 종양 세포 (&gt; 10 6)의 큰 숫자는 더 큰 볼륨에서 주입되어야하며 우리는 최대 5 ML에이 이식할 신경 세포의 손실없이 주입 수있는 것으로 나타났습니다. 우리는 또한 고밀도 suspensions이 종양 세포를 죽이는 전단하는 경향이 점점 증가함에 따라 5 ML 볼륨 당 더 이상 5 개의 X 10 6 종양 세포 주입 수있는 것으로 나타났습니다. 각 그룹 내에서 적어도 세 동물은 우리가 그 그룹을 종료하고 그래프트 성장을 확인하는 histologically 신경을 검토하는 시점에서 만져서 알 수있는 종양을 때까지 우리는이 생쥐를 따르십시오. 일반적으로, 우리는 30~60일 이내에 최대한 허용 종양의 성장에 도달할 것입니다 세포의 농도를 찾고 있습니다, 물론, 시간이이 시점은 주입된 세포의 수에 따라 달라집니다 도달할 필요합니다. 더 빠른 성장은 어려운 실험 및 / 종료하기 전에 효과적인 치료 농도를 달성하거나 실험 과정을 통해 충분한 bioluminescence 이미징 datapoints의 수집을 방지하기 위해 만들 수 있습니다. 시간 코스 이상 육십일보다 실험적인 매개 변수는 다루기 힘든 조정하게 그리고 불필요하게 계획된 실험 기간을 연장. 마지막으로, 우리는 우리가 tamoxifen 6 치료 효과를 입증하기 위해 NIH III 마우스로 이식할 ST88 - 14 세포이 orthotopic xenografting 방법론을 사용한 점에 유의합니다. 우리가 일상적으로 orthotopic xenografts에 후보 치료 대리인의 효과를 평가하는 데 사용하는 방법에 대한 자세한 설명은 그 논문에서 찾을 수 있습니다. 또한 neurofibroma 세포가 성공적으로 수정,이 프로토콜에 제시된 절차 neurofibromas에 대한 감독 후보 치료 요원들과 잠복기 실험을 수행하는 데 사용할 수있는, 그 제안, 말초 신경 12에 이식할 수있다는 증명되었습니다.

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Foxchase outbred SCID mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River </td>
<td>#236</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NIH III mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Taconic </td>
<td>#NIHBNX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NOD-SCID&gamma; mice</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson Laboratories </td>
<td>#005557</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Stripper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>25-056-cl</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vetbond surgical glue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>3M</td>
<td>1469SB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hamilton syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#80030</td>
<td>10 &mu;L volume</td>
</tr>
<tr>
<td>Hamilton syringe needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton Company</td>
<td>#7803-05</td>
<td>33 Ga., 0.5 inch, PT4 (custom made)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ear tags</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>National Band and Ear Tag Co.</td>
<td>1005-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ophthalmic ointment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dechra</td>
<td>NDC 17033-211-38</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents

체외 화면에서 후보 치료 요원의 초기 식별, 종양 성장이 적합한 동물 모델에서 수행되어야합니다 억제하는 약물의 능력의 엄격한 심사를위한 필수 있지만. 이러한 목적에 가장 적합합니다 동물 모델의 유형은 강렬한 토론의 주제입니다. 어떤 증거는 유전자 변형 생쥐에서 발생하는 종양에 대한 약물 효과를 검토 잠복기 재판은 임상 결과 1 개 중 더 예측하고 있으므로 치료 후보 대리인이 자주 이러한 모델 테스트는 것을 나타냅니다. 불행히도, 유전자 변형 모델은 다양한 종양 유형에 사용할 수 없습니다. 또한, 유전자 변형 모델은 종종 등은 인간의 대응, 종양 표현형 및 무능력의 불완전 penetrance은 종양이 개발 시기를 예측하는 방법을 잘 마우스 종양 모델에 같은 문제와 같은 다른 제한이 있습니다. 적절한 형질 종양 모델을 사용할 수없는 경우에는 그 결과, 많은 조사는 잠복기 실험에 대한 이종 이식 모델을 (인간의 종양 세포가 immunodeficient 생쥐에 이식할)을 사용합니다. 유전자 변형 모델을 사용할 경우에도 후자는 치료 범위의 빠른 결정을 촉진로서, 그들은 종종 이종 이식 모델와 제휴하고 있습니다. 또한,이 제휴는 유전자 변형 종양과 진정한 인간의 종양 세포에있는 에이전트의 효율성을 비교하실 수 있습니다. 역사적으로, 자주 (이소성 xenografts) subcutaneously 종양 세포를 주사에 의해 수행되었습니다 xenografting. 이 기술은 신속하고 상대적으로 저렴한, 재현할 수 있으며, 치료 기간이 중 종양 성장을 지속 quantitation 수 있습니다. 그러나, 피하 공간 이소성 xenografting로 얻은 가장 neoplasms 그리고 결과에 대한 일반 microenvironment하지 않습니다 인해 같은 호스트 조직 및 종양 유전자의 기관이 특정 표현의 부재로 요인에 오해하실 수 있습니다. 그것은 따라서 강력하게 이소성 이식 연구가 인간의 종양 세포가 원래 조직 (orthotopic xenografting) 2 융합하는 연구로 대체하거나 보완하는 것이 좋습니다되었습니다. 불행히도,이 권고의 구현은 종종 orthotopic xenografting 방법론이 아직 많은 종양 유형에 대한 개발되지 않은 사실에 의해 저지됩니다. 악성 말초 신경 쉬스 종양 (MPNSTs)는 neurofibromatosis 타입 1 3과 가장 일반적으로 좌골 신경 4 발생과 산발적으로 또는 조합에서 발생하는 매우 공격적인 sarcomas 있습니다. 여기 반딧불 루시페라제 - 태그 MPNST 인간 세포가 orthopically immunodeficient 생쥐의 좌골 신경에 xenografted되는 기술 직접적인 방법을 설명합니다. 개별 동물과 스터디 그룹에 후속이 아닌 편견 임의화에 접목 절차의 성공을 평가하는 우리의 방식도 설명되어 있습니다.

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Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

안정 immunodeficient 생쥐의 좌골 신경에 루시페라제 - 태그 인간의 악성 말초 신경 칼집 종양 세포를 접목하는 방법이 설명되어 있습니다. 스터디 그룹에 동물 임의의 분리를위한 종양 이식과 기준의 적절한 설립을 증명하기 위해 bioluminescence 이미징의 사용도 설명합니다.

대한 인간 루시페라제 태그가 추가된 악성 주변 신경 쉬스 종양 세포 Orthotopic Xenografting 생체내에</em후보 치료 대리점> 테스트

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to ...

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